核酸适配子的结构特征及其对结合性能的影响

核酸适配子是从人工合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选出的生物分子特异性配体,其与靶分子的结合性能类似于抗体,但具有热稳定性、制备方便、易于进行结构修饰等优点,因而广泛应用于生物医药领域的分子检测。核酸适配子的结构直接影响其与靶分子的结合性能,包括一级结构、二级结构、三级结构,以及G—四联体等特殊结构。核酸适配子的高级结构不但受其自身结构特点的影响,也受其周围环境理化因素的影响。深入了解核酸适配子结构特点及其对结合靶标影响,进而进行针对性结构修饰及截短,可获得更优性能的核酸适配子,促进其实际应用,并为分析其作用机制提供依据。基于核酸适配子结构特点而设计的适配子传感器,可获得良好的靶标检测性能。

核酸适配子的研究进展与应用展望

核酸适配子是采用指数富集配体的系统进化(SELEX)技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。核酸适配体由于具有精确识别、易体外合成与修饰等特点,它已在基础研究、临床诊断与治疗以及新药研发等诸多领域展示了广阔的应用前景。鉴于其特有的性质,它们将在环境毒理研究及相关领域,如环境毒素的快速检测、生物体内毒性评价、毒性阻断研究上有着广阔的应用前景。

基于胶体金检测核酸适配子与蛋白相互作用的新方法

基于核酸适配子对靶蛋白的高特异性及胶体金比色法的高度灵敏性,建立了一种分析核酸适配子与靶蛋白亲和力以及简便快速检测蛋白质的新方法.核酸适配子保护的胶体金在高盐条件下可保持稳定,靶蛋白与胶体金竞争结合适配子,使胶体金发生聚沉,呈现颜色变化,可通过检测A520值分析适配子与靶蛋白的亲和力以及蛋白浓度.通过对适配子浓度、靶蛋白浓度、共孵育时间、竞争反应时间和氯化钠浓度等关键因素进行优化,确定了最佳检测条件.

应用核酸适配子检测细胞因子的新方法-ELONA法

以人肿瘤坏死因子 (Humantumornecrosisfactor,hTNF α)特异性的核酸适配子为检测分子建立了酶联寡聚核苷酸吸附试验 (Enzyme linkedOligonucleotideassay ,ELONA)方法 ,用于hTNF α的检测。通过SELEX(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment)方法从随机RNA库中筛选到与hTNF α特异结合的RNA适配子。根据其序列 ,用体外转录方法合成生物素标记的RNA适配子 ,并对其进行了氨基修饰以增加其稳定性。以hTNF α的单克隆抗体为捕获分子 ,生物素标记的hTNF α特异性RNA适配子为检测分子建立了ELONA方法 ,并对这种检测方法的灵敏度、精密度和准确度等进行了分析。同时用ELONA和ELISA方法检测了正常人血清中的hTNF α水平 ,并对检测结果进行比较。结果显示 ,ELONA方法的灵敏度为 10 0pg mL ,具有较好的精密度和准确度。ELONA法的检测结果与ELISA法检测结果基本一致。该方法适用于血清。

适于标记核酸适配子胶体金的制备及性能

为了获得适于标记寡核苷酸适配子的胶体金,对制备工艺条件进行了优化：20 mL 0.1 g/L氯金酸溶液中添加10 g/L柠檬酸三钠500 μL,pH=3.0,初始沸腾时间小于4 min,加入还原剂后反应时间为6 min.通过紫外可见光谱扫描和透射电镜对其性能进行鉴定,获得了分散均匀、直径15～20 nm的胶体金颗粒,可准确标记核酸适配子,且将胶体金标记的链霉素适配子与半抗原小分子链霉素进行反应,可对链霉素进行定性和半定量检测,满足利用胶体金标记适配子检测靶物质的需要.

核酸适配子探针对转移性大肠癌细胞的多靶点成像及其靶标的定量分析

利用核酸适配子对肿瘤细胞的高亲和力靶向识别功能以及量子点的高荧光发射强度和光稳定性等特性,制备了识别不同靶点的核酸适配子探针,将其联合使用实现了对肿瘤细胞的多靶点成像及其靶标的定量分析.使用通过Cell-SELEX技术筛选得到的可特异性识别转移性大肠癌细胞系Lo Vo的7个核酸适配子,分别与量子点QD605偶联制备分子探针.基于流式细胞术的竞争实验结果表明,7个探针可特异性识别靶细胞的不同靶点,相互之间无识别干扰.对靶细胞的荧光成像表明,与单一探针相比,多个探针联合使用可明显提高细胞表面的荧光信号强度,且阳性细胞检出率明显增多,显示出更高的检测灵敏度.使用流式细胞术及荧光成像定量方法分析了7个探针对不同转移特性大肠癌细胞系的识别能力,结果表明,多个探针联合使用可有效评价大肠癌细胞的转移潜能.本研究证实通过多个核酸适配子探针的联合使用可有效提高对靶细胞识别的灵敏度和准确性,为核酸适配子的广泛应用及大肠癌的靶向诊断提供了新的思路和手段.

