框镜鲤致病性维氏气单胞菌的分离鉴定

为鉴定一株致框镜鲤发病病原菌的生物学特性,本研究由濒死框镜鲤体内分离到一株细菌CY0806,对形态学、培养特性、理化特性等生物学特性以及药物敏感性和16S rRNA序列进行检测和分析。结果显示:细菌株CY0806为革兰氏阴性菌,其理化特性与维氏气单胞菌基本相同。系统进化树分析表明,细菌株CY0806序列与维氏气单胞菌模式株ATCC35624无差异,同源性为100%,因此,鉴定该菌株CY0806为维氏气单胞菌。药物敏感性试验结果显示,庆大霉素、新霉素等11种药物对细菌株CY0806有较好的抑菌效果。

框镜鲤维氏气单胞菌的生物学特性

研究分别测定了维氏气单胞菌CY0806在液体LB中的生长曲线,培养温度、pH值、渗透压对其生长的影响,在不同培养基的生长状况,对小鼠和几种不同的养殖鱼类的致病力情况,以及毒力因子检测。结果显示:菌株CY0806在液体LB培养基中存在二次生长现象;其可以在营养琼脂、RS培养基、TSA培养基、麦康凯培养基、营养肉汤中生长良好;该菌株有较强的耐受性,可以在pH值3～11、培养温度20℃～40℃、氯化钠含量在0%～5%中生长;可以引发小鼠、鲢、团头鲂死亡,引起鲫、乌鳢发病;该菌株具有多种毒力基因:溶血素、气溶素、细胞毒性肠毒素、鞭毛、磷脂酶、丝氨酸蛋白酶、LuxS等。

饲料必需氨基酸平衡关联度对框镜鲤生长、蛋白质消化和代谢的影响

【目的】探讨饲料必需氨基酸（EAA）平衡关联度对框镜鲤Cyprinus carp生长、蛋白质消化和代谢的影响.【方法】在植物蛋白源饲料中按比例添加赖氨酸和蛋氨酸,配成6种等氮等能（蛋白质质量分数31%、能量17 MJ·kg^-1）的不同EAA平衡关联度的试验组饲料,同时以鱼粉为主要蛋白源配制对照组饲料（蛋白质质量分数33%,能量17 MJ·kg^-1）,共7种不同EAA平衡关联度[0.764 9（对照组）、0.704 8（1组）、0.722 0（2组）、0.737 0（3组）、0.759 1（4组）、0.778 0（5组）和0.800 8（6组）]的饲料饲喂初始体质量（53.29±1.64）g的框镜鲤8周.【结果和结论】当饲料EAA平衡关联度增加到0.778 0（5组）时,其框镜鲤增质量率和特定生长率显著高于饲料EAA平衡关联度为0.704 8、0.722 0和0.737 0的1、2和3组（P〈0.05）,且与对照组无显著性差异（P〉0.05）,饲料效率呈现相同趋势.当饲料EAA平衡关联度增加到0.759 1（4组）时,较1、2和3组蛋白质效率显著增加（P〈0.05）,且与对照组无显著性差异（P〉0.05）.当EAA平衡关联度增加到0.759 1（4组）时,框镜鲤的肝胰脏蛋白酶比活力和谷丙转氨酶活性与对照组无显著性差异（P〉0.05）,且肝胰脏蛋白酶比活力显著高于1~3组（P〈0.05）.当EAA平衡关联度增加到0.759 1（4组）时,框镜鲤的肝胰脏谷草转氨酶活性与对照组无显著性差异（P〉0.05）.当饲料EAA平衡关联度增加到0.759 1（4组）时,血清总蛋白与对照组差异不显著（P〉0.05）,但血清白蛋白在饲料EAA平衡关联度增加到0.737 0（3组）时与对照组差异不显著（P〉0.05）.表明在本试验条件下,在植物蛋白源饲料中添加赖氨酸和蛋氨酸,调控饲料EAA平衡关联度为0.759 1时,可促进框镜鲤生长、蛋白质消化和代谢,可适当降低饲料的蛋白含量,降低饲料成本.

