栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能及突触可塑性的影响机制

目的研究栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能和突触可塑性的影响机制。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、栝楼桂枝颗粒组(3.6g/kg),每组6只。采用线栓法构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型,造模后2h灌胃相应药物或生理盐水,每日1次,连续7d。末次给药后,评价大鼠神经功能[以改良神经功能缺损评分(mNSS)和转角百分率计],检测大鼠缺血侧大脑皮层神经元凋亡率,生长相关蛋白43(GAP43)、微管相关蛋白2(MAP2)阳性表达情况,神经元核抗原(NeuN)、神经突触素1(Syn-1)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脑源性神经营养因子(BDNF)、原肌球蛋白激酶受体B(TrkB)蛋白以及NeuN、Syn-1、PSD-95mRNA表达情况。结果与模型组比较,栝楼桂枝颗粒组大鼠mNSS、转角百分率、神经元凋亡率均显著降低(P<0.01);GAP43呈弱免疫反应性,MAP2呈中等免疫反应性;NeuN、Syn-1、PSD-95、PPARγ、BDNF、TrkB蛋白以及Syn-1、NeuN、PSD-95mRNA表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论栝楼桂枝颗粒可通过激活BDNF/TrkB信号通路来提高突触可塑性,从而减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能损伤。

指纹图谱与化学计量学结合优选柴胡桂枝颗粒水提工艺

目的优选柴胡桂枝颗粒水提工艺。方法以加水量、煎煮时间、煎煮次数为影响因素,建立柴胡桂枝汤HPLC指纹图谱,通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统匹配23个共有峰,并确定其中10个化合物。采用SPSS17.0软件,对共有峰峰面积进行主成分分析,其综合得分作为评价指标。结果最佳水提工艺为10倍量水浸泡30 min,提取3次,每次40 min,主成分分析得分为4.478 8。结论该方法稳定可行,可为柴胡桂枝颗粒工业化生产提供依据。

桂枝颗粒治疗感冒(外感风寒表虚证)有效性和安全性临床研究

目的:评价桂枝颗粒治疗感冒(外感风寒表虚证)临床应用的有效性和安全性。方法:采用区组随机、双盲双模拟、阳性药对照、多中心平行对照设计方法。将符合感冒(外感风寒表虚证)诊断标准的受试者按3∶1比例随机分为试验组和对照组,其中试验组为360例,对照组为120例,共480例。试验组服用桂枝颗粒,对照组服用表虚感冒颗粒,疗程为3天。对治疗前后中医证候疗效、疾病综合疗效、单项症状疗效进行评价,同时观察相关安全性指标,并记录不良事件。结果:中医证候疗效、疾病综合疗效统计分析结果显示,试验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),试验组疗效优于对照组。中医单项症状疗效统计分析显示,主症"恶风发热""汗出"和次症"咳嗽"的疗效比较,差异均有统计学意义(P<0.05),试验组疗效优于对照组;主症"鼻塞"和次症"头痛""流清涕""肢体酸痛"在两组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。试验组和对照组均无不良事件发生。FAS分析和PPS分析结论一致。结论:桂枝颗粒治疗感冒(外感风寒表虚证)疗效确切,临床服用安全。具有较好的临床应用前景。

多指标综合评分法优选柴胡桂枝颗粒提取工艺

[目的]正交实验法优选柴胡桂枝颗粒处方药材的提取工艺。[方法]以柴胡皂苷a、芍药苷、黄芩苷及出膏率为检测指标,采用正交实验法优选柴胡等药材的乙醇回流提取工艺。[结果]柴胡桂枝颗粒乙醇回流提取的最佳提取工艺为10倍量80%乙醇提取3次,每次提取2 h。[结论]优选的柴胡桂枝颗粒提取工艺稳定可行,适合于工业化大生产。

