发育期牙根端复合体细胞条件培养液对脂肪干细胞增殖、分化的影响

目的:初步探讨发育期根端复合体(developing apical complex,DAC)条件培养基(DAC conditioned medium,DACCM)对脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)增殖和分化的影响。方法:取出生20 d SD大鼠分离其下颌磨牙DAC,并采用组织块联合酶消化法培养DAC细胞;经HE、免疫组化染色鉴定DAC后,收集原代培养的DAC细胞上清,分别用过滤和不过滤的方式制备不同条件培养基并用其对ADSCs进行培养;分别于培养3、5、7 d各时间点,MTT法检测ADSCs增殖能力;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒及反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ADSCs的ALP蛋白活性及其基因的表达水平。结果:免疫组化染色显示,培养的DAC细胞CK-14、vimentin均为阳性表达;DACCM-未滤培养组ADSCs的增殖活性、ALP蛋白活性以及ALP基因表达水平均高于单纯α-MEM培养组和DACCM-过滤培养组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:不经过滤的DAC细胞上清制备的条件培养基对ADSCs增殖、分化的促进作用更明显。

不同诱导环境对牙周膜干细胞膜片生物学特性的影响

目的:探讨不同诱导体系对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)膜片的构建以及生物学性能的影响。方法:分离培养大鼠发育期根端复合体(developing apical complex,DAC)细胞,隔天更换收集细胞培养液上清并过滤冻存(DAC条件培养液)。分离培养人PDLSCs,并扩增构建PDLSCs细胞膜片,利用DAC条件培养液和成骨诱导液分别诱导PDLSCs膜片5、10、15 d。通过倒置显微镜、HE染色、免疫组化、RT-PCR检测经过诱导的人PDLSCs细胞膜片形态学和功能学变化。结果:与成骨诱导相比,DAC诱导后膜片含有丰富短棒状细胞和大量细胞外基质(extracellular matrix,ECM),细胞膜片ALP和periostin表达丰富,体外成骨基因表达更高。结论:与成骨诱导体系相比,DAC诱导体系更适合PDLSCs膜片的形成。