核黄素光化学法诱导淋巴细胞凋亡及其机制研究

目的探讨核黄素光化学法(RF-PRT)灭活淋巴细胞的效果及潜在机制。方法汇集ABO/D淋巴细胞,分离,并用RF-PRT或UV处理或不处理。处理后,CCK-8检测经植物血凝素刺激下淋巴细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期或细胞凋亡。蛋白质印迹测定GADD45α,p38和c-Jun N端激酶(JNK)蛋白表达水平的变化。评估GADD45α,p38和JNK对细胞凋亡的影响。结果 RF-PRT显著抑制淋巴细胞增殖和G1阻滞。与UV组或对照组比较,RF-PRT组淋巴细胞凋亡率显著增加,RF-PRT对淋巴细胞的灭活作用与GADD45α表达上调,激活p38和JNK信号通路有关。而siGADD45α抵消了RF-PRT的作用。结论 RF-PRT通过促进GADD45α表达,激活p38和JNK信号通路抑制淋巴细胞增殖并诱导凋亡。

核黄素光化学法病毒灭活对新鲜血浆活性影响的探讨

目的探讨核黄素光化学法病毒灭活对新鲜血浆活性的影响,为临床合理应用病毒灭活血浆提供理论参考依据。方法收集血液中心提供的健康献血者新鲜血浆样本100份。以核黄素光化学法对100份新鲜血浆进行病毒灭活,分别检测100份血浆样本在病毒灭活处理前后的APTT、FIB、总蛋白(Tg)和FⅧ含量。将数据进行对比分析。结果新鲜血浆在核黄素光化学法病毒灭活后与未作病毒灭活处理相比较,APTT时间延长14.93s,差异有统计学意义(P<0.05);FIB含量减少0.94 mg/m L,差异有统计学意义(P<0.05);Tg含量减少3.39 g/L,差异无统计学意义(P>0.05);FⅧ含量减少0.26 IU/m L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论核黄素光化学法病毒灭活在灭活病毒、提高输血安全的同时导致血浆中活性成分有一定程度降低,临床上在应用灭活血浆时应注意适当增加血浆用量以提高血浆输注疗效。

荧光定量PCR法评价核黄素光化学法灭活全血病毒的效果

目的 了解荧光定量PCR法（qPCR）评价核黄素光化学法灭活含疱疹病毒8型（HHV-8）全血的效果。方法 在常规检测合格的全血中,分别加入含105、106、107 copy/mL HHV-8的淋巴细胞BC-3和核黄素,以40-160J/mLRBC的紫外光辐照进行病毒灭活。以HHV-8ORF26为中心设计4对PCR套式扩增引物（产物长度为2 998、1 252、561、206bp）,构建和优化PCR预扩增条件,以qPCR检测灭活前、后4个片段在不同辐照条件下的扩增产物经梯度稀释的Ct值,计算相应的病毒滴度ΔLog值,以评估对病毒核酸的损伤情况。结果 核黄素光化学法对全血中HHV-8核酸有损伤作用,PCR预扩增HV-1（2 998bp）片段可用于评估辐照后HHV-8的病毒核酸损伤情况。病毒滴度ΔLog值随着病毒滴度、辐照强度和扩增片段长度的增加,最高达1.9Log值。结论 在HHV-8高流行区缺乏常规血液筛查HHV-8方法情况下,可采用核黄素光化学法进行体外灭活,降低其传播的可能性。

