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串联重复核酸序列构建及其杂交信号放大作用 被引量:1
1
作者 彭晓谋 黄仰甦 +2 位作者 顾琳 陈雪娟 高志良 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第1期38-41,共4页
采用交错延伸聚合酶链反应技术将含重复单位的 DNA片段拼接成 4串联重复核酸序列 ,再用重复克隆方式获得含 2 5串联重复核酸序列的重组载体。通过杂交产物直接凝胶电泳和斑点杂交等方法分析其信号放大作用。经凝胶电泳和限制性内切酶分... 采用交错延伸聚合酶链反应技术将含重复单位的 DNA片段拼接成 4串联重复核酸序列 ,再用重复克隆方式获得含 2 5串联重复核酸序列的重组载体。通过杂交产物直接凝胶电泳和斑点杂交等方法分析其信号放大作用。经凝胶电泳和限制性内切酶分析证实 ,2 4串联重复核酸序列构建成功 ,加上插入噬菌粒原有的 1个重复单位 ,使整个重组载体含 2 5个串联重复。凝胶电泳分析显示 ,串联重复核酸序列可与多个次级探针结合。斑点杂交分析显示 ,串联重复核酸序列可使信号放大 ,将检测的敏感性提高约 16倍。串联重复核酸序列具有较好的信号放大作用 ,克隆化后又有利于大量制备和降低成本 。 展开更多
关键词 脱氧核糖核酸 串联重复核酸序列 核酸序列构建 杂交信号 基因
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短串联重复序列的研究进展 被引量:10
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作者 陈雪玲 《医学综述》 2002年第2期72-74,共3页
关键词 核酸重复序列 遗传标记 临床应用 分型
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基于双重CRISPR-Cas12a的新型冠状病毒核酸胶体金检测试纸条的研制 被引量:1
3
作者 黄涛 魏道舜 +5 位作者 钱纯亘 李永聪 刘仲明 李辉军 汪大明 张赛 《检验医学与临床》 CAS 2023年第21期3126-3131,共6页
目的为实现快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2),干预和防止病毒的传播,研制一种基于双重CRISPR-Cas12a的SARS-CoV-2核酸胶体金快速检测试纸条。方法通过设计基于ORF1ab和N基因靶序列内的正反两个依赖原间隔邻近基序(PAM)位点crRNAs,将恒... 目的为实现快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2),干预和防止病毒的传播,研制一种基于双重CRISPR-Cas12a的SARS-CoV-2核酸胶体金快速检测试纸条。方法通过设计基于ORF1ab和N基因靶序列内的正反两个依赖原间隔邻近基序(PAM)位点crRNAs,将恒温扩增技术与CRISPR-Cas12a检测相结合,并结合侧向层析试纸条技术,实现对SARS-CoV-2 ORF1ab和N基因同时扩增与双重CRISPR的可视化检测。结果检测试纸条可在37℃条件下20 min内取得结果,具有较好的灵敏度、特异度及热稳定性。对SARS-CoV-2假病毒的检测灵敏度为250 copy/mL,检测16种其他呼吸道病原体均无交叉反应,在37℃条件下存放8 d仍然具有较好检测效果。临床研究显示,检测SARS-CoV-2总符合率为95.00%(57/60)。结论基于双重CRISPR-Cas12a的SARS-CoV-2核酸胶体金快速检测试纸条提高检测效率和准确度的同时降低了成本,可用于SARS-CoV-2的现场快速检测。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 重组酶聚合酶等温扩增 成簇规律间隔短回文重复序列相关核酸内切酶12a 胶体金 免疫层析 快速检测
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非小细胞肺癌组织中circBIRC6、APPBP2表达及临床预后意义
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作者 陈丽萍 籍强 +5 位作者 陈艳红 史永兴 冯平 林卫佳 项保利 赵建清 《临床肺科杂志》 2024年第5期727-733,共7页
