桂楼复方对子宫腺肌病异位内膜细胞迁移和侵袭的影响研究

背景子宫腺肌病(AM)是妇科常见的疑难病,但其具体机制尚未明确。中医药治疗AM有一定优势,前期研究显示,桂楼复方宫内缓释系统可明显降低AM模型大鼠子宫内膜细胞增殖、侵袭能力。目的探讨桂楼复方对子宫腺肌病异位内膜细胞(AMDC)迁移、侵袭的影响,并研究其对Rho/ROCK信号通路的影响。方法本研究于2021年10月—2023年4月在山东中医药大学附属医院实验中心完成。使用CCK-8法检测AMDC细胞活力并筛选最佳药物浓度。设置空白组,使用桂楼复方(50、100 mg/L)处理AMDC,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,免疫印迹法Western Blotting)/实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2在蛋白和mRNA水平的表达情况。Rescue实验中使用激动剂U-46619(1μmol/L)和桂楼复方(100 mg/L)处理AMDC,Western Blotting法检测RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达改变情况。结果与空白组比较,100 mg/L桂楼复方干预后AMDC细胞存活率未明显降低,差异无统计学意义(P>0.05),是不影响细胞活性的最佳药物浓度。选取50、100 mg/L桂楼复方进行后续实验。与空白组比较,桂楼复方50 mg/L、100 mg/L组AMDC迁移、侵袭能力受到抑制(P<0.001),RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白及mRNA表达水平下调(P<0.001),U-466191μmol/L组RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达上调(P<0.001)。与U-466191μmol/L组比较,U-466191μmol/L联合桂楼复方100 mg/L组RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达下调(P<0.001)。空白组与桂楼复方50 mg/L、100 mg/L组RhoB的蛋白及mRNA表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论桂楼复方可有效抑制AMDC的迁移、侵袭能力,不影响细胞活性的最佳药物浓度为100 mg/L,桂楼复方可下调RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白及mRNA表达水平,并可逆转U-46619对RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表达水平的上调作用,从而抑制AM病局部异位病灶的持续进展,其作用可能与调控Rho/ROCK通路密切相关。

重庆桂楼食品股份有限公司

重庆桂楼食品股份有限公司是1952年成立的国营涪陵肉联厂．经2002年6月和2004年5月两次改制而成的股分制企业。公司注册资本3010万元．法定代表人余明。目前，公司主要从事牲畜定点屠宰和肉食品加工销售业务．是涪陵区政府确定的涪陵城区唯一的生猪（牛、羊）定点屠宰场。

五桂楼

五桂楼位于宁波市梁弄镇学堂弄。建于清嘉庆十二年（1807年）,是诸生黄澄量的藏书楼,聚书五万余卷,有＂浙东第二藏书楼＂之称。现为省重点文保单位。黄氏上代有兄弟五人,同科中举,故称＂五桂楼＂。建筑占地面积107平方米,坐北朝南,三间二层楼,通面宽10.30米。勾连搭屋顶,呈众字形,有暗间起防漏作用。楼前有庭院,深8.6米。登五桂楼眺望,可一览四明七十二峰,故五桂楼又名七十二峰草堂。

栝楼桂枝汤联合康复训练治疗脑卒中偏瘫效果

目的探讨栝楼桂枝汤联合常规康复训练对脑卒中痉挛性偏瘫疗效、认知功能、运动功能影响。方法将医院收治的150例脑卒中痉挛性偏瘫患者平均分为两组,对照组给予常规康复训练,治疗组给予栝楼桂枝汤结合常规康复训练。比较两组患者的疗效、认知功能、运动功能。结果治疗组总有效率(86.67%,65/75)高于对照组(72.00%,54/75)(P<0.05)。治疗前,两组患者的WMS-RC、WSCT和FMA评分相比无明显差别(P>0.05);治疗后,治疗组组患者WMS-RC、WSCT和FMA评分比对照组均有所改善(P<0.05)。结论栝楼桂枝汤可提高脑卒中痉挛性偏瘫患者的疗效,同时可改善患者认知功能、运动功能。