框镜鲤维氏气单胞菌CY0806株鞭毛flaA基因的克隆与生物信息学分析

以框镜鲤Cyprinus carpio维氏气单胞菌Aeromonas veronii CY0806株细菌基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得flaA基因,将其克隆并测序,测序结果与气单胞菌属的不同菌株进行相似性分析,并对flaA基因编码蛋白质进行生物信息学分析.结果显示:获得框镜鲤维氏气单胞菌鞭毛flaA基因,长915 bp,编码304个氨基酸,系统进化树分析,其与其他维氏气单胞菌flaA基因处于同一分支,相关生物信息学分析显示,flaA基因编码的蛋白质相对分子质量32 098.66,等电点5.57,半衰期30 h,不稳定系数为32.31,脂肪系数81.05,不存在信号肽和跨膜区,二级结构预测:flaA基因以α螺旋和β折叠为主,同时,以同源建模法预测了flaA基因编码蛋白的三维立体结构.

饲料氨基酸平衡程度对框镜鲤生长和饲料利用的影响

以初始体重(53.29±1.64)g的框镜鲤(Cyprinus carp L)为研究对象,以鱼粉为主要蛋白源配制对照组饲料(蛋白质含量为33%),同时在以植物蛋白源饲料中添加不同水平的蛋氨酸和赖氨酸配成六种等氮等能(31%蛋白,17 MJ/kg)的不同氨基酸平衡程度(EAA平衡关联度分别为0.764 9、0.704 8、0.722 0、0.737 0、0.759 1、0.778 0和0.800 8)的饲料。饲养8周,探讨氨基酸平衡对框镜鲤生长和饲料利用的影响。结果表明:随着饲料中赖氨酸和蛋氨酸的添加,即随着饲料必需氨基酸平衡关联度的增加,各试验组框镜鲤生长和饲料利用都有增加的趋势,当饲料必需氨基酸平衡关联度增加到0.759 1(4组)时,试验组框镜鲤特定生长率、饲料效率都显著增加,但显著低于对照组(P<0.05),试验组蛋白质效率和蛋白质生产率显著升高(P<0.05),与对照组差异不显著(P>0.05);当饲料必需氨基酸平衡关联度增加到0.800 8(6组)时,试验组框镜鲤特定生长率、饲料效率显著升高且与对照组差异不显著(P>0.05),试验组蛋白质效率和蛋白质生产率显著高于对照组(P<0.05)。在本试验条件下,当饲料中添加赖氨酸和蛋氨酸调节必需氨基酸的平衡关联度为0.759 1时,可适当降低饲料的蛋白含量,降低饲料成本。

饲料氨基酸平衡程度对框镜鲤生长和体成分的影响

为研究饲料氨基酸平衡程度对框镜鲤生长和体成分的影响,本试验选取630尾初始体重(53.29±1.64)g的框镜鲤(Cyprinus carp L)为研究对象,随机分成7组,每组3个重复,每个重复30尾,饲以7种饲料。用鱼粉为主要蛋白源配制对照组饲料(蛋白质含量为33%),同时在植物蛋白源中添加不同水平的蛋氨酸和赖氨酸配成6种等氮(31%粗蛋白质)等能(17 MJ/kg)的不同氨基酸平衡程度(0.7649、0.7048、0.7220、0.7370、0.7591、0.7780、0.8008)的饲料,饲养8周,结果表明:随着饲料中赖氨酸和蛋氨酸的添加,即随着饲料必需氨基酸平衡关联度的增加,各试验组框镜鲤平均增重率显著增加(P<0.05),当饲料必需氨基酸平衡关联度增加到0.7591(4组)时,框镜鲤生长率提高35.86%,生长离散降低3.25%;当饲料必需氨基酸平衡关联度增加到0.7780(5组)时,框镜鲤的白肌蛋白质显著高于对照组;当饲料必需氨基酸平衡关联度增加到0.7370(3组)时,框镜鲤的白肌脂肪、赖氨酸和必需氨基酸与对照组差异不显著。由此可见,在本试验条件下,当通过饲料中添加赖氨酸和蛋氨酸调节必需氨基酸的平衡关联度为0.7591时,饲料粗蛋白质含量可降低1.56%,降低饲料成本。

