桃叶珊瑚苷对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及机制

目的探讨桃叶珊瑚苷(Auc)调节周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)/周期蛋白B1(CCNB1)/Polo样激酶1(PLK1)信号通路对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法以人乳腺癌细胞MCF-7为对象,将其分为对照组,Auc低、中、高浓度组(Auc-L、Auc-M、Auc-H组,20、40、80μmol/L的Auc),Auc-H+pcDNA-NC组(80μmol/L的Auc+转染pcDNA-NC质粒),Auc-H+pcDNA-CDK1组(80μmol/L的Auc+转染pcDNA-CDK1质粒),检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移能力,凋亡情况及周期分布,凋亡、上皮-间充质转化(EMT)、CDK1/CCNB1/PLK1信号通路相关蛋白的表达情况。以BALB/c裸鼠为对象,通过皮下接种MCF-7细胞悬液建立移植瘤模型,并将其分为对照组和Auc组(每组12只),检测各组裸鼠肿瘤体积、质量及肿瘤组织中CDK1/CCNB1/PLK1信号通路相关蛋白的表达情况。结果与对照组细胞相比,Auc各浓度组的细胞克隆形成数、增殖率、细胞侵袭数、划痕愈合率、G1/G0期和S期细胞占比以及B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、神经钙黏素、纤维连接蛋白、CDK1、CCNB1、PLK1蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G2/M期细胞占比以及Bcl-2相关X蛋白、上皮钙黏素蛋白的表达水平均显著增加(P<0.05),呈浓度依赖性(P<0.05);与Auc-H+pcDNA-NC组细胞相比,Auc-H组细胞上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05),而Auc-H+pcDNA-CDK1组细胞上述指标则显著逆转(P<0.05)。与对照组裸鼠相比,Auc组裸鼠肿瘤体积、质量以及肿瘤组织中CDK1、CCNB1、PLK1蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论Auc能抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,诱导细胞周期阻滞,抑制EMT进程,该作用可能与抑制CDK1/CCNB1/PLK1信号通路激活有关。

桃叶珊瑚苷调节RhoA/ROCK信号通路对胶质母细胞瘤细胞活力和上皮间质转化的影响

[目的]研究桃叶珊瑚苷(AU)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞活力和上皮间质转化(EMT)的影响,并对其作用机制进行探讨。[方法]将U87细胞随机分为对照组、AU低浓度组、AU中浓度组、AU高浓度组、Y-27632组、AU高浓度+Y-27632组。细胞计数器试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)1、ROCK2表达。构建GBM裸鼠模型,随机分为裸鼠对照组、AU组、Y-27632组、AU+Y-27632组,测量肿瘤质量与体积,免疫组化法检测移植瘤组织RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。[结果]GBM细胞活力随着AU浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),选择U87作为后续实验细胞,选择10、25、50μmol/L浓度作为AU后续实验浓度。与对照组比较,AU低、中、高浓度组和Y-27632组细胞活力、迁移和侵袭细胞数、MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、RhoA、ROCK1、ROCK2表达显著下降,凋亡率、E-cadherin表达显著升高(P<0.05),其中高浓度AU和Y-27632组共同处理的细胞变化更显著(P<0.05)。AU和Y-27632均能抑制移植瘤质量和体积,降低RhoA/ROCK信号通路蛋白表达(P<0.05)。[结论]AU能抑制GBM细胞活力、迁移侵袭和EMT,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

