目的制备用于检测血清中针对几种桃过敏原组分抗体的蛋白质芯片,为针对桃过敏原组分过敏患者的临床诊断提供快速可靠的方法。方法合成6种常见的桃过敏原组分的编码基因,分别将其插入p GAPZαA酵母表达载体,AvrⅡ单酶切线性化后,电转毕...目的制备用于检测血清中针对几种桃过敏原组分抗体的蛋白质芯片,为针对桃过敏原组分过敏患者的临床诊断提供快速可靠的方法。方法合成6种常见的桃过敏原组分的编码基因,分别将其插入p GAPZαA酵母表达载体,AvrⅡ单酶切线性化后,电转毕赤酵母SMD1168,表达和纯化相应的桃过敏原组分蛋白,并制备蛋白质芯片;用蛋白芯片检测临床血清样本中针对桃过敏原组分蛋白的抗体,与ImmunoCAP法相比,验证蛋白质芯片检测的灵敏度和特异性。结果用酵母表达系统成功表达并纯化了4种桃过敏原组分Pru p 1、Pru p 3、Pru p 4和Pru p 7,制备了能进行质量控制的检测血清桃过敏原组分抗体的蛋白质芯片。检测了疑似桃过敏患者血清41例,结果以ImmunoCAP法为金标准,蛋白芯片检测血清Pru p 1、Pru p 3和Pru p 4抗体的灵敏度分别为40%、100%和100%,特异性为78%、50%和100%;对上述3种组分抗体的综合检测灵敏度为86%,特异性为96%。针对缺乏ImmunoCAP检测结果的Pru p 7抗体,蛋白芯片检测出6份阳性的血清样本,均为桃过敏患者。结论桃过敏原组分检测芯片在灵敏度和特异性方面与ImmunoCAP相当,血清用量少,优化后有望成为临床桃过敏检测的一种新方法。展开更多
目的 Pru p 3是桃主要致敏蛋白,目前尚未见桃Pru p 3 T细胞表位在我国桃过敏反应中的研究,本研究探讨桃主要致敏蛋白Pru p 3 T细胞表位。方法纳入蒿花粉相关桃过敏患者20例和健康对照者10人,采集受检者的外周血单个核细胞(PBMC),将PBMC...目的 Pru p 3是桃主要致敏蛋白,目前尚未见桃Pru p 3 T细胞表位在我国桃过敏反应中的研究,本研究探讨桃主要致敏蛋白Pru p 3 T细胞表位。方法纳入蒿花粉相关桃过敏患者20例和健康对照者10人,采集受检者的外周血单个核细胞(PBMC),将PBMC分别与8条Pru p 3来源的肽段共同孵育,比较桃过敏患者和健康对照者PBMC受各肽段刺激后的增生水平,分析不同肽段的变应原性。结果肽段Pru p 367-82对桃过敏患者PBMC的活化程度最高,20例桃过敏患者中对该肽段刺激指数(SI)阳性者14例,占70%; Pru p 323-38对桃过敏患者PBMC的活化率为55%(11/20)。Pru p 367-82与Art v 390-105氨基酸序列的一致率为81%。结论 Pru p 323-38和Pru p 367-82是引起我国桃过敏反应的主要T细胞表位,Pru p 367-82可能是参与蒿花粉-桃交叉反应的T细胞表位。展开更多
文摘目的制备用于检测血清中针对几种桃过敏原组分抗体的蛋白质芯片,为针对桃过敏原组分过敏患者的临床诊断提供快速可靠的方法。方法合成6种常见的桃过敏原组分的编码基因,分别将其插入p GAPZαA酵母表达载体,AvrⅡ单酶切线性化后,电转毕赤酵母SMD1168,表达和纯化相应的桃过敏原组分蛋白,并制备蛋白质芯片;用蛋白芯片检测临床血清样本中针对桃过敏原组分蛋白的抗体,与ImmunoCAP法相比,验证蛋白质芯片检测的灵敏度和特异性。结果用酵母表达系统成功表达并纯化了4种桃过敏原组分Pru p 1、Pru p 3、Pru p 4和Pru p 7,制备了能进行质量控制的检测血清桃过敏原组分抗体的蛋白质芯片。检测了疑似桃过敏患者血清41例,结果以ImmunoCAP法为金标准,蛋白芯片检测血清Pru p 1、Pru p 3和Pru p 4抗体的灵敏度分别为40%、100%和100%,特异性为78%、50%和100%;对上述3种组分抗体的综合检测灵敏度为86%,特异性为96%。针对缺乏ImmunoCAP检测结果的Pru p 7抗体,蛋白芯片检测出6份阳性的血清样本,均为桃过敏患者。结论桃过敏原组分检测芯片在灵敏度和特异性方面与ImmunoCAP相当,血清用量少,优化后有望成为临床桃过敏检测的一种新方法。
文摘目的 Pru p 3是桃主要致敏蛋白,目前尚未见桃Pru p 3 T细胞表位在我国桃过敏反应中的研究,本研究探讨桃主要致敏蛋白Pru p 3 T细胞表位。方法纳入蒿花粉相关桃过敏患者20例和健康对照者10人,采集受检者的外周血单个核细胞(PBMC),将PBMC分别与8条Pru p 3来源的肽段共同孵育,比较桃过敏患者和健康对照者PBMC受各肽段刺激后的增生水平,分析不同肽段的变应原性。结果肽段Pru p 367-82对桃过敏患者PBMC的活化程度最高,20例桃过敏患者中对该肽段刺激指数(SI)阳性者14例,占70%; Pru p 323-38对桃过敏患者PBMC的活化率为55%(11/20)。Pru p 367-82与Art v 390-105氨基酸序列的一致率为81%。结论 Pru p 323-38和Pru p 367-82是引起我国桃过敏反应的主要T细胞表位,Pru p 367-82可能是参与蒿花粉-桃交叉反应的T细胞表位。