嗜水气单胞菌对框镜鲤免疫实验研究

嗜水气单胞菌是水产动物的常见致病菌,本研究利用在生理生化和PCR鉴定的基础上确定为嗜水气单胞菌,并经PCR和药物敏感性实验确定对多种抗菌药物具有耐药性的嗜水气单胞菌多重耐药株。用该菌株制备细菌疫苗对框镜鲤进行免疫实验,免疫方法采用浸洗2 min,1.5、3、6个月后分别进行注射攻毒,攻毒实验结果显示免疫保护率60%~95%,实验室安全性检测结果为安全可靠。该方法避免了逐尾鱼注射造成的较大的工作强度,为在生产实践中广泛应用预防多重耐药嗜水气单胞菌所引起的疾病奠定了基础。

框镜鲤肠管单极虫病的组织病理学分析及分子鉴定

2017年6月,四川德阳某养殖场的框镜鲤患病且大量死亡。主要症状为腹部膨大,肠管有大小不等的肿物。为明确其死亡病因,进行了细菌学、寄生虫形态学观察,组织病理学和PCR检测。细菌学检查为阴性;病理组织学观察发现肠道的损伤最为严重,表现为有大量寄生虫样孢囊突出于肠管。寄生虫形态学观察可见孢子长约23～30μm,宽10～15μm,极囊长11～15μm,呈长卵圆形,约占孢子长的1/3～1/2,孢子外面被有一层无色透明的薄膜,前端孢子质中有一个大核和两个小核,与单极虫形态一致;针对吉陶单极虫的18S SSUrRNA基因进行巢式PCR检测,扩增出大小为716 bp的目的片段(命名为TKF-1),目的条带的测序和序列分析结果表明其为吉陶单极虫。根据组织病理特点及PCR检测结果确认框镜鲤的死亡是感染吉陶单极虫所致。

框镜鲤嗜水气单胞菌的分离鉴定

以患病濒死的框镜鲤为材料,得到1株细菌,动物回归试验证明其具有较强的致病性,然后对病原菌的形态学、培养特性、理化特性、16SrRNA序列分析等生物学特性进行了鉴定与分析。结果表明,该菌株为嗜水气单胞菌。

框镜鲤邻单胞菌的分离鉴定与抗菌药物筛选

为了确定引起湖北荆州某养殖场框镜鲤患病的病原,筛选出用于控制病原感染的抗菌药物和中药。从患病框镜鲤中分离到1株优势菌QPB1,通过生理生化和分子特征进行鉴定,结合药敏试验和耐药基因检测分析菌株的抗菌药物敏感性,并从39种中药中筛选有抑菌效果的药物。结果显示,分离菌株QPB1为革兰氏阴性杆菌,其16S rRNA基因序列与类志贺邻单胞菌(MK397781.1)的序列同源性达到99.79%;药敏试验表明QPB1对庆大霉素、环丙沙星等13种抗菌药物敏感,对红霉素、哌拉西林等7种抗菌药物耐药,并携带耐药基因tetA、tetM、sulⅠ、sulⅡ;中药抑菌试验表明,丁香、连翘、黄连等9种中药对QPB1表现出明显的抑制作用。试验表明,从患病框镜鲤中分离的优势菌株QPB1为类志贺邻单胞菌,其生物学特性、耐药基因型及抗菌药物的筛选为类志贺邻单胞菌的临床诊断和精准施治提供理论依据和实践参考。

