应用16SrDNA基因芯片检测4种产黑色素感染根管可疑致病菌

目的:研制快速检测牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)、牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,Pe)、中间普氏菌(Prevotella intermedia,Pi)和变黑普氏菌(Prevotella nigrescens,Pn)的芯片系统。方法:利用Genebank中细菌16SrDNA保守区序列,设计一对通用引物;通过已知Pg、Pe、Pi和Pn的16SrDNA可变区序列,设计合成对应的特异性寡核苷酸探针。先用通用引物PCR扩增所有标准菌株的DNA并作荧光标记,PCR产物和已点样有Pg、Pe、Pi和Pn4种探针的芯片杂交,并用荧光扫描仪进行分析。结果:芯片上的Pg、Pe、Pi和Pn4种探针只与相对应的Pg、Pe、Pi和Pn的PCR产物反应,而与其他标准菌株的PCR产物无反应。结论:应用16SrDNA基因芯片可以准确检测Pg、Pe、Pi和Pn,快速、灵敏、特异性高,有望在临床上得到应用。

基因芯片技术分析慢性根尖周炎患牙产黑色素菌

目的:利用基因芯片技术分析慢性根尖周炎患牙根管中牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,Pe)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)和中间普氏菌(Prevotella intermedia,Pi)三种产黑色素菌(black-pigmented bacteria,BPB)。方法:收集76例慢性根尖周炎患牙根管细菌学样本,经DNA抽提,PCR荧光标记后,与点样有Pe、Pg和Pi三种菌特异寡核苷酸探针的基因芯片进行杂交,用激光共聚焦扫描仪分析杂交结果,最后进行统计分析。结果:慢性根尖周炎患牙中Pe、Pg和Pi三种菌的检出率分别为48.68%,32.89%,42.11%。Pe和Pg两菌同时被检出具有统计学意义(p<0.05)。Pe和Pg与瘘管显著相关(p<0.01),Pe和Pg同时感染与瘘管、脓肿显著相关(p<0.01)。结论:产黑色素菌与慢性根尖周炎关系密切,Pe、Pg和瘘管、脓肿显著相关。用基因芯片技术分析慢性根尖周炎患牙中细菌具有快速、灵敏、高效的特点,而且可以通过增加基因芯片上探针数目扩展被检出菌的种类。