瓜楼桂枝汤结合任务导向训练对脑卒中上肢运动功能与自理能力影响研究

目的探究瓜楼桂枝汤结合任务导向训练对脑卒中患者上肢运动功能与自理能力影响。方法研究合计纳入81例脑卒中后上肢功能障碍患者,均由医院2019年1月—2020年11月收治,采取随机数字表法将其分为两组,对照组41例常规治疗同时进行任务导向训练,观察组40例在对照组治疗基础上联合瓜楼桂枝汤治疗,比较两组患者临床疗效、治疗前后中医症状(上肢麻木、上肢疼痛、上肢肌痉挛、上肢肌无力等)积分以及神经功能指标变化、脑血管动力学指标变化、上肢表面肌电图均方根值(RMS)与协调收缩率(CCR)变化、运动活动日志(MAL)评分变化及Wolf运动功能测试(WMFT)评分变化、加拿大作业活动测量表(COPM)评分变化、改良Barthel指数(MBI)评分变化、患者满意率情况。结果观察组患者治疗有效率(95.00%,38/40)高于对照组(80.49%,33/41)(P<0.05);治疗前,两组患者上肢麻木、上肢疼痛、上肢肌痉挛、上肢肌无力等中医症状积分、神经营养因子(NGF)及硫化氢(H_(2)S)、神经元特异性淅烯醇化酶(NSE)等神经功能指标、颈动脉血流速度以及血流量、舒张压与临界压差值及脑血管外周阻力、动态阻力等脑血管血流动力学指标、上肢表面肌电图均方根值(RMS)与协调收缩率(CCR)、MAL及WMFT、 COPM及Barthel指数等指标比较(P>0.05),治疗后各组患者上肢麻木、上肢疼痛、上肢肌痉挛、上肢肌无力等中医症状积分、NGF、H_(2)S、NSE、颈动脉血流速度以及血流量、舒张压与临界压差值及脑血管外周阻力、动态阻力、RMS及CCR、MAL及WMFT、 COPM及Barthel指数等指标均改善,观察组患者治疗后上肢麻木、上肢疼痛、上肢肌痉挛、上肢肌无力等中医症状积分、NGF、H_(2)S、NSE、颈动脉血流速度以及血流量、舒张压与临界压差值及脑血管外周阻力、动态阻力、RMS及CCR、MAL及WMFT、COPM及Barthel指数等指标均优于对照组(P<0.05);观察组患者治疗满意率(97.50%,39/40)高于对照组(80.49%,33/41)(P<0.05)。结论瓜楼桂枝汤结合任务导向训练可提升脑卒中后上肢功能障碍疗效,改善患者脑血流动力,提升患者上肢运动功能及自理能力,患者十分满意。

栝楼桂枝颗粒通过HIF-1α-Netrin-1-UNC5B/VEGF促进大鼠脑缺血后血管生成和神经功能恢复的研究

目的:探讨栝楼桂枝颗粒是否通过HIF-1α-Netrin-1-UNC5B/VEGF促进脑缺血后血管生成和神经功能恢复。方法:随机选取32只SD大鼠建立大脑中动脉闭塞再灌注损伤模型,造模成功后分为模型对照组、栝楼桂枝颗粒3.6 g/kg组,另设16只假手术对照组。各组灌胃给予相应药物或生理盐水,采用改良神经功能缺损(mNSS)评分、肌张力测评试验及Cat Walk步态分析系统评价各组大鼠神经功能恢复情况;采用MRI检测各组大鼠脑梗死面积,计算脑梗死率;采用免疫组化法、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠促血管生成及HIF-1α通路相关蛋白的表达。结果:与假手术对照组比较,模型对照组mNSS评分和肌张力评分均显著升高,运动时间和最大速率变化均显著升高(P<0.01),大鼠大脑检测出大片白色梗死区域,脑梗死面积显著增加;缺氧诱导因子(HIF-1α)蛋白表达明显升高,大鼠缺血侧大脑皮层组织中白细胞分化抗原(CD34)阳性表达率明显升高(P<0.05);与模型对照组比较,栝楼桂枝颗粒3.6 g/kg组大鼠神经行为学评分、肌张力明显降低(P<0.05或P<0.01),脑梗死率显著减少,大鼠运动时间显著降低(P<0.01);血管生成相关蛋白VEGFA、CD34蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),HIF-1α、神经导向因子-1蛋白(NETRIN-1)、神经导向因子受体(UNC5B)蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:栝楼桂枝颗粒能够促进缺血性脑中风后的血管生成和神经功能恢复,其作用机制可能与激活HIF-1α-NETRIN-1-UNC5B/VEGF信号通路有关。