蚕蛹替代鱼粉对框鳞镜鲤幼鱼生长性能、体成分及健康状况的影响

为研究蚕蛹替代鱼粉对框鳞镜鲤幼鱼生长性能、体成分及健康状况的影响,试验配制含10%鱼粉的基础饲料(CP 36.18%,EE 5.18%)和蚕蛹替代50%鱼粉蛋白的蚕蛹饲料(CP 35.38%,EE 5.06%),饱食饲喂饲养于室内循环水养殖系统中的框鳞镜鲤幼鱼(12.10±0.89)g 61 d,日投喂3次。结果显示,蚕蛹组与鱼粉组的末体质量、增重率、特定增长率、饲料系数、成活率等生长性能指标,肥满度、内脏指数、脾脏指数、肝胰脏指数、肠指数等生物学性状指标,以及全鱼、肌肉、肝胰脏的一般营养成分均无显著性差异(P>0.05);蚕蛹组全鱼Lys水平和肌肉Tyr水平,肌肉C14∶0、C16∶1n-7、C18∶1n-7水平显著低于鱼粉组(P<0.05),C18∶3n-3、∑n-3PUFA水平显著高于鱼粉组(P<0.05),肝胰脏C18∶3n-3、C22∶5n-3水平显著高于鱼粉组(P<0.05),动脉粥样硬化指数(IA)和促凝血指数(IT)差异不显著(P>0.05);蚕蛹组和鱼粉组血清生化指标无显著性差异(P>0.05);蚕蛹组和鱼粉组的前肠和中肠肠道褶皱高度、褶皱密度、褶皱宽度、粘膜下层厚度没有明显差异(P>0.05),蚕蛹组前肠肌层显著较鱼粉组薄(P<0.05),中肠没有显著差异(P>0.05)。在本试验条件下,综合考虑其生长指标、体成分、血清生化指标及肠道组织结构形态,蚕蛹替代框鳞镜鲤日粮中50%鱼粉蛋白对机体氨基酸和脂肪酸组成有一定影响,但不影响框鳞镜鲤的健康状况,且有促进生长及饲料利用的趋势。

框鳞镜鲤♀×青鱼♂杂种F)1胚胎发育和仔鱼早期发育初步研究

采用人工催产和干法受精技术,对框鳞镜鲤♀×青鱼♂进行了2次杂交试验,共获受精卵878.9万粒,用网箱和环道孵化方法共得到培育4d仔鱼358万尾。受精率94.15%,孵化率51.4%。水温控制在23～24℃,受精后5min胚盘隆起,约58min进入2细胞期,1h10min进入4细胞期,1h25min进入8细胞期,1h43min进入16细胞期,1h53min进入32细胞期,2h20min进入多细胞期,2h49min进入囊胚早期,4h30min进入囊胚中期,5h18min进入囊胚晚期,6h30min进入原肠早期,7h30min进入原肠中期,9h30min进入原肠晚期,10h20min进入神经胚期,12h00min进入胚孔封闭期,14h30min进入眼泡出现期,18h20min进入尾芽期,23h30min进入晶体出现期,25h00min进入肌肉效应期,27h55min进入心脏搏动期,40h33min至45h30min为孵出期。胚后发育观察到4日龄,4日龄后下塘培育乌仔,该杂交组合胚胎发育时间介于双亲之间。同时,观察了杂种胚胎发育各时期中自卵裂、囊胚、原肠作用、器官形成至孵出期的发育异常现象,畸形率为51.8%。