桃叶珊瑚苷抑制人肝癌细胞系HepG2增殖

目的探讨桃叶珊瑚苷(AU)对人肝癌细胞系HepG2增殖、凋亡和细胞周期的影响及其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,CCK-8法筛选AU的最佳给药浓度。随机将HepG2细胞分为对照组、AU 12.5 mg/L组(AU L组)、AU 62.5 mg/L组(AU H组)和AU H+Akt通路激动剂(SC79)组(AU H+SC79组),观察各组细胞增殖状态。5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EDU)法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡和细胞周期;Western blot检测磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、p-MDM2、MDM2、p-p53、p53蛋白表达水平。结果选择浓度为12.5、62.5 mg/L的AU进行后续实验。与0 mg/L AU比较,AU L组、AU H组细胞增殖显著降低(P<0.05);与对照组比较,AU L、AU H组悬浮和脱落细胞逐渐增多,细胞皱缩变圆,G0/G1期细胞占比、EDU阳性染色细胞比例以及p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2蛋白表达水平下降,S和G2/M期细胞占比、细胞凋亡率以及p-p53/p53蛋白表达水平升高(P<0.05);与AU H组比较,AU H+SC79组上述变化得到改善(P<0.05);移植瘤裸鼠接受AU治疗后,瘤体体积和质量均下降。结论AU可能通过调控Akt/MDM2/p53信号通路抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞与细胞凋亡。

桃叶珊瑚苷通过Nrf2介导的抗氧化应激减轻阿霉素诱导的心肌损伤

目的研究桃叶珊瑚苷(AU)对阿霉素(DOX)诱导的小鼠心肌损伤的保护作用及相关分子机制。方法40只ICR雄性小鼠随机分为对照组、DOX组、DOX+AU组和DOX+AU+ML385组。通过腹腔注射DOX建立心肌损伤模型,灌胃给予AU进行治疗,腹腔注射ML385抑制小鼠体内核因子-红细胞2相关因子2(Nrf2)的激活。治疗4周后,比较四组小鼠体重、心脏质量、心脏指数、血清心肌酶、血清氧化应激指标、心肌病理改变以及Nrf2/HO-1通路关键蛋白表达水平。结果四组小鼠进行上述指标比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。DOX组小鼠体重、心脏质量、心脏指数以及血清过氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)均显著低于对照组(P<0.05),而血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)以及心肌组织Nrf2、Keap1和HO-1蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。DOX+AU组小鼠体重、心脏质量、心脏指数、SOD、GSH以及心肌组织Nrf2、Keap1和下游血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达水平均显著高于DOX组(P<0.05),而血清LDH、CK、AST和MDA均显著低于DOX组(P<0.05)。DOX+AU+ML385组小鼠体重、心脏质量、心脏指数、SOD、GSH以及心肌组织Nrf2、Keap1和HO-1蛋白表达水平均显著低于DOX+AU组(P<0.05),而血清LDH、CK、AST和MDA均显著高于DOX组(P<0.05)。结论桃叶珊瑚苷对阿霉素诱导的小鼠心肌损伤具有保护作用,其机制可能与桃叶珊瑚苷激活Nrf2/HO-1通路而降低氧化应激损伤有关。

桃叶珊瑚苷通过调节PD-1/PD-L1信号通路介导的免疫逃逸对肺癌细胞放疗敏感性的影响

目的探究桃叶珊瑚苷(Aucubin)通过调节程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡受体配体-1(PD-L1)信号通路介导的免疫逃逸对肺癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法0~300μmol/mL的Aucubin处理人肺癌细胞NCI-H1299,MTT检测细胞活力。将细胞分为正常对照组(Control组)、放疗组(6 Gy组)、Aucubin组、Aucubin+放疗组(Aucubin+6 Gy组),克隆形成实验和Edu实验检测细胞增殖水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测PD-1、PD-L1蛋白表达。建立肺癌小鼠移植瘤模型,分为对照组(Control组)、放疗组(5 Gy组)、Aucubin组和Aucubin+5 Gy组。测量移植瘤体积与质量,ELISA检测TNF-α、IFN-γ、IL-2水平,Western blot检测PD-1、PD-L1蛋白表达。结果与0μmol/mL比较,25~125μmol/mL的Aucubin能降低细胞活力,选择100μmol/mL的Aucubin进行后续实验。与Control组比较,6 Gy组和Aucubin组细胞克隆形成数、Edu阳性率、TNF-α水平及PD-1、PD-L1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率及IFN-γ、IL-2水平升高(P<0.05);Aucubin+6 Gy组细胞克隆形成数、Edu阳性率、TNF-α水平及PD-1、PD-L1蛋白表达水平低于6 Gy组和Aucubin组(P<0.05),细胞凋亡率及IFN-γ、IL-2水平高于6 Gy组和Aucubin组(P<0.05)。小鼠移植瘤实验表明,与Control组比较,5 Gy组和Aucubin组小鼠移植瘤体积和质量、TNF-α水平及PD-1、PD-L1蛋白表达水平降低(P<0.05),IFN-γ、IL-2水平升高(P<0.05);Aucubin+5 Gy组小鼠移植瘤体积和质量、TNF-α水平及PD-1、PD-L1蛋白表达水平低于5 Gy组和Aucubin组(P<0.05),IFN-γ、IL-2水平高于5 Gy组和Aucubin组(P<0.05)。结论Aucubin可能通过阻断PD-1/PD-L1信号通路介导的免疫逃逸增强肺癌细胞放疗敏感性。