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中环状核糖核酸杆状病毒IAP重复序列6(circBIRC6)、β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2(APPBP2)表达及临床预后意义。方法 收集2018年6月~2020年1月90例在河北北方学院附属第一医院行手术切除的NSCLC组织... 目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中环状核糖核酸杆状病毒IAP重复序列6(circBIRC6)、β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2(APPBP2)表达及临床预后意义。方法 收集2018年6月~2020年1月90例在河北北方学院附属第一医院行手术切除的NSCLC组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测circBIRC6、APPBP2表达,并分析二者与NSCLC患者临床病理特征的关系。通过Pearson相关性分析NSCLC组织中circBIRC6与APPBP2 mRNA表达的相关性,Kaplan-Meier法绘制不同表皮生长因子受体(EGFR)基因突变、TNM分期和circBIRC6、APPBP2 mRNA表达的NSCLC患者生存曲线,多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果 与癌旁组织比较,NSCLC组织中circBIRC6、APPBP2 mRNA表达升高(P<0.05)。NSCLC组织中circBIRC6与APPBP2 mRNA表达呈正相关(r=0.817,P<0.001)。NSCLC患者不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移组织中circBIRC6、APPBP2 mRNA表达比较有差异(P<0.05)。随访3年,90例NSCLC患者总生存率为55.56%(50/90)。EGFR基因突变阳性/阴性NSCLC患者总生存率比较无差异(P>0.05);TNM分期Ⅰ~Ⅱ期NSCLC患者总生存率高于Ⅲ期NSCLC患者(P<0.05);circBIRC6、APPBP2 mRNA高表达组生存率低于circBIRC6、APPBP2 mRNA低表达组(P<0.05)。低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和circBIRC6≥10.97、APPBP2 mRNA≥2.48为NSCLC患者死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=3.586(1.080~11.909)、3.632(1.193~11.057)、3.197(1.060~9.640)、3.223(1.086~9.570)、2.767(1.022~7.492)]。结论 NSCLC组织中circBIRC6、APPBP2 mRNA高表达,与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 环状核糖核酸杆状病毒IAP重复序列6 β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2 临床病理特征 预后
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基于成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子区甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性影响 被引量:1
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作者 陈勤 孙炜 +1 位作者 张所军 李朝曦 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期1343-1346,共4页
目的探讨成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体(CRISPR-dcas9-DNMT3A)介导的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)基因启动子区域DNA甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性... 目的探讨成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体(CRISPR-dcas9-DNMT3A)介导的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)基因启动子区域DNA甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法 CRISPR-dcas9-DNMT3A表达载体通过慢病毒包装感染TMZ耐药细胞系U251-R[U251(中国医学科院基础医学研究所)通过替莫唑胺高浓度反复间歇诱导法诱导产生], 验证其对MGMT启动子区域DNA甲基化程度, MGMT表达水平以及TMZ药物敏感性影响。结果慢病毒感染成功的U251-R细胞, MGMT启动子区域甲基化水平增高[44.7%(17/38)、63.2%(24/38)、77.1%(27/38)比7.9%(3/38), P<0.05], MGMT蛋白表达减少, 细胞对TMZ化疗的敏感性增加(P<0.05)。结论 CRISPR-dcas9-DNMT3A慢病毒感染的U251-R细胞可通过增加其MGMT基因启动子区域甲基化水平减少MGMT蛋白表达从而增加化疗敏感性。 展开更多