壳聚糖纳米微粒对靶向转化生子因子-βⅡ型受体核酸适配子的缓释作用及其安全性研究

背景本课题组前期已筛选得到了靶向转化生长因子-β（TGF-β）Ⅱ型受体（TpRⅡ）的核酸适配子S58，并证明S58可抑制TGF-β介导的人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转分化作用。壳聚糖纳米微粒（ CS-NP）已被证实可作为药物载体，但其包埋S58后抑制HTFs增生的有效性和安全性值得关注。目的制备CS（S58）-NP，研究其生物学特性，并观察CS～NP对S58的保护及缓释作用。方法本研究所用细胞由本课题组前期原代培养的HTFs传代而来，取第4-10代对数生长期的细胞用于实验。以S58为实验对象，通过离子交联法制备出不同浓度CS-NP与S58表面电荷比（N／P比）的CS（S58）-NP。应用Zeta粒径分析仪检测CS（S58）-NP粒径及其Zeta电位；用扫描电子显微镜观察粒径的大小、形态及分布情况；采用琼脂糖凝胶电泳法检测CS-NP与S58的结合情况，并评估CS（S58）-NP对核酸酶的抵抗能力；用紫外分光光度计检测不同时间点缓释液PBS中S58的含量，以判断CS（S58）-NP缓释S58的情况；利用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测CS（S58）-NP对HTFs的细胞毒性。结果制备的CS（S58）-NP粒径分布于130～270nnl之间，其Zeta电位分布范围为＋16-＋28mV；扫描电子显微镜下可观察到CS（S58）-NP呈球形，分布均匀，粒径在300nm以内。当CS-NP与S58N／P比例为10、20、30、40时，CS（S58）．NP平均包封率分别为88．9％、89．3％、91．7％、90．5％；加入DNaseI组与无DNaseI组比较，S58经CS-NP包裹后能够明显抵御DNaseI的酶解作用；体外缓释实验发现，CS-NP在PBS中持续缓慢释放S58，随着时间的延长，S58累计释放量增加，以24～36h释放速率最高，96hS58累计释放量为100％。随着CS（S58）-NP浓度的增加，HTFs上清液中LDH相对释放率逐渐增加，差异有统计学意义（F=588．018，P=0．000）。50nmol／LCS（S58）-NP处理HTFs48h时LDH相对释放率最大，为（12．853±0．375）％。结论CS-NP对S58具有保护及缓释作用，其浓度在50nmol／L以下时对HTFs的毒性作用小，具有良好的生物相容性，可用于核酸适配子的载体研究。CS（S58）-NP可用于抑制TGF-β介导的HTFs转分化研究。

转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性

目的:分析转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性。方法:采用荧光显微镜流式细胞术分析W14在25℃和37℃下与靶细胞LoVo的特异结合活性;流式细胞术检测W14在血浆环境下对LoVo细胞的特异识别能力;37℃下W14分别在完全培养基和人血浆中孵育0.5、1、1.5、2、3、4、6 h,琼脂糖凝胶电泳检测W14的生物稳定性;用2、4、8、10μmol/L的W14处理LoVo细胞24、48、72 h,MTS实验测定W14的细胞毒性。结果:W14在不同温度和血浆环境中以及不同温度条件下都能特异性地识别和结合靶细胞LoVo,能稳定地存在于血浆中6 h不发生降解,且对细胞没有明显的毒性作用。结论:转移性大肠癌特异性核酸适配子W14具有良好的适应能力和特异性结合能力,有较好的生物稳定性和低毒性,适应于人体内应用。

核酸适配子在IgE检测中的应用

核酸适配子是一类经SELEX技术筛选出来的寡聚核苷酸,其功能与单克隆抗体类似但在诸多方面明显优于抗体,可用于测定靶物质含量等。免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)是介导过敏反应的关键因子,IgE定量检测是临床诊断过敏性疾病的重要指标。该文主要综述了核酸适配子在IgE检测中的应用。

基于核酸适配子的高灵敏的ATP检测研究

目的:根据ATP核酸适配子与ATP结合的能力强于其互补核酸的原理,构建基于核酸适配子的高灵敏的ATP检测方法。方法:以ATP核酸适配子作为识别分子,对检测的捕获探针固定浓度、杂交时间、ATP反应时间、银染增强时间等进行优化,在优化的反应条件下,对其敏感性、特异性进行评价。结果:在优化的反应条件下,通过对不同浓度的ATP样本进行检测,发现ATP浓度在10-14M至10-9M范围内时,ATP浓度的对数与灰度值的相对强度呈线性关系,相关系数为0.996。并且,在优化的反应条件下,该方法对ATP的检测具有较高的特异性。结论:所构建的基于核酸适配子的ATP检测方法具有灵敏度高、特异性高的优点,可为其他生物分子的检测提供新的思路。