桃叶珊瑚苷调控RhoA/ROCK信号通路对胃癌MGC803细胞上皮间质转化和血管生成拟态的影响

目的:探究桃叶珊瑚苷(AU)调控RhoA/ROCK信号通路对胃癌MGC803细胞上皮间质转化(EMT)进程和血管生成拟态(VM)形成的影响。方法:常规培养人胃癌MGC803细胞,将其随机分为对照组、AU-L组(20μmol/L AU)、AU-M组(40μmol/L AU)、AU-H组(80μmol/L AU)、AU-H+RhoA激活剂水仙环素(Nar)组(AU-H+Nar组,80μmol/L AU+30μmol/L Nar)。采用CCK-8法、Transwell实验、细胞划痕实验分别检测不同浓度AU对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,三维细胞培养法观察不同浓度AU对细胞体外VM管腔结构形成的影响,WB法检测AU对各组细胞RhoA、ROCK、VM与EMT相关蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,AU-M组、AU-H组MGC803细胞增殖率(48、72 h时)、细胞迁移率、细胞侵袭数目、VM管腔结构数,以及RhoA、ROCK1、N-cadherin、vimentin、VE-cadherin的蛋白表达均显著降低(均P<0.05),E-cadherin表达显著升高(P<0.05);同时,使用Nar处理显著减弱了AU对MGC803细胞EMT和VM形成的抑制作用(均P<0.05)。结论:AU通过下调RhoA/ROCK信号通路抑制胃癌MGC803细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT和VM形成过程。

RP-HPLC测定2种桃叶珊瑚属药用植物中的桃叶珊瑚苷

目的测定桃叶珊瑚、峨眉桃叶珊瑚中的桃叶珊瑚苷。方法药材用70％乙醇回流提取，RP—HPLC法测定，色谱柱为Symmetry shield RP18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相用甲醇-水（12：88）；检测波长203nm；柱温25℃；流速1．0ml·min^-1。结果桃叶珊瑚苷在203nm处有最大吸收，在0．72～2．88μg线性关系良好（r^2=0．9998），桃叶珊瑚、峨眉桃叶珊瑚中桃叶珊瑚苷的含量分别为4．31％、3．07％，平均回收率分别为98．94％、98．87％，RSD分别为2．04％、1．74％（n=6）。结论所建方法操作简便，重复性好，专属性强，准确可靠。

