桂郁金多糖对H2O2致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的：通过体外实验研究不同质量浓度桂郁金多糖对过氧化氢（H2O2）致人脐静脉内皮细胞损伤的的保护作用及机制。方法：对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）进行体外培养,用不同浓度H2O2损伤HUVECs,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒（CCK-8）,确定H2O2最佳损伤浓度为500μmol·L^-1。然后给予不同浓度的桂郁金多糖对损伤的HUVECs进行保护,用CCK-8,确定62.5,125,250 mg·L^-1作为桂郁金多糖的低、中、高质量浓度组。采用CCK-8法检测桂郁金多糖对H2O2损伤HUVECs细胞活力的影响;采用试剂盒测定乳酸脱氢酶（LDH）,超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）,丙二醛（MDA）;通过酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-6（IL-6）的含量表达。采用Hoechst 33258荧光染色法对细胞凋亡情况进行观察;并采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定细胞中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA的表达情况。结果：CCK-8检测结果表明,给药时间24 h后,桂郁金多糖在15.625-500 mg·L^-1,能够促进细胞增殖,而浓度增大后,桂郁金多糖则对细胞有一定的抑制作用。与模型组比较,桂郁金多糖能够使LDH,MDA,IL-6,TNF-α水平明显减少（P〈0.05,P〈0.01）,使SOD和GSH-Px的含量明显增加（P〈0.05,P〈0.01）。Hoechst 33258荧光染色结果表明,与空白组比较,模型组HUVECs细胞核呈亮蓝色荧光,细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光,细胞密度降低;与模型组比较,桂郁金多糖给药组的蓝色荧光强度降低,细胞凋亡典型形态减少。Real-time PCR实验结果显示,与空白组比较,模型组减少Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax,Caspase-3 mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）;与模型组比较,桂郁金多糖给药组能够增加Bcl-2 mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）,减少Bax,Caspase-3 mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：桂郁金多糖通过抗氧化和抑制细胞凋亡等途径对H2O2损伤的人脐静脉内皮细胞进行保护。