SELEX技术及核酸适配子在临床诊断中的应用前景

指数富集配体的系统进化技术是一种新的组合化学技术,它利用人工合成的随机寡核苷酸文库,通过体外多轮筛选与扩增,获得能与靶物质特异性结合的寡核苷酸适配子。适配子的靶分子广泛,与靶物质结合的亲和力高、特异性强,在制备及稳定性等方面优于抗体。基于适配子的生物芯片、生物传感器、分子信标等检测新技术已初步显示出良好的敏感性和特异性,在人类疾病诊断中具有良好的应用前景。

基于核酸适配子W3量子点探针的转移性大肠癌靶向成像

目的核酸适配子W3偶联量子点QD605制备特异性探针(W3-QD),并对大肠癌细胞以及临床大肠癌组织石蜡切片标本进行靶向成像。方法荧光显微镜分析W3-QD对混合培养细胞中靶细胞LoVo的特异性识别能力;利用W3-QD对不同种类细胞进行特异性成像并扫描定量,同时利用流式细胞术对其进行验证;进一步利用W3-QD对临床大肠癌患者组织标本进行特异性成像。结果 W3-QD能够特异性识别混合细胞培养中的LoVo细胞,并能够对不同种类的细胞进行定量成像,与流式细胞术的结果一致;将W3-QD进一步用于临床患者组织标本上,能对转移性大肠癌患者的癌组织进行靶向成像作用。结论核酸适配子-量子点(W3-QD)探针荧光检测技术可应用于转移性大肠癌患者癌组织的靶向成像。

核酸适配子在消化系统肿瘤诊治的应用研究进展

核酸适配子是一类寡核苷酸配基,由指数富集配体系统进化技术从寡核苷酸文库中筛选合成所得。核酸适配子的配体种类丰富,其亲和力及特异性较蛋白抗体高、性质稳定及合成简便,有望成为生物医药领域的花魁。核酸适配子在疾病尤其是肿瘤诊治的应用中已表现出很大潜力。此文就核酸适配子在消化系肿瘤诊治的应用研究进展作一综述。

核酸适配子在医学中的应用研究

核酸适配子与其靶物质的结合过程类似于抗原抗体反应,凡涉及抗体的领域几乎都可以用核酸适配子代替。与抗体相比核酸适配子具有稳定性好、易于人工合成和修饰、靶分子范围更广、与靶物质结合的特异性和敏感性更强等优点。近年来,核酸适配子已广泛应用于药物研发、基础医学研究、疾病诊断、临床治疗等方面。

从靶标的多样性看核酸适配子在分子识别中的优势与前景

20世纪90年代初,Tuerk等[1]建立了一种新的组合化学技术--指数富集的配体系统进化技术（Systematic evolutionof ligands by exponential enrichment,SELEX）,筛选到噬菌体T4DNA聚合酶的RNA配体,即核酸适配子（aptamer）。核酸适配子能与生物靶分子高特异性和高亲和力结合,

核酸适配子在消化系疾病研究中的应用

核酸适配子是能特异性结合靶分子的单链寡核苷酸配体,通过指数富集的配体系统进化技术从人工合成的单链随机寡核苷酸文库中筛选得到.适配子的功能类似于抗体,但某些特性优于抗体,具有特异性高、亲和力强、靶标范围广、稳定性好、易于修饰、可人工合成等优点,在疾病的诊断和治疗中有良好的应用前景.在消化系统疾病中,适配子在肿瘤标志物、肿瘤治疗、丙型肝炎病毒、肝脏成像等领域的研究应用中已有报道.

核酸适配子及其在阿尔茨海默病研究中的应用

核酸适配子是一类寡核苷酸分子,它可由指数级富集配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选寡核苷酸文库而获得。适配子通过与靶分子特异结合,可起到识别或抑制靶分子生物学活性的作用。近年来,越来越多的适配子不断被应用于阿尔茨海默病等中枢神经系统疾病的研究。本文将对近年来核酸适配子在阿尔茨海默病诊断和治疗的研究进展作一综述。

核酸适配子在肿瘤诊治中的新进展

0引言 1990年Tuerk和Ellington报道了一种在体外应用随机单链寡核苷酸文库筛选、扩增特定配体的技术，这种技术可得到与靶分子具有高亲和力、高特异性结合的寡核苷酸序列，此技术称为指数富集的配体系统进化（SELEX）技术。此后该技术不断得到改良和发展，筛选出多种靶标的特异性适配子，在基础研究、临床诊断、药物研发等方面得以广泛应用，尤其在肿瘤的诊断、靶向药物输送和靶向治疗方面表现出巨大的潜力，本文就核酸适配子在肿瘤诊治中的近期进展综述如下。

NTx特异性核酸适配子的筛选

I型胶原交联氨基末端肽（NTx）是反应骨代谢状况的标志物。研究发现：在骨质疏松、类风湿性关节炎、肿瘤骨转移等疾病中，NTx的表达量升高，且通过尿液排出。本研究以NTx为靶分子，选用ssDNA文库进行适配子筛选，旨在获得一种能够与NTx亲和结合的适配子，对尿液中NTx进行定量检测，进而对骨质疏松、类风湿性关节炎等骨代谢疾病进行评估。