关键词 成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体 DNA甲基化 O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶 胶质瘤 替莫唑胺
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规律簇集间断的短回文重复序列及其相关核酸酶9系统应用于糖尿病领域的研究进展
6
作者 杨帆 张丽 王双 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1144-1146,共3页
规律簇集间断的短回文重复序列及其相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)系统是一种新型的基因编辑工具,可同时研究多个基因的功能及相互关系,已在多种疾病中显示出巨大的潜在价值。与其他基因编辑技术,如锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活样核酸酶(TALE... 规律簇集间断的短回文重复序列及其相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)系统是一种新型的基因编辑工具,可同时研究多个基因的功能及相互关系,已在多种疾病中显示出巨大的潜在价值。与其他基因编辑技术,如锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活样核酸酶(TALENs)相比,CRISPR/Cas9更简单、高效。随着CRISPR/Cas9系统技术的广泛应用,在糖尿病领域有不少相关研究出现。本文从基础到临床对CRISPR/Cas9在糖尿病领域的研究进展作文献回顾,期待为相关人员提供参考。 展开更多
关键词 规律簇集间断的短回文重复序列及其相关核酸酶9 基因编辑 糖尿病
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因子Ⅷ基因内二核苷酸重复序列在检测血友病A携带者中的意义 被引量:2
7
作者 龙桂芳 朱春江 +2 位作者 刘敬忠 梁燕 谢建生 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期511-513,共3页
目的 应用FⅧ基因内含子 13(CA)n及内含子 2 2 (GT)n(AG)n两位点多态性的单倍体分析 ,对血友病A(HA)家系进行携带者的检测。方法 采用PCR法扩增FⅧ基因内 13(CA)n及 2 2(GT)n(AG)n的多态性片段 (Amp FLP) ,银染色法显示扩增结果。 结... 目的 应用FⅧ基因内含子 13(CA)n及内含子 2 2 (GT)n(AG)n两位点多态性的单倍体分析 ,对血友病A(HA)家系进行携带者的检测。方法 采用PCR法扩增FⅧ基因内 13(CA)n及 2 2(GT)n(AG)n的多态性片段 (Amp FLP) ,银染色法显示扩增结果。 结果  35个HA家庭中 11个有家族史 ,此 11个HA家系有 2 1位女性 (包括 1例女性患者 ) ,检出携带者 14人 ,正常 4人 ,不能确定 3人 ,8个家系可用此法诊断 ,可诊断率 72 .7%。结论 银染色法与Amp FLP结合 ,在保证HA携带者检出结果可靠的同时 ,更具有省时、操作简单。 展开更多
关键词 血友病A 诊断 核酸重复序列 多态现象
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基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法的建立 被引量:9
8
作者 方强 夏惠 +5 位作者 陈兴智 徐家森 王雪梅 齐文娟 孙新 沈继龙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第7期767-769,共3页
目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准... 目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准品。优化PCR反应体系及条件,并验证该方法的灵敏度及特异性。结果所构建的pMD18/Tox529bp重组质粒经测序正确,建立的PCR方法最低可检出10个拷贝的目的基因,除对弓形虫基因组DNA扩增出特异性条带外,用该方法对健康志愿者全血、正常小鼠全血、间日疟原虫、恶性疟原虫及结核杆菌基因组DNA均未扩增出特异性条带。结论已建立了一种具有较高灵敏度和特异性的弓形虫PCR诊断方法 ,有望应用于人和动物弓形虫感染的筛查、临床诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 弓形虫病 重复序列 核酸 聚合酶链反应
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血友病甲患儿及其家系凝血因子Ⅷ基因内含子重复序列多态性研究
9
作者 刘方 滕智平 +4 位作者 孙金英 王彬 王勇玲 邓焕霞 刘桂兰 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期686-688,共3页