桃叶珊瑚属植物的叶绿体基因组结构特征及系统发育分析

为确定桃叶珊瑚属(Aucuba)植物叶绿体基因组的结构及其序列变异,揭示其属下种间亲缘关系,该研究对桃叶珊瑚(A.chinensis)、花叶青木(A.japonica var.variegata)等6种桃叶珊瑚属植物和丝缨花属植物黄杨叶丝缨花(Garrya buxifolia)进行二代测序,利用生物信息学软件对其叶绿体基因组序列进行组装和注释,并进行基本特征分析、序列比较以及系统发育分析。结果表明:(1)桃叶珊瑚属植物叶绿体基因组具典型的环状四分体结构,6条序列全长157891~158325 bp,均编码114个基因,包括80个蛋白质编码基因、30个tRNA基因和4个rRNA基因。(2)6种植物叶绿体基因组高频密码子数均为29个,偏好以A/U结尾,确定了这6条序列的最优密码子共100个,包含12个共有的最优密码子。(3)6条叶绿体基因组序列共检测到270条散在重复序列,133条串联重复序列以及412个SSR位点。(4)比较基因组学分析结果表明,该属植物叶绿体基因组序列高度保守。(5)从叶绿体基因组中筛选出10个高变片段。(6)系统发育分析结果显示支持桃叶珊瑚属为一个支持率较高的单系,与丝缨花属关系较近。该研究中的5种桃叶珊瑚属植物以及1种丝缨花属植物的叶绿体基因组均为首次测序组装,揭示了桃叶珊瑚属及其属下种间的系统发育关系,为桃叶珊瑚属植物的分类鉴定和系统发育提供了参考资料。

桃叶珊瑚苷通过活化miR-1294/YWHAZ信号通路抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移

目的 研究桃叶珊瑚苷调控miR-1294/酪氨酸3单加氧酶-色氨酸5单加氧酶激活蛋白ζ(tyrosine 3-monooxygenase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein zeta, YWHAZ)分子轴对宫颈癌C-33A细胞增殖和迁移的影响。方法 采用DMEM细胞培养基配制桃叶珊瑚苷培养液,分别采用0、20、40、60、80、100μmol/L桃叶珊瑚苷处理宫颈癌C-33A细胞,噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT)实验分析C-33A细胞的增殖情况。将C-33A细胞分为对照组(0μmol/L桃叶珊瑚苷处理)和桃叶珊瑚苷组(80μmol/L桃叶珊瑚苷处理),以细胞划痕实验检测C-33A细胞的迁移情况。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative fluorescence polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测两组C-33A细胞中miR-1294的表达。采用MicroRNAdb数据库和双荧光素酶基因报告实验分析和验证miR-1294与YWHAZ之间的调控关系。qRT-PCR和Western blot法分别检测YWHAZ基因和Akt信号通路蛋白p-Akt、p-PRAS40、mTORC1、SGK1的表达。结果 0、20、40、60、80、100μmol/L桃叶珊瑚苷处理后宫颈癌C-33A细胞增殖活性(A)值分别为1.02±0.17、0.75±0.06、0.61±0.10、0.41±0.05、0.17±0.09、0.47±0.12,桃叶珊瑚苷能够明显抑制C-33A细胞的增殖活力(F=28.90,P<0.05)。对照组和桃叶珊瑚苷组C-33A细胞划痕愈合率分别为59.28%±9.93%和25.75%±9.29%,差异有统计学意义(t=4.93,P<0.05)。对照组和桃叶珊瑚苷组miR-1294的表达分别为1.01±0.62和10.14±2.02,差异有统计学意义(t=8.65,P<0.01)。miR-1294可靶向结合YWHAZ(t=8.76,P<0.01)。对照组和桃叶珊瑚苷组C-33A细胞中YWHAZ mRNA表达分别为4.74±1.22和1.01±0.22,miR-1294可负调控YWHAZ基因表达(t=6.00,P<0.01)。与对照组比较,桃叶珊瑚苷组YWHAZ蛋白和Akt信号通路蛋白p-Akt、p-PRAS40、mTORC1、SGK1表达明显降低。结论 桃叶珊瑚苷通过调控miR-1294/YWHAZ分子轴抑制宫颈癌C-33A细胞的增殖和迁移。

