sⅡ系列缺失启动子载体的构建

为检测新型sⅡ根部特异启动子的功能,采用PCR的方法,扩增胡萝卜根部特异启动子sⅡ基因的启动子序列,得到该启动子-650bp和-1000bp区域片段。在启动子片段的5’和3’端分别引入了克隆所需的限制性酶切位点,分别定向克隆到经改造的质粒载体pBI121和pBITM2MARⅡ中,取代原有的组成型启动子CaMV35S,获得了四个含有胡萝卜根部特异启动子sⅡ基因不同缺失片段区域与GUS报告基因的融合检测载体。该系列载体通过农杆菌介导转入胡萝卜,检测sⅡ不同长度片段启动子在胡萝卜根部驱动报告基因的表达情况,分析该启动子的功能。

南方根结线虫食道腺表达基因7E12影响植物的初步研究

南方根结线虫(Meloidogyne incognita)是一种重要的植物寄生线虫,它的食道腺产生的分泌蛋白是对寄主造成危害的致病因子。鉴定这些编译分泌蛋白的基因特性,是认知南方根结线虫对植物致病性或寄生性机理的关键所在。通过使用烟草根部特异表达基因TobRB7的△0.3缺失的启动子,替换植物过表达载体pBI-121的CMV(烟草花叶病毒)35S启动子,构建了南方根结线虫食道腺细胞表达的基因7E12的植物表达载体pBI-Trp-7E12和pBI-Trp。pBI-Trp在本研究中作为空白对照使用。利用农杆菌侵染花粉管通道法把这2个载体转化了模式植物拟南芥。通过利用卡那霉素抗性培养基对已转化的拟南芥进行筛选,获得了T1代转基因植株。这为研究鉴定该基因的特性奠定了基础,以利于进一步研究南方根结线虫对植物的致病性机理。