目的 探索一种更简便 ,更特异的方法 ,用于血友病甲的基因诊断及其家系的遗传咨询。方法 应用聚合酶链反应 (PCR)和双链异源泳动分析 (HMA)对我国 10个血友病甲患儿及其家系成员中FⅧ基因内 13内含子二核苷酸重复序列 (CA)n多态性和... 目的 探索一种更简便 ,更特异的方法 ,用于血友病甲的基因诊断及其家系的遗传咨询。方法 应用聚合酶链反应 (PCR)和双链异源泳动分析 (HMA)对我国 10个血友病甲患儿及其家系成员中FⅧ基因内 13内含子二核苷酸重复序列 (CA)n多态性和等位基因进行分析。结果  10个家系中 ,男性 2 0例 ,女性 10例 ,共 4 0条X染色体 ,经PCR扩增、琼脂糖电泳均可显示出 14 0~ 15 0bpDNA条带 ,男性呈现单一的DNA条带 ,女性则根据等位基因的不同 ,出现两条DNA条带 (杂合子 )或者一条DNA条带 (纯合子 )。结论 二核苷酸重复序列广泛分布于中国人群FⅧ基因中 ,重复序列的多态性作为第二代遗传标志 ,结合等位基因分析和HMA杂交电泳泳动分析 ,可明确鉴别出血友病甲基因的携带者 。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 异源双链分析 核酸重复序列 儿童 基因多态性 血友病A 凝血因子Ⅷ
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脊髓小脑共济失调3型ICARS评分相关因素分析 被引量:6
10
作者 顾卫红 王国相 +4 位作者 王康 孙瑞华 杨斯柳 郝莹 王桂芳 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2008年第2期139-141,共3页
目的探讨国际协作共济失调评估量表(ICARS)评估脊髓小脑共济失调3型患者的相关因素。方法应用ICARS对29例经基因学检查明确诊断的脊髓小脑共济失调3型家系先证者进行评估,通过统计学方法分析其发病年龄、病程和SCA3/MJD基因胞嘧啶-腺嘌... 目的探讨国际协作共济失调评估量表(ICARS)评估脊髓小脑共济失调3型患者的相关因素。方法应用ICARS对29例经基因学检查明确诊断的脊髓小脑共济失调3型家系先证者进行评估,通过统计学方法分析其发病年龄、病程和SCA3/MJD基因胞嘧啶-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)重复数目与ICARS总评分的相关性。结果简单线性回归分析结果显示,ICARS总评分与病程呈正相关关系(r=0.576,P=0.004),回归方程为Y=18.992+2.282X2(病程)(F=10.020,P=0.004)。多重线性回归分析结果显示,ICARS总评分与发病年龄、病程和CAG重复数目呈正相关关系,回归方程为Y=-110.744+0.974X1(发病年龄)+2.310X2(病程)+1.446X3(CAG重复数目)(F=6.690,P=0.002);3项因素的标准化偏回归系数分别为0.681、0.527和0.575。结论脊髓小脑共济失调3型患者的ICARS总评分与发病年龄、病程和CAG重复数目呈正相关关系。ICARS为评估共济失调的严重程度提供了可靠的方法。 展开更多
关键词 脊髓小脑变性 重复序列 核酸 神经病学检查
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雄激素受体基因第一外显子CAG重复序列长度多态性与痤疮的相关性 被引量:5
11
作者 庞莹 何春涤 +9 位作者 刘勇 朱红 魏彬 王凯波 赵宁 王雅坤 肖汀 姜奕 魏华臣 陈洪铎 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期796-799,共4页
目的探讨人雄激素受体基因第一外显子CAG重复序列长度多态性与痤疮发生之间的关系。方法研究对象为中国东北地区238例痤疮患者和207例健康对照,抽取外周血后分离纯化出基因组DNA,采用微卫星扫描(STRs)方法分析CAG重复序列的多态性... 目的探讨人雄激素受体基因第一外显子CAG重复序列长度多态性与痤疮发生之间的关系。方法研究对象为中国东北地区238例痤疮患者和207例健康对照,抽取外周血后分离纯化出基因组DNA,采用微卫星扫描(STRs)方法分析CAG重复序列的多态性。结果男性病例组和对照组的CAG重复均数分别为22.70±3.09和23.48±2.83,两组之间差异有统计学意义(P=0.046);将对照组中CAG重复次数的中位数23作为分割点分组比较,长/短CAG片段在男性病例和对照中的分布差异有统计学意义,携带有CAG短片段的男性较携带CAG长片段的男性患痤疮的风险性明显增加(OR值2.07;95%可信限为1.21—3.54)。女性病例组和对照组的CAG重复均数分别为23.41±2.87和23.85±0.21,两组之间差异无统计学意义(P=0.115);按中位数分组比较长/短CAG片段在女性病例和对照中的分布差异有统计学意义,携带有CAG短片段的女性患痤疮的风险性明显增加(P=0.013,OR值2.05;95%可信限为1.18~3.56)。结论雄激素受体基因第一外显子CAG的重复次数与中国东北地区痤疮的发生有关,CAG重复次数少的男性个体患痤疮的风险性增加,雄激素受体基因第一外显子CAG的重复次数可作为痤疮的遗传易感标志之一。 展开更多