基于Nox4/NLRP3通路探讨桃叶珊瑚苷干预动脉粥样硬化的作用机制

目的:探究桃叶珊瑚苷干预动脉粥样硬化大鼠的作用机制。方法:将SD雄性大鼠采用高脂饲料联合维生素D_(3)腹腔注射的方法建立动脉粥样硬化模型。颈动脉超声和苏木精-伊红(HE)染色评估大鼠建模;建模后分为模型组、辛伐他汀组(20 mg/kg)及桃叶珊瑚苷高剂量(40 mg/kg)组、中剂量(20 mg/kg)组、低剂量(10 mg/kg)组,每组8只;另设正常组,8只大鼠给予普通饲料喂养并腹腔注射生理盐水。分组完成后开始给药,辛伐他汀组给予辛伐他汀溶液灌胃,桃叶珊瑚苷各剂量组腹腔注射相应剂量的桃叶珊瑚苷,正常组和模型组灌胃和注射等量的生理盐水,每日1次,连续给药4周。给药结束后,检测大鼠血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-18、IL-1β水平;HE染色观察颈动脉组织病理学变化;荧光探针测定颈动脉中活性氧(ROS)的生成;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测颈动脉组织还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(Nox4)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白的表达。结果:造模大鼠管腔内出现大量动脉粥样硬化病变,颈动脉出现狭窄,局部血管壁上明显有斑块形成,颈动脉内膜中层厚度(IMT)增加,大量炎性因子浸润。与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、TNF-α、IL-1β、IL-18水平和颈动脉ROS荧光强度、Nox4、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Cleaved Caspase-1的表达明显升高(P<0.05),HDL-C水平明显降低(P<0.05),颈动脉组织内膜层增厚,局部有斑块形成,内皮受损,大量炎性因子浸润;与模型组比较,辛伐他汀组和桃叶珊瑚苷高剂量组、桃叶珊瑚苷中剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、TNF-α、IL-1β、IL-18水平和颈动脉ROS荧光强度、Nox4、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-1的表达明显下降(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05),大鼠颈动脉内膜增厚、炎性因子浸润程度减少;且桃叶珊瑚苷高剂量组对Nox4/NLRP3通路的抑制作用以及对颈动脉组织的改善作用与辛伐他汀组接近。结论:桃叶珊瑚苷可调节血脂异常、抑制氧化应激和炎症反应,减轻动脉粥样硬化病变,其作用机制可能与抑制Nox4/NLRP3通路的激活有关。

桃叶珊瑚苷对膝骨关节炎小鼠的作用及机制实验研究

目的:探讨桃叶珊瑚苷对膝骨关节炎(KOA)小鼠的作用及对细胞自噬和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的影响。方法:采用改良的Hulth法制备膝关节KOA小鼠模型,随机分为模型组、桃叶珊瑚苷组、激动剂组、桃叶珊瑚苷+激动剂组,另设正常对照组,每组各10只。桃叶珊瑚苷组小鼠给予80 mg/kg桃叶珊瑚苷灌胃;激动剂组小鼠腹腔注射0.5μmol/kg 740Y-P;桃叶珊瑚苷+激动剂组小鼠给予80 mg/kg桃叶珊瑚苷灌胃,同时0.5μmol/kg 740Y-P腹腔注射;正常对照组和模型组小鼠分别灌胃和腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续12周。采用HE染色和番红O-固绿染色观察软骨组织病理形态学变化,Mankin评分评估KOA严重程度。ELISA法检测软骨组织中白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测自噬相关基因(Atg5、Atg12、Baclin-1、LC3)、PI3K、AKT和mTOR mRNA水平。蛋白印迹法检测自噬相关蛋白、LC3Ⅱ/Ⅰ、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白水平。结果:与正常对照组比较,模型组关节软骨表面粗糙,细胞结构层次混乱、数量减少,潮线排列破坏严重;激动剂组软骨组织病变程度更重;桃叶珊瑚苷+激动剂组小鼠关节软骨表面稍光滑,细胞排列相对整齐、数量稍减少,潮线受损程度减轻;桃叶珊瑚苷组软骨组织病变程度明显改善。与模型组比较,桃叶珊瑚苷组Mankin评分、IL-6、IL-1β和TNF-α水平以及PI3K、AKT和mTOR mRNA水平降低,Atg5、Atg12和Baclin-1 mRNA和蛋白表达升高,LC3 mRNA和LC3Ⅱ/Ⅰ升高,p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平降低(均P<0.05)。与桃叶珊瑚苷组比较,桃叶珊瑚苷+激动剂组Mankin评分、IL-6、IL-1β和TNF-α水平以及PI3K、AKT和mTOR mRNA水平升高,Atg5、Atg12和Baclin-1 mRNA和蛋白表达降低,LC3 mRNA和LC3Ⅱ/Ⅰ降低,p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平升高(均P<0.05)。与激动剂组比较,桃叶珊瑚苷+激动剂组Mankin评分、IL-6、IL-1β和TNF-α水平以及PI3K、AKT和mTOR mRNA水平降低,Atg5、Atg12和Baclin-1 mRNA和蛋白表达升高,LC3 mRNA和LC3Ⅱ/Ⅰ升高,p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白水平降低(均P<0.05)。结论:桃叶珊瑚苷可改善KOA小鼠膝关节软骨病变,减轻炎症反应,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导软骨细胞自噬。