核黄素光化学法对人外周血淋巴细胞灭活作用的研究

目的研究核黄素光化学法对人外周血淋巴细胞的增殖及细胞因子分泌活性的抑制作用,探讨该方法对淋巴细胞凋亡的诱导作用。方法实验分为实验组:从随机采集的全血中分离淋巴细胞,将其悬浮于核黄素终浓度为100μM的自体血浆中,注入PVC袋,在波长为420 nm的可见光下照射,总照射剂量为40 J/cm2;对照组:使用相同来源的淋巴细胞,悬浮于不含核黄素的自体血浆中,不进行光照处理。用植物凝集素(PHA)同步刺激两组淋巴细胞,用BrdU细胞增殖检测试剂盒检测淋巴细胞的增殖活性,并计算核黄素光化学法对淋巴细胞的增殖抑制率;用酶联免疫试剂盒检测淋巴细胞细胞因子的分泌量;使用Annexin V-PE细胞凋亡试剂盒和流式细胞技术检测细胞凋亡。结果与对照组比较,经过核黄素光化学法处理的实验组淋巴细胞对PHA刺激的增殖抑制率为(94.69±7.61)%;实验组淋巴细胞接受PHA刺激后,细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-12的分泌量与对照组比较分别降低了(89.54±22.75)%、(77.83±22.3)%和(88.57±15)%,IL-4的分泌量较对照组差异不明显;流式细胞术检测结果表明,实验组绝大多数淋巴细胞发生了凋亡,其早期凋亡率和晚期凋亡或坏死率均明显高于对照组。结论核黄素光化学法能够抑制人外周血淋巴细胞的增殖和一些细胞因子的分泌,同时可诱导淋巴细胞凋亡。该方法有望成为预防TA-GvHD的新途径。

利用动物模型评价核黄素光化学法灭活红细胞病毒的效果

本研究旨在评估核黄素光化学法(核黄素终浓度为150μmol/L,光照时间为20分钟,光照强度为40 000Lux)灭活红细胞中病毒的有效性。将HCMV作为指示病毒加入红细胞中。30只BALA/c小鼠设为实验组(n=10)、病毒对照组(n=10)、可见光对照组(n=5)和红细胞对照组(n=5);实验组小鼠注射经核黄素光化学法灭活处理的红细胞;病毒对照组小鼠注射未经灭活处理的红细胞;可见光对照组小鼠注射经可见光照射的红细胞;红细胞对照组小鼠注射正常红细胞。取各组小鼠进行体外病毒分离,PCR检测HCMV UL83基因,间接免疫荧光鉴定PP65抗原。结果表明:病毒对照组和可见光对照组病毒分离、PCR及间接免疫荧光检测均为阳性,而实验组和红细胞对照组所有结果均为阴性。结论:核黄素光化学法灭活红细胞病毒是有效的。

核黄素光化学法处理对全血中淋巴细胞功能的影响

目的 研究核黄素光化学法在一定剂量条件下处理全血后对全血中淋巴细胞功能的影响。方法 随机选取多人份当天采集的全血,实验组全血中加入核黄素溶液,终浓度160 μmol/mL,并注入光照血袋中,全血厚度约1.3 mm,放置灭活仪中接受18 J/cm^2的紫外照射剂量;对照组使用相同来源的全血,不加核黄素不进行紫外照射。分离提取全血中淋巴细胞,用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖活性,计算其增殖抑制率;用终浓度为1 μg/mL的植物血凝素(PHA)同步刺激两组淋巴细胞后,检测其细胞因子的分泌量。结果 核黄素光化学法处理后,淋巴细胞增殖抑制率为(74.18±14.00)%;未经PHA刺激,淋巴细胞中IFN-γ、IL-8、IL-12、IL-10、IL-13、IL-4细胞因子分泌量分别下降了63%、35%、61%、42%、77%、8%;加PHA刺激后,淋巴细胞中IFN-γ、IL-8、IL-12、IL-10、IL-13、IL-4细胞因子分泌量分别下降了72%、43%、40%、78%、82%、2%;两组IL-4的分泌量无统计学差异。结论 核黄素光化学法在一定的剂量条件下处理全血,会抑制全血中淋巴细胞的增殖功能和细胞因子分泌功能,但并没有完全丧失,仍可保持一定的功能活性,对未来利用核黄素光化学法建立血液体外循环处理回输技术有一定的参考意义。

核黄素和紫外线光化学法处理血浆制品中中东呼吸综合征冠状病毒的灭活效果观察

中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）被认为是对血液制品安全性有潜在危害的一种病毒。核黄素和紫外线光化学法能够灭活血液相关病原体，使之失去传染性，且不会破坏血液制品的质量。本研究报道核黄素和紫外线光化学法对人类血浆中MERS-CoV病毒的灭活效果。