关键词 痤疮 寻常 受体 雄激素 重复序列 核酸 多态性 限制性片段长度
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基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序在脊髓小脑共济失调动态突变检测中的应用研究 被引量:2
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作者 陈园园 郝莹 +4 位作者 张瑾 张鑫 谢坤铭 丁铭 顾卫红 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期192-197,共6页
目的探讨基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序在脊髓小脑共济失调(SCA)动态突变检测中的准确性和稳定性。方法采用基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序对14例脊髓小脑共济失调患者(包括3例SCA2型、2例SCA7型、7例SCA8型和2例SCA17型)致... 目的探讨基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序在脊髓小脑共济失调(SCA)动态突变检测中的准确性和稳定性。方法采用基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序对14例脊髓小脑共济失调患者(包括3例SCA2型、2例SCA7型、7例SCA8型和2例SCA17型)致病基因三核苷酸重复序列进行检测。结果 3例SCA2基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段胞嘧啶-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)重复序列分别为31、30和32次,每例样本取3个菌落进行克隆测序,CAG重复序列分别为37/40/40、37/38/39和38/39/40次;2例SCA7基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段CAG重复序列分别为57和34次,1例取3个菌落进行克隆测序,CAG重复序列为69、74和75次,1例为45次;7例SCA8基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段胞嘧啶-胸腺嘧啶-腺嘌呤(CTA)/胞嘧啶-胸腺嘧啶-鸟嘌呤(CTG)重复序列分别为99、111、104、92、89、104和75次,克隆测序分别为97、116、104、90、90、102和76次;2例SCA17基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,短片段/扩展片段CAG重复序列为37/50和36/45次,扩展片段分别取3和2个菌落进行克隆测序,CAG重复序列为51/50/52和45/44次。结论基于毛细管电泳的片段分析在判读重复序列时存在一定偏倚,但可以预估,可重复性佳,不影响基因检测结果的判定;而克隆测序具有明显不稳定性,尤其是SCA2和SCA7基因,可能与其重复序列组成较为单纯有关。克隆测序不适宜作为检测基因动态突变的方法,更不适宜作为判定动态突变序列组成的标准。 展开更多
关键词 脊髓小脑共济失调 重复序列 核酸 核苷酸类 基因 突变 电泳 琼脂凝胶 序列分析
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河南地区SCA1、SCA2和SCA3患者临床特征及CAG三核苷酸变异的研究 被引量:1
13
作者 李学 王泽帅 +1 位作者 马建军 王冰 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第36期46-47,共2页
目的探讨河南汉族人群中脊髓小脑共济失调(SCA)1、2、3型患者临床表现与基因突变的特征。方法应用PCR、琼脂糖凝胶电泳和基因测序,对河南汉族76例SCA患者SCA1、SCA2和SCA3基因的CAG重复数目进行测定。结果 26例患者被检出,占34.2%,其中S... 目的探讨河南汉族人群中脊髓小脑共济失调(SCA)1、2、3型患者临床表现与基因突变的特征。方法应用PCR、琼脂糖凝胶电泳和基因测序,对河南汉族76例SCA患者SCA1、SCA2和SCA3基因的CAG重复数目进行测定。结果 26例患者被检出,占34.2%,其中SCA1型2例,CAG重复数分别为48和52次;SCA2型3例,CAG重复数分别为51、48和53次;SCA3型21例,CAG重复数为70~79次。SCA3基因中在重复起始序列的第3、4、6拷贝位置出现变异,CAG分别由CAA、AAG和CAA替代。结论 SCA3型可能是河南地区汉族SCA人群中最常见亚型,CAG重复序列的异常扩增是SCA患者基因突变的重要原因。 展开更多
关键词 脊髓小脑共济失调 基因分型 重复序列 核酸
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亨廷顿舞蹈病一家系两例报道并文献复习 被引量:1