桃叶珊瑚苷修复辐射诱导的小肠上皮细胞损伤

目的本研究旨在探讨桃叶珊瑚苷(Aucubin)对辐射性肠损伤(RIII)的保护作用。方法我们将大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)分为对照组、辐射损伤组和辐射损伤+治疗组,后两组经受10Gy X射线照射以构建RIII的体外模型,其中对照组和辐射损伤组加入正常培养基,而辐射损伤+治疗组则加入桃叶珊瑚苷。采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)方法来确定桃叶珊瑚苷的最佳有效浓度。比色法被用来检测各组细胞培养基中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性,同时采用ELISA试剂盒来测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白介素66(IL-6)以及白介素10(IL-10)的表达水平。流式细胞技术用于检测细胞凋亡。结果桃叶珊瑚苷的最佳剂量为1.0μmol/L。与对照组和辐射损伤组相比,经过桃叶珊瑚苷干预后,辐射损伤+治疗组的过氧化指标MDA、促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平,以及细胞凋亡水平显著降低(P<0.05),而抗氧化指标SOD、CAT和Gpx、抗炎因子IL-10以及细胞凋亡水平显著提高(P<0.05)。结论桃叶珊瑚苷可能通过抑制氧化应激、炎症反应以及细胞凋亡修复辐射损伤的小肠隐窝上皮细胞,这为辐射防护提供了有前途的药物。

桃叶珊瑚苷在烟曲霉菌角膜炎中抗炎作用及其机制

目的探讨桃叶珊瑚苷(AU)对烟曲霉菌角膜炎的抗炎作用及其机制。方法采用CCK-8实验检测AU对人角膜上皮细胞(HCECs)的细胞毒性,裂隙灯拍照和临床评分评估AU对烟曲霉菌角膜炎的治疗效果,髓过氧化物酶(MPO)实验和免疫荧光染色检查中性粒细胞浸润和活性,RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测重组与合成蛋白(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及白细胞介素-6(IL-6)的表达。结果AU降低了感染第3天的小鼠角膜临床评分(F=35.714,P<0.001),抑制了中性粒细胞的募集和活性(t=9.882,P<0.001),同时也下调了IL-1β、IL-6的mRNA表达(F=59.356、110.224,P<0.001)。体外实验显示,AU明显上调烟曲霉菌刺激的Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达,下调IL-1β、IL-6的mRNA表达及IL-6的蛋白表达(F=17.569~146.436,P<0.001)。结论AU能够改善烟曲霉菌角膜炎严重程度,抑制中性粒细胞募集和活性,上调Nrf2和HO-1表达,抑制下游炎症因子表达,在烟曲霉菌角膜炎中起抗炎作用。