蚕蛹基础日粮中添加不同脂肪源对框鳞镜鲤生长、体成分及健康状况的影响

将324尾健康框鳞镜鲤Cyprinus carpio var.specularis(10.70±0.70)g随机平均分配在室内循环水养殖系统的12个养殖缸里。在蚕蛹基础饲料中分别添加2%的大豆油(SO)、菜籽油(RO)、鱼油(FO)及混合油(MIX,大豆油∶菜籽油∶鱼油=1∶1∶1),配制4组等氮(36.5%)等脂(7.0%)饲料,饲养58d后,探讨框鳞镜鲤对不同脂肪源的利用效果。结果表明:(1)大豆油组终末体重显著大于混和油组,肠长比显著大于其他各组,肥满度和肠指数显著大于鱼油组(P<0.05);肝胰脏指数混合油组显著低于鱼油组和大豆油组,菜籽油组显著低于大豆油组(P<0.05);(2)全鱼水分大豆油组显著高于菜籽油组和混合油组,粗脂肪含量显著低于其他各组(P<0.05);肌肉水分大豆油组显著大于鱼油组和混合油组(P<0.05);不同脂肪源对框鲤全鱼和肌肉的粗蛋白和灰分、肌肉粗脂肪、肝胰脏的一般体成分无显著影响(P>0.05);(3)肝胰脏和肌肉脂肪酸组成基本反映了饲料的脂肪酸组成;肝胰脏PUFA水平大豆油和菜籽油组相近,均显著高于鱼油组(P<0.05);肌肉PUFA水平大豆油组显著高于鱼油组(P<0.05),肌肉HUFA水平菜籽油组显著高于鱼油组和混合油组(P<0.05);(4)除菜籽油组血清GLU水平显著高于大豆油组外(P<0.05),4种脂肪源对框鲤其他血清生化指标水平没有显著影响(P>0.05);(5)组间血清T-SOD活性没有显著差异(P>0.05),大豆油组GSH-XP活性显著大于其他各组(P<0.05),MDA水平显著低于鱼油组及混合油组(P<0.05),鱼油组血清AKP活性显著低于其他各组(P<0.05);鱼油组肝胰脏T-SOD活性显著高于其他各组(P<0.05),AKP活性显著高于菜籽油组和混合油(P<0.05),GSH-XP活性显著高于混合油组(P<0.05),MDA水平各组无显著差异(P>0.05)。综上所述,框鳞镜鲤对大豆油的利用效果最好,其次是菜籽油、鱼油和混合油利用效果较差。

基于框鳞镜鲤形体和营养特征的分类研究

根据不同季节框鳞镜鲤的形体参数、背部和腹部肌肉的营养成分,采用因子分析和系统聚类对框的鳞镜鲤进行特征分类研究。结果表明:框鳞镜鲤在春、夏季的主要形体特征是体形较大,内脏比例较高,鱼皮比例较低;而秋、冬季的特征主要是体形较小,鱼鳞、内脏比例较低而肌肉比例较高。腹部肌肉在春、夏季的主要特征是蛋白质、游离氨基酸、灰分含量较低,而水分含较高;秋季的主要特征是蛋白质和灰分含量较高,水分含量较低;冬季的主要特征是蛋白质、粗脂肪、总糖含量较高,水分较低。背部肌肉在春季的特征是蛋白质、粗脂肪、总糖和灰分含量较低,游离氨基酸和水分含量较高;在夏季的主要特征是粗脂肪和总糖含量较高,游离氨基酸、灰分、水分较低;而在秋、冬两季的特征主要是粗脂肪、总糖和水分含量较低,蛋白质、游离氨基酸及灰分含量较高。

框鳞镜鲤鱼片注射腌制工艺的研究

以框鳞镜鲤鱼片为对象,研究了NaCl添加量、转谷氨酰胺酶(TGase)添加量、腌制温度和腌制时间对框鳞镜鲤鱼片品质的影响,以开发框鳞镜鲤鱼片的注射腌制工艺。结果表明,框鳞镜鲤鱼片注射腌制过程中,NaCl添加量、TGase用量、腌制温度和腌制时间对框鳞镜鲤鱼片的品质有明显影响。在低温腌制时,TGase添加量对鱼片质构参数的影响不明显,而NaCl添加量、腌制时间对鱼片的弹性、咀嚼性有明显影响,腌制温度和时间则对鱼片的黏聚性有明显影响。经正交实验,其适宜的注射腌制条件为:NaCl添加量0.75%、转谷氨酰胺酶添加量1.5%、腌制温度10℃和腌制时间4h。