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作者 赵红 刘赞华 +3 位作者 李淑敏 蔺建文 赵红玲 王苏平 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2019年第20期2502-2505,共4页
亨廷顿舞蹈病(HD)是一种常染色体显性的神经退行性遗传病,由IT15基因外显子CAG三核苷酸重复突变所致,临床表现为不自主运动和认知功能障碍,影像学检查发现有尾状核萎缩,额角扩大,部分伴有皮质萎缩,基因检测是该病重要的诊断方式。对于... 亨廷顿舞蹈病(HD)是一种常染色体显性的神经退行性遗传病,由IT15基因外显子CAG三核苷酸重复突变所致,临床表现为不自主运动和认知功能障碍,影像学检查发现有尾状核萎缩,额角扩大,部分伴有皮质萎缩,基因检测是该病重要的诊断方式。对于有明确阳性家族史和典型临床表现,本病的诊断率较高;但对早期或不典型HD的诊断,临床常出现漏诊和误诊。为探讨HD的诊治,本文对1例临床疑似HD患者及2个家族成员进行影像学及IT15基因的CAG重复序列进行分析,并结合最新文献,阐述HD的发病机制及最新治疗进展,以提高对该病的认识。HD目前仍无有效治疗手段,但基因治疗为该病提供了新的方向。 展开更多
关键词 舞蹈症 亨廷顿舞蹈病 重复序列 核酸 基因检测 病例报告 文献复习
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变性高效液相色谱法产前诊断18三体综合征
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作者 黄肖利 梅端容 +3 位作者 伍严安 陈豪 黄毅 陈紫瑄 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第17期2267-2268,共2页
目的用变性高效液相色谱法(DHPLC)分析1例18三体综合征胎儿的双链DNA,快速产前诊断18三体综合征。方法根据所设计的引物对18号染色体D18S1002、D18S51和D18S499共3个短串联重复序列(STR)位点进行PCR扩增,然后在50℃柱温条件下用DHPLC对... 目的用变性高效液相色谱法(DHPLC)分析1例18三体综合征胎儿的双链DNA,快速产前诊断18三体综合征。方法根据所设计的引物对18号染色体D18S1002、D18S51和D18S499共3个短串联重复序列(STR)位点进行PCR扩增,然后在50℃柱温条件下用DHPLC对PCR扩增产物进行检测和分析。结果健康人D18S51的DHPLC峰形呈现两个高低相同的波峰,18三体综合征胎儿D18S51的DHPLC峰形呈现两个高低不同的波峰,其中一个波峰高度接近为另一个波峰的2倍。健康人D18S1002的DHPLC峰形呈现一个波峰,18三体综合征胎儿D18S1002呈现两个高低不同的波峰,其中一个波峰高度接近为另一个波峰的2倍。健康人D18S499的DHPLC峰形呈现一个波峰,18三体综合征胎儿D18S499呈现两个高低不同的波峰,其中一个波峰高度接近为另一个波峰的2倍。结论健康人染色体核型有两条18号染色体,而18三体综合征患者染色体核型则有3条18号染色体,结合3个STR位点的DHPLC波峰数量及波峰高度,即可对患者做出确切的诊断。该方法灵敏度高、特异性强、简便、快捷等,适合广泛应用于18三体综合征的临床诊断。 展开更多
关键词 唐氏综合征 重复序列 核酸 色谱法 高压液相 产前诊断
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中华民族D3S1358、vWA基因座的空间地理分布
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作者 武红艳 柯伟力 王克杰 《现代医药卫生》 2012年第23期3535-3536,3539,共3页
目的运用地理信息系统(GIS)的理论和方法分析中国87个人群常染色体D3S1358、vWA基因座的空间群体遗传结构,为研究中华民族的起源、人口迁移、考古以及民族融合等群体遗传学和人类学问题提供分子生物学依据。方法应用主成分分析(PCA)方法... 目的运用地理信息系统(GIS)的理论和方法分析中国87个人群常染色体D3S1358、vWA基因座的空间群体遗传结构,为研究中华民族的起源、人口迁移、考古以及民族融合等群体遗传学和人类学问题提供分子生物学依据。方法应用主成分分析(PCA)方法及GIS中的空间差值分析(SDA)技术,从基因频率矩阵中提取综合指标,并采取可视化技术来反映中国人群2个短串联重复序列(STR)位点的空间群体遗传结构。结果中国人群D3S1358、vWA基因座的主成分空间分析结果划分出三大区域,且显示出从东南向西北递增的趋势,在每个区域内又有不同划分小区域。结论中国人群2个STR位点的空间群体遗传结构呈现明显的地理遗传梯度变异性,不同群体之间存在明显差异。 展开更多
关键词 地理学 信息系统 基因型 序列分析 遗传学 群体 重复序列 核酸 微卫星重复 主成分分析空间群体遗传结构
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铜绿假单胞菌280株基因分型及耐药性分析 被引量:14