桃叶珊瑚苷-硼酸共聚印迹整体柱的制备及其分子识别性能

以桃叶珊瑚苷为模板,4-乙烯基苯基硼酸为功能单体,制备了桃叶珊瑚苷-硼酸共聚印迹整体柱。考察了分子印迹整体柱的通透性、选择保留性能、吸附及固相萃取性能。结果表明,整体柱通透性好,当使用体积比为49∶1的甲醇-1%HCl混合溶液为流动相时,其对模板具有最强的保留能力和较高的选择性,容量因子高达166.4,选择因子最高达3.200。前沿分析表明整体柱的饱和吸附量达95.16 mg·g^(-1)。Scatchard分析显示印迹材料主要有两类吸附位点。当分子印迹柱用于从杜仲籽粨粗提物中分离纯化桃叶珊瑚苷时,可获得含量高于85%的产品。当整体柱用于分离分析时,方法的检出限和定量限分别为0.167 mg·kg^(-1)和0.547 mg·kg^(-1),且整体柱可重复使用。

湖南八大公山桃叶珊瑚果实与种子的形态发育动态

为了揭示桃叶珊瑚Aucuba chinensis果实与种子发育的规律,以湖南省桑植县八大公山国家级自然保护区内的桃叶珊瑚为研究对象,对其果实与种子在发育过程中的外部形态、胚与胚乳的形态变化等进行研究,并分析形态变化与原生境的温度、降雨量等生态因子的相关性。结果表明:(1)从4月坐果到次年4月完成自然脱落,果实发育共经历13个月,果实脱落晚于翌年雌花开放和坐果。(2)果实长度、宽度、果皮厚度等变化均经历了“慢–快–慢–快”4个阶段,生长发育呈典型的双“S”型曲线;生长期Ⅰ阶段为果实生长的关键时期,果形指数由2.63降至1.57。(3)果实颜色转变过程中红色值先增后稳,蓝色与绿色色值先增后降,果实变红体现为绿、蓝色值迅速下降。(4)胚和胚乳生长与果实发育同步,生长期Ⅰ阶段仍是胚乳发育的关键时期,胚长宽比由1.83增至2.56;胚乳的发育为无明显浆状期的细胞型。(5)花冠凋落后的第13个月,仍有约77%的胚呈鱼雷型。(6)温度与果形指数和胚率呈显著正相关(P<0.05);降雨量与胚率呈显著正相关,与果形指数呈极显著正相关(P<0.01)。基于以上结果,我们认为桃叶珊瑚果实发育具有明显的花果同期和果期重叠现象,水热条件的限制可能是其果实与种子发育缓慢并影响种苗建成的主要原因。同时,果实脱落时多数种胚未完成分化,这意味着其种子发育需经历后熟,具有形态休眠。

