指甲游离缘及毛发中核DNA抽提方法的探讨

目的探讨指甲游离缘及毛发中抽提核DNA的方法,并对抽提结果进行评估。方法采集5名健康成人志愿者指甲游离缘、发根及发干样本各30份。分别用无水乙醇和蒸馏水浸泡样本,去除外源性DNA。每份指甲游离缘样本为3mg指甲游离缘碎片;每份发根或发干样本各为3段0.3～0.5cm发根或发干。分别采用酚氯仿法、Chelex-100法和QIAamp DNA Investigator试剂盒法抽提3种样本的核DNA,并运用PCR扩增对抽提DNA进行评估。扩增片段位于不同染色体上,长度分别为188、248、300和741bp。PCR扩增产物用1.8%琼脂糖凝胶电泳检测。为探讨样本量对抽提结果的影响,任意取指甲游离缘1、3和5mg,发根及发干各1、3和5根重复实验,并比较结果。初步探讨增加Taq酶量对黑色素抑制的消除作用。结果在3种抽提方法中长度为248bp的引物扩增成功率均为最高。指甲游离缘样本使用试剂盒法抽提核DNAPCR扩增成功率显著高于酚氯仿法及Chelex-100法(P<0.05)。发干样本使用试剂盒法抽提核DNAPCR扩增成功率显著高于酚氯仿法(P<0.05)。发根样本3种方法抽提核DNAPCR扩增成功率差异无统计学意义(P>0.05)。指甲游离缘样本的PCR扩增成功率显著高于发根及发干样本(P<0.05),发根和发干样本的PCR扩增成功率差异无统计学意义。试剂盒法抽提指甲游离缘、发根和发干核DNAPCR扩增成功率随样本量增加而提高。酚氯仿法和Chelex-100法抽提发根或发干样本核DNAPCR扩增成功率随样本量增加呈下降趋势,提示可能存在黑色素抑制作用。增加Taq酶量对于消除黑色素抑制有一定作用。结论①3种抽提方法均能成功从指甲游离缘及毛发中抽提到核DNA,试剂盒法成功率最高。②指甲游离缘、发根和发干均可作为核DNA采样源,从指甲游离缘抽提DNA成功率最高。