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作者 陶春梅 龚雅利 《安徽医药》 CAS 2019年第5期1032-1035,I0006,共5页
目的分析临床感染铜绿假单胞菌的基因型别、耐药特点以及对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法收集重庆市沙坪坝区陈家桥医院2011年6月至2017年7月共6年分离的280株铜绿假单胞菌,主要来源于呼吸内科和ICU病房的痰液标本,进行ERIC-PCR(肠... 目的分析临床感染铜绿假单胞菌的基因型别、耐药特点以及对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法收集重庆市沙坪坝区陈家桥医院2011年6月至2017年7月共6年分离的280株铜绿假单胞菌,主要来源于呼吸内科和ICU病房的痰液标本,进行ERIC-PCR(肠杆菌基因间保守重复序列聚合酶链式反应)分型及药敏试验分析,并检测12种主要的碳青霉烯酶基因的携带情况。结果分型结果表明主要存在A、G、H三种优势型别的流行,细菌对抗生素的耐药率普遍低于全国耐药监测数据,对碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南的平均不敏感率分别为10.4%和7.1%。在35株碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中,碳青霉烯酶IMP和VIM的携带率分别为8.57%和5.71%。结论肺部感染以及A、G、H三种优势型别细菌是铜绿假单胞感染防控的重点对象,耐碳青霉烯类抗生素菌株中主要携带IMP和VIM两种常见的碳青霉烯酶基因,但阳性率较低。但碳青霉烯类抗生素耐药率逐年升高,仍应引起重视。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 重复序列 核酸 肠杆菌属 聚合酶链反应 β内酰胺抗药性 基因 MDR
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CRISPR/Cas9基因编辑系统应用于非人灵长类细胞及胚胎Rb1基因编辑的研究 被引量:1
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作者 怀思远 褚楚 +4 位作者 曹静 赵志飞 吴璇 冀天楠 李建雄 《解放军医学院学报》 CAS 2018年第8期707-712,共6页
目的探索聚簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑系统对于食蟹猴细胞及胚胎基因组视网膜母细胞瘤抑癌基因(Rb1)的编辑效率,旨在进一步建立视网膜母细胞瘤模型。方法查阅RB1突变数据库(http://rb1-lsdb.d-lo... 目的探索聚簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑系统对于食蟹猴细胞及胚胎基因组视网膜母细胞瘤抑癌基因(Rb1)的编辑效率,旨在进一步建立视网膜母细胞瘤模型。方法查阅RB1突变数据库(http://rb1-lsdb.d-lohmann.de),确定视母细胞瘤发生发展相关Rb1基因外显子区主要有8号外显子;利用DNAman检测人类与食蟹猴基因组中Rb1基因中与是否存在单核苷酸多态性(SNP);通过http://crispr.cos.uni-heidelberg.de/index.html设计并合成sgRNA;采用CRISPR/Cas9基因编辑系统转染食蟹猴成纤维细胞,并提取转染后细胞基因组以检测合成的sgRNA敲除效率;酶切实验检测转染的细胞是否发生突变,并利用单克隆分析测定具体敲除效率。进一步利用显微操作技术注射sgRNA和Cas9 nuclease混合物(RNP)入单细胞胚胎,检测胚胎水平Rb1基因编辑效率。结果 RNP转染后的食蟹猴成纤维细胞提取基因组检测,发现其中有75%的细胞发生基因突变,且基因编辑类型多样,以碱基缺失突变为主;在胚胎水平上获取4-细胞期胚胎,检测单个卵裂球基因组序列发现,存在突变的胚胎占所有胚胎的36.4%,其中纯合突变比例为18.2%,嵌合突变比例同为18.2%。利用软件预测脱靶位点12个,进行序列测定,结果未发现脱靶。结论在非人灵长类细胞及胚胎水平上,CRISPR/Cas9基因编辑系统对于食蟹猴Rb1基因编辑有效,并且敲除效率较高,进一步利用基因编辑方法建立视网膜母细胞瘤模型研究中,可以作为有效的基因编辑手段。本研究得到的食蟹猴胚胎Rb1基因的编辑效率及胚胎囊胚率为建立视网膜母细胞瘤模型提供了参考。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤 聚簇规则间隔短回文重复序列/相关核酸酶9 基因敲除 打靶效率 脱靶效率
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FMR1基因突变与女性生殖能力和妊娠结局 被引量:3