基于Nrf2信号通路探讨桃叶珊瑚苷对神经元氧糖剥夺再复氧损伤的保护作用

目的 探讨桃叶珊瑚苷(Aucubin,AU)对氧糖剥夺再复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导神经元损伤的影响和分子调控机制。方法 采用小鼠海马神经元细胞HT22构建OGD/R模型。HT22神经元细胞分为常氧组、OGD/R组、OGD/R+50μmol/L AU组和OGD/R+100μmol/L AU组。采用Calcein AM细胞活性试剂盒检测神经元存活率。采用原位缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)实验检测神经元凋亡。采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)试剂盒检测ROS水平。采用Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、B细胞淋巴瘤因子2(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)、核转录因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,Nqo-1)和血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,Hmox-1)的蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因实验检测Nrf2的转录活性。采用Nrf2抑制剂ML385验证AU是否通过激活Nrf2通路减轻OGD/R神经元损伤。将HT22神经元细胞分为常氧组、OGD/R组、OGD/R+100μmol/L AU组和OGD/R+100μmol/L AU+5μmol/L ML385组,采用荧光素酶报告基因实验检测Nrf2的转录活性,采用TUNEL实验检测神经元凋亡,采用ROS试剂盒检测ROS水平。结果 与常氧组比较,OGD/R组神经元存活率显著降低,凋亡神经元数量显著增加,Bcl-2蛋白表达显著下调,Bax蛋白表达显著上调,ROS水平显著升高(均P<0.01)。与OGD/R组比较,OGD/R+50μmol/L AU组和OGD/R+100μmol/L AU组神经元存活率显著提高,凋亡神经元数量显著减少,Bcl-2蛋白表达显著上调,Bax蛋白表达显著下调,ROS水平显著降低(均P<0.05)。与常氧组比较,OGD/R组Nrf2转录活性显著提高,Nrf2、Nqo-1和Hmox-1的蛋白表达水平显著增加(均P<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+50μmol/L AU组和OGD/R+100μmol/L AU组Nrf2转录活性提高,Nrf2、Nqo-1和Hmox-1的蛋白表达水平增加(均P<0.05)。与OGD/R+100μmol/L AU组比较,OGD/R+100μmol/L AU+5μmol/L ML385组Nrf2转录活性显著降低,凋亡神经元数量显著增加,ROS水平显著升高(均P<0.01)。结论 AU通过激活Nrf2信号通路减轻OGD/R诱导的神经元损伤。

桃叶珊瑚苷及其苷元的药理研究进展

在查阅近10年国内外研究文献基础上,综述了桃叶珊瑚苷的药理学用研究进展。桃叶珊瑚苷是杜仲等中草药的有效成分之一,具有护肝解毒,抗炎,抗氧化,抗衰老,抗骨质疏松及营养神经元细胞等众多药理活性,值得进行深入的研究开发和利用。

不同季节3种桃叶珊瑚中桃叶珊瑚苷的比较研究

目的建立桃叶珊瑚属3种植物的HPLC和TLC方法,比较不同季节中3种桃叶珊瑚植物中桃叶珊瑚苷的含量。方法采集不同季度的3种桃叶珊瑚采用70%乙醇回流提取桃叶珊瑚苷,用TLC和HPLC法对桃叶珊瑚苷进行定性鉴别和含量测定。结果 3种桃叶珊瑚中桃叶珊瑚苷含量均高于2%,其中以洒金桃叶珊瑚最高;在4个季度的比较中,又以1月采集的含量最高。结论 3种桃叶珊瑚植物具有较好的药用开发价值,为制定桃叶珊瑚属的质量标准提供参考依据。

超临界CO_2萃取峨眉桃叶珊瑚中桃叶珊瑚苷工艺条件研究

目的优选超临界CO2萃取峨眉桃叶珊瑚中桃叶珊瑚苷的工艺条件。方法采用超临界CO2萃取法,并与回流提取法进行比较。结果在分离压力6.5MPa,分离温度55℃,控制CO2的流速为25.0L/h,以95%乙醇作为夹带剂,萃取压力20Mpa、萃取温度40℃、萃取时间1h,为最佳萃取工艺条件,桃叶珊瑚苷的萃取收得率为2.85%。结论超临界CO2萃取峨眉桃叶珊瑚中桃叶珊瑚苷方法简便、提取率较高,可推广使用。

峨眉桃叶珊瑚不同部位桃叶珊瑚苷的含量比较

目的测定峨眉桃叶珊瑚叶、干皮、果实和枝中桃叶珊瑚苷的含量,为峨眉桃叶珊瑚资源合理开发利用提供依据。方法采用高效液相色谱法测定桃叶珊瑚苷含量,色谱柱:SymmetryshieldTM RP18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(12∶88);检测波长:203nm;流速:0.8mL·min-1;柱温:25℃。结果桃叶珊瑚苷在峨眉桃叶珊瑚的叶、干皮、果实和枝中的含量分别为3.82%,1.51%,9.60%和0.07%。结论峨眉桃叶珊瑚果实和叶中桃叶珊瑚苷的含量较高,入药部位应为果实和叶。