栝楼桂枝颗粒抗缺血性脑卒中大鼠神经元及原代海马神经元凋亡研究

目的:观察栝楼桂枝颗粒(GLGZG)抗缺血性脑卒中大鼠神经元及原代海马神经元凋亡的作用,探讨其作用机制,为其治疗脑卒中提供依据。方法:建立谷氨酸诱导原代海马神经元兴奋性毒性损伤模型、大鼠脑缺血再灌注损伤模型,采用MTT、LDH法测定GLGZG对原代海马神经元细胞活性和LDH活性的影响,采用Western Blot、Real-time PCR检测GLGZG对原代海马神经元及大鼠海马组织中Caspase-3、Bcl-2、Bax m RNA及蛋白表达水平的影响。结果:用不同浓度(100μg/m L、200μg/m L、300μg/m L)的GLGZG分别作用于原代海马神经元24 h,3个剂量组细胞存活率较谷氨酸组细胞存活率升高,其中GLGZG 200μg/m L、300μg/m L 2组细胞活力显著升高(P<0.05,P<0.01);3个剂量组LDH活力较谷氨酸组显著降低,其中GLGZG 200μg/m L、300μg/m L 2组可显著抑制谷氨酸损伤神经元LDH的释放(P<0.05,P<0.01)。GLGZG 200μg/m L、300μg/m L 2组干预后,与谷氨酸组比较可显著降低原代海马神经元Caspase-3 m RNA、Bax m RNA的表达(P<0.05,P<0.01),升高Bcl-2 m RNA的表达(P<0.05),蛋白表达的趋势与m RNA相似;GLGZG组与模型组比较,可降低大鼠海马组织Caspase-3、Bax蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),升高Bcl-2蛋白的表达(P<0.01)。结论:GLGZG对缺血性脑卒中大鼠及原代海马神经元有一定的保护作用,其保护作用与其抗细胞凋亡作用有关。

栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞兴奋性毒性损伤的影响

目的观察栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)兴奋性毒性损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用谷氨酸诱导PC12兴奋性毒性损伤造模。将细胞随机分为正常组、谷氨酸组和栝楼桂枝颗粒低(200μg/m L)、中(400μg/m L)、高(800μg/m L)剂量组,MTT法和LDH法检测PC12活力;Caspase-3活性检测法、Annexine V/PI双染色法检测细胞凋亡,Western blot和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax蛋白和m RNA表达。结果与谷氨酸组比较,MTT法栝楼桂枝颗粒各剂量组PC12活力升高,LDH法栝楼桂枝颗粒各剂量组细胞活力降低;Annexine V/PI双染色法栝楼桂枝颗粒各剂量组PC12凋亡率降低;Caspase-3活性检测法栝楼桂枝颗粒各剂量组Caspase-3活性降低;RT-PCR及Western blot检测栝楼桂枝颗粒各剂量组Bax表达降低、Bcl-2表达升高。结论栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导PC12兴奋性毒性损伤有一定的保护作用,其保护作用与其抗细胞凋亡作用有关。

HPLC法测定柴胡桂枝颗粒中桂皮醛和桂皮酸的含量

目的为准确测定柴胡桂枝颗粒中桂皮酸和桂皮醛两种成分的含量,采用HPLC法建立桂皮酸和桂皮醛含量测定的简便方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-phenyl（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-1.0%冰醋酸（30∶70）,流速：1 ml/min,柱温：35℃。结果桂皮酸和桂皮醛的线性范围分别是2.024-12.144μg/ml和8.480-50.880μg/ml,平均回收率为99.73%,RSD=1.83%（n=6）和100.09%,RSD=1.39%（n=6）。结论本方法具有样品处理方法简便、结果准确、色谱分离度和重复性好的特点,可用于柴胡桂枝颗粒的质量控制。

枳实薤白桂枝颗粒对异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠血液流变学和抗氧化作用的影响

目的研究枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血模型大鼠血流变指标和抗氧化作用的影响,为新药开发和临床应用提供药效学依据。方法经标准II导联心电图筛选合格的雄性SD大鼠,随机分成正常组、模型组、枳实薤白桂枝颗粒高剂量组、中剂量组和低剂量组、阳性对照组。各组先连续7天灌胃给予相应药物,从第5天开始,除正常组外其余各组同时腹腔注射异丙肾上腺素(5 mg/kg),连续3 d,制备心肌缺血模型。检测大鼠血液流变学指标变化,分光光度法检测血中MDA、SOD、GSHPx和NO水平。结果与正常组相比,模型组大鼠的全血粘度、血浆粘度和纤维蛋白原水平明显升高,MDA和GSH-Px水平显著升高,SOD、NO水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,各治疗组上述指标均有不同程度改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论枳实薤白桂枝颗粒可能通过清除氧自由基、提高机体抗氧化能力,从而改善心肌缺血大鼠血液粘浓凝聚的状态,起到保护心肌的目的 。

枳实薤白桂枝颗粒的制备工艺研究

通过回流提取、减压浓缩、干燥、赋形剂的选择、矫味剂的选择以及临界相对湿度的测定等方面对枳实薤白桂枝颗粒的制备工艺进行研究.结果表明,制备工艺合理、稳定、可行.