栝楼桂枝汤对大鼠脑缺血/再灌注损伤后血管新生的影响

目的:探讨栝楼桂枝汤对大鼠脑缺血/再灌注损伤后血管新生的影响及可能机制。方法:采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。栝楼桂枝汤14.4 g/kg和尼莫地平0.012 g/kg治疗7 d后,采用改良神经功能缺损评分法(mNSS)评价大鼠神经功能缺损程度;Ashworth评级法评价大鼠肢体肌张力;原位末端转移酶标记技术(Tunel)检测缺血侧皮层神经元的凋亡情况;免疫组化法检测缺血侧皮层组织中白细胞分化抗原34(CD34)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白的表达。结果:与假手术对照组相比,模型对照组mNSS评分、Ashworth评级和神经细胞凋亡率显著升高(P<0.01),缺血侧大脑皮层组织中CD34、HIF-1α、VEGF和VEGFR2蛋白表达均显著增多;与模型对照组相比,栝楼桂枝汤14.4 g/kg组mNSS评分、Ashworth评级和神经细胞凋亡率显著下降(P<0.01),缺血侧大脑皮层组织中CD34、HIF-1α、VEGF和VEGFR2蛋白表达均显著增多(P<0.01)。结论:栝楼桂枝汤可通过调控低氧诱导因子-1α信号通路,促进脑缺血/再灌注损伤后的血管新生,从而发挥抗脑缺血性细胞凋亡、改善神经功能缺损、缓解肢体痉挛状态的作用。

栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤模型大鼠缺血区脑组织内质网应激及细胞凋亡的影响

目的探讨栝楼桂枝颗粒治疗脑缺血再灌注损伤的可能作用机制。方法54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、栝楼桂枝颗粒组,每组18只。模型组、栝楼桂枝颗粒组大鼠采用线栓法致大脑中动脉栓塞建立脑缺血再灌注损伤模型,假手术组除不插入线栓外其余操作同模型组。各组于造模后2 h开始干预,假手术组和模型组给予生理盐水10 ml/kg灌胃,栝楼桂枝颗粒组给予栝楼桂枝汤颗粒剂3.6 g/(kg·d)灌胃。各组均每日1次,连续7天。采用改良的神经功能缺损评分(mNSS)、转角实验对大鼠神经损害程度进行评价;采用TUNEL法检测大鼠缺血区脑组织细胞凋亡情况,采用Western blot法检测脑组织中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、神经元特异核蛋白(NeuN)的相对表达量;Real-Time PCR法检测缺血区脑组织内质网应激相关因子真核生物起始因子2α(elF2α)、蛋白激酶RNA样内质网激酶(PERK)、内质网源性转录因子(CHOP)、转录激活因子4(ATF4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA表达;Western blot法检测缺血区脑组织ATF4、CHOP、PERK、elF2α、磷酸化真核生物起始因子2α抗体(p-elF2α)、磷酸化蛋白激酶RNA样内质网激酶(p-PERK)蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分、转角百分率升高,缺血区脑组织细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2及NeuN蛋白表达降低(P<0.01);缺血区脑组织中GRP78、PERK、eIF2α、CHOP、ATF4 mRNA升高,CHOP、ATF4蛋白表达及p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α值亦升高(P<0.01)。与模型组比较,栝楼桂枝颗粒组大鼠上述各指标均明显改善(P<0.05或P<0.01)。结论栝楼桂枝颗粒可通过抑制内质网应激,从而抑制脑缺血损伤后神经细胞凋亡,进而发挥抗脑缺血再灌注损伤作用。