加装集污装置对水库投饵网箱养殖框鳞镜鲤生长及氮、磷排放的影响

为降低投饵网箱养鱼氮、磷排放对水库水体的影响,探求生态网箱养殖模式,以体质量为(167.81±34.66)g的框鳞镜鲤幼鱼为研究对象,对加装集污装置的网箱与传统网箱养殖框鳞镜鲤的生长情况和氮(N)、磷(P)的输入和回收情况进行了比较实验。结果表明:集污网箱框鳞镜鲤的生长性能明显优于传统网箱,加装集污装置对框鳞镜鲤的存活率无显著影响。集污网箱和传统网箱中N的回收率分别为76.83%和44.14%,P的回收率分别为63.13%和35.18%,2组网箱间差异极显著;集污网箱和传统网箱中N的利用率分别为28.36%和25.57%,P的利用率分别为21.30%和18.25%,集污网箱中N、P的利用率均高于传统网箱且差异显著;投饵网箱加装集污装置后减少了氮、磷向水库水体的排放,减轻了网箱养殖对环境的富营养化影响。

膨化花椒籽对框鳞镜鲤生长性能、体成分和健康状况的影响

为研究花椒籽膨化后对框鳞镜鲤生长性能、体成分和健康状况的影响,配制分别含4%膨化花椒籽和花椒籽的饲料,饱食投喂饲养于室内水泥池中的框鳞镜鲤幼鱼[(29.61±0.46)g]58 d,日投喂3次。试验结果表明,膨化组和对照组之间的采食量、特定生长率、成活率、饲料系数、内脏指数、肝胰脏指数、腹腔脂肪指数和肠体比无显著性差异(P>0.05),而膨化组肥满度、肾脏指数和脾脏指数均显著低于对照组(P<0.05);膨化组和对照组全鱼、肝脏和肌肉的粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分和水分无显著性差异(P>0.05);膨化组全鱼C161n-7、C182n-6、Σn-6 PUFA、C183n-3水平,肌肉C201n-9、C224n-6水平,肝胰脏C201n-9、Σn-6 PUFA、C205n-3水平,腹腔脂肪组织ΣMUFA水平均显著低于对照组(P<0.05);膨化组和对照组之间的肠道胰蛋白酶、脂肪酶和血清生化指标均没有显著性差异(P>0.05)。本试验条件下,饲喂膨化花椒籽没有促进框鳞镜鲤生长的作用,且会降低鱼体不饱和脂肪酸含量和免疫器官肾脏指数和脾脏指数,对框鳞镜鲤品质和健康存在一定的负面影响。研究认为,花椒籽在鲤鱼饲料中不宜膨化后使用。

网箱养殖框鳞镜鲤成鱼越冬试验

2008年12月-2009年5月,在集安市渭源水库—吉林省水产科学研究院标准化网箱养殖基地,进行了网箱养殖框鳞镜鲤成鱼越冬试验。试验用两只网箱,分别为规格12m×6m×4m、养殖4区的9号箱和规格为18m×9m×6m、养殖2区的10号箱。两只网箱均为无盖聚乙烯双层网箱、不沉箱原箱越冬。2008年12月13日和2009年5月1日,对两只网箱的框鳞镜鲤进行越冬前后原箱鱼全称重,抽样检测尾重、换算出尾数,记录总重、个体重和总尾数。试验结果,4区9号箱成活率99.15%,总体减重率9.38%,个体减重率8.6%;2区10号箱成活率98.67%,总体减重率6.6%,个体减重率5.4%。