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作者 王美雲 周建政 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2021年第1期64-69,共6页
近年来原发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)、不明原因的早期自然流产、复发性流产、胚胎停育等生育能力低下和反复生育失败的疾病越来越多,女性生殖健康也日益受到关注。脆性X智力低下1(fragile X mental retardati... 近年来原发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)、不明原因的早期自然流产、复发性流产、胚胎停育等生育能力低下和反复生育失败的疾病越来越多,女性生殖健康也日益受到关注。脆性X智力低下1(fragile X mental retardation 1,FMR1)基因参与胚胎发育的基因调控过程,该基因的突变可引起多种女性生殖健康疾病,且与绝经年龄相关。因此FMR1基因的筛查对协助诊疗女性生殖健康疾病有重要的临床价值,也为疾病的早期预防、诊断和治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 原发性卵巢功能不全 重复序列 核酸 突变 脆性X智力低下蛋白质 流产 自然 绝经 过早 脆性X智力低下1基因
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Profile of candidate microsatellite markers in Sebastiscus marmoratus using 454 pyrosequencing 被引量:2
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作者 SONG Na 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2017年第1期198-202,共5页
Sebastiscus marmoratus is an important sedentary ovoviparous fish distributed in near-shore coastal waters from the coast of China to Japan. Candidate S. marmoratus microsatellite markers were developed in the present... Sebastiscus marmoratus is an important sedentary ovoviparous fish distributed in near-shore coastal waters from the coast of China to Japan. Candidate S. marmoratus microsatellite markers were developed in the present study using 454 pyrosequencing, and the marker profile was analyzed. A total of 2 000 000 raw sequence reads were assembled to reduce redundancy. Among them, 1 043 dinucleotide, 925 trinucleotide, 692 tetranucleotide, and 315 pentanucleotide repeats were detected. AC repeats were the most frequent motifs among the dinucleotide repeats, and AAT was the most abundant among the trinucleotide repeats. AAAT, ATAG, and ATCC were the three most common tetranucleotide motifs, and AAGAT and AATAT were the most dominant pentanucleotide motifs. The greatest numbers of loci and potentially amplifiable loci were found in dinucleotide repeats, whereas trinucleotide repeats had the fewest. In summary, a wide range of candidate microsatellite markers were identified in the present study using a rapid and efficient 454 pyrosequencing approach. 展开更多
关键词 marbled rockfish microsatellite 454 FLX pyrosequencing genomic DNA
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