枳实薤白桂枝颗粒对异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠抗氧化作用的影响

目的研究枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血模型大鼠抗氧化作用的影响,为新药开发和临床应用提供药效学依据。方法经心电图筛选合格的雄性SD大鼠,连续灌胃给予不同浓度的枳实薤白桂枝颗粒7天,并从第5天开始同时腹腔注射异丙肾上腺素(5 mg/kg),连续3天,制备心肌缺血模型。分光光度法检测血中MDA、SOD、GSH-Px和NO水平。结果与正常组相比,模型组大鼠MDA和GSH-Px水平显著升高,SOD、NO水平明显降低,有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,各治疗组上述指标均有不同程度改善,有统计学意义(P<0.05)。结论枳实薤白桂枝颗粒可能通过清除氧自由基、提高机体抗氧化能力,从而起到保护心肌的目的。

HPLC法测定栝楼桂枝颗粒中芍药苷含量

目的建立HPLC方法测定栝楼桂枝颗粒芍药苷含量。方法采用Kromasil C18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸(16∶84)为流动相,流速1.0m L·min-1。结果制剂中芍药苷与其他组分均达到基线分离,加样回收率平均值为100.5%,RSD为1.8%。结论所建立的方法简便、快速、准确,可用于栝楼桂枝颗粒质量控制。

桂枝颗粒质量标准的改进

目的为改进桂枝颗粒的质量标准提供参考。方法改进方中桂枝、甘草的定性鉴别项,增加白芍的TLC定性鉴别;增加桂枝中桂皮醛的含量测定项,其采用高效液相色谱法,色谱柱为Lichrospher C18(150×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(35∶65),流速为1.0mL·min^-1,检测波长为290nm,柱温30℃。结果薄层色谱鉴别专属性强,重复性良好。桂皮醛的线性范围为0.0024~0.0240mg·mL^-1(r=0.9997),平均回收率为100.7%,RSD2.8%(n=6)。结论本方法具有操作简便、分析快速、准确等优点,可用于桂枝颗粒质量标准的改进。

桂枝颗粒成型辅料优选分析

目的:为了对桂枝颗粒成型辅料进行优选。方法:通过实验,考察了不同种类和不同比例的桂枝颗粒吸湿性、成型性及溶化性的特点。结果:乳糖和糊精的组成是最优辅料。结论:桂枝颗粒提取物干膏与乳糖和糊精按照合理比例制成的颗粒具有易制粒、性质稳定、不易吸湿、流动性好、易溶解的特点。

栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织Ca^(2+)/CaMKⅡ/CREB信号通路的影响

目的观察栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织Ca^(2+)/Ca MKⅡ/CREB信号通路的影响,探讨其作用机制。方法采用线栓法致大脑中动脉栓塞建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型。SD大鼠随机分为假手术组、模型组和中药组,中药组给予栝楼桂枝颗粒药液灌胃,连续7 d。采用改良的神经功能缺损评分法进行大鼠神经功能评分,测定大鼠脑梗死面积,采用透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构,RT-PCR检测大鼠脑组织钙活化调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)、c AMP反应元件蛋白(CREB)的基因表达,Western blot检测大鼠缺血侧脑组织p-CREB、p-CaMKⅡ、Ca MKⅡ、CREB和钙调蛋白(Ca M)的蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损和脑梗死面积评分显著升高,海马神经元超微结构改变明显,细胞高度水肿、细胞核和细胞质收缩,p-CREB蛋白表达降低,Ca M蛋白表达升高;与模型组比较,中药组大鼠神经功能评分和脑梗死面积显著降低,缺血区神经元超微结构改善,细胞损伤减少,p-CREB和p-CaMKⅡ蛋白表达升高,Ca M蛋白表达降低。结论栝楼桂枝颗粒能改善模型大鼠神经功能,抑制神经细胞凋亡,其作用机制可能与促进CREB、Ca MKⅡ的磷酸化,抑制Ca M的表达有关。

UHILIC-MS/MS同时测定栝楼桂枝颗粒中22个氨基酸的含量

目的建立一种超高效亲水作用色谱串联三重四极杆质谱法(UHILIC-MS/MS)对栝楼桂枝颗粒中22个氨基酸类成分(亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨酸等)进行含量测定。方法采用超高效亲水作用色谱串联三重四极杆质谱法,正离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定。色谱条件:采用亲水作用色谱柱,Acquity BEH(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以(0.25%甲酸+2 mmol·L^(-1)甲酸铵)水(A)和乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,进样量:1μL;流速:0.4 mL·min^(-1),柱温:45℃。结果在所设定的色谱条件下,6 min内完成对栝楼桂枝颗粒中上述22个成分的含量测定,在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.9953),回收率和RSD分别在96.12~103.93%和1.49%~2.94%范围内,精密度、重复性、稳定性考察均符合分析要求。3批样品含量测定结果发现22个氨基酸中,瓜氨酸(Cit)、γ-氨基丁酸(GABA)、脯氨酸(Pro)、天冬酰胺(Asn)、精氨酸(Arg)含量较高,达到0.3 mg·g^(-1)以上。结论超高效亲水作用色谱串联三重四极杆质谱法定量分析方法简便、快捷、准确,分离效果较好,为揭示栝楼桂枝颗粒中氨基酸类成分的物质基础奠定实验依据。

基于网络药理学技术研究桂枝颗粒治疗鼻炎的作用机制

目的基于网络药理学技术研究桂枝颗粒治疗鼻炎的作用机制。方法利用TCMSP数据库,筛选条件为口服生物利用度≥30%、类药性≥0.18,得到桂枝颗粒的药效成分及其潜在靶点。利用GenCards数据库查找鼻炎相关靶点,STRING数据库、Cytoscape3.7.0软件绘制蛋白互作网络,匹配分析发现桂枝颗粒治疗鼻炎的关键药效成分和潜在作用靶点,ClueGO插件对潜在作用靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路分析,Cytoscape3.7.0软件对结果进行可视化处理。结果筛选得到82种关键药效成分,包括黄酮类、萜类、香豆素、生物碱、植物甾醇,以及22个潜在作用靶点,包括AR、ALOX5、AHR、CAT、CD40LG、CRP、DUOX2、EGFR、GSTM1、HMOX1、ICAM1、IFNG、MAPK1、MAPK14、MAPK3、MAPK8、MPO、PPARG、PGR、STAT3、TNF、VEGFA,主要涉及93个生物过程,与9条信号通路相关。结论桂枝颗粒可能通过多成分-多靶点介导多条信号通路发挥治疗鼻炎的效果。

HPLC法测定栝楼桂枝颗粒中芍药苷含量

目的 建立栝楼桂枝颗粒中芍药苷含量的测定方法.方法 采用高效液相色谱法测定芍药苷的含量：色谱柱为Hypersil ODS C18柱（250mm×4.60mm,5μm）;流动相为乙腈-水（81：19）;流速1.0mL·min-1;检测波长为233nm;柱温30℃;进样量为10μL.结果 HPLC法测定芍药苷含量,芍药苷在0.1～2.5μg范围内线性关系良好,平均回收率为100.26%,RSD为2.86%.结论 该方法简便可行、重复性好,可用于该制剂中芍药苷的质量控制.

栝楼桂枝颗粒质量标准研究

目的:研究并建立栝楼桂枝颗粒的质量标准。方法:采用薄层色谱法对处方中的天花粉、白芍、桂枝和甘草这四味中药进行鉴别,采用高效液相色谱法测定制剂中9种成分的含量。流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;所使用的色谱柱为Diamonsil C_(18)柱(4.6mm×250mm,5μm);柱温:30℃,流速为0.8mL/min,检测波长为254nm。结果:天花粉、白芍、桂枝和甘草的薄层色谱斑点清晰,分离度好,9种指标成分在各自浓度范围内均与其峰面积具有优良的线性关系。加样回收率均在97.06%~99.58%之间(RSD=1.18%~1.95%,n=6)。结论:所建立的质量标准可用于栝楼桂枝颗粒的质量控制,确保其临床疗效。

RRLC-MS/MS法测定栝楼桂枝颗粒中γ-氨基丁酸和瓜氨酸含量

目的采用快速液相色谱-串联质谱法（RRLC-MS/MS）测定栝楼桂枝颗粒中γ-氨基丁酸和瓜氨酸含量。方法采用RRLC-MS/MS法,以极性AQ-C18柱为色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水（5∶95）为流动相。质谱采用电子喷雾离子源（ESI）进行离子化,正离子模式下采集,选择以多反应监测（MRM）对这2种氨基酸的母离子及子离子进行检测,三重四级杆质谱进行定量分析。结果γ-氨基丁酸与瓜氨酸在0.265 0~10.60μg/m L和0.019 6~9.800μg/m L范围内与峰面积呈良好线性关系,平均样品加样回收率分别为99.4%和102.4%,RSD%分别为2.24%和1.85%。结论 RRLC-MS/MS法测定栝楼桂枝颗粒中γ-氨基丁酸和瓜氨酸的含量,方法简便、准确、稳定,重复性好。

柴胡桂枝颗粒质量标准研究

目的:建立柴胡桂枝颗粒质量标准。方法:采用薄层色谱法对处方中的君药柴胡进行定性鉴别;采用高效液相色谱法,色谱柱为Welch Ultimate XB-C18(250×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸(47:53),流速1.0 mL?min-1,检测波长280 nm,柱温25℃,对处方中黄芩的有效成分黄芩苷进行含量测定。结果:本品中柴胡定性鉴别薄层色谱特征明显,专属性强;有效成分黄芩苷含量测定专属性强,稳定性、重复性好,平均回收率为100.15%,RSD为1.22%(n=6)。结论:该方法简便、准确、重复性好,可作为柴胡桂枝颗粒的质量控制。