桉叶提取物抑制黄嘌呤氧化酶活性成分的分离纯化及其动力学研究

为了对尾巨桉属广林9号品种桉叶提取物进行体外抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)活性研究,并对其主要活性成分进行分离纯化、结构鉴定及抑制动力学研究。采用高效液相色谱法(HPLC)检测酶反应生成尿酸的量,以甲醇-K2HPO4缓冲液(50 mmol/L,pH值7.5)(5∶95)为流动相,检测波长为290 nm,测定了桉叶的不同溶剂提取物及其萃取组分对XOD活性的抑制作用,确定了最佳提取条件,并采用Diaion HP-20大孔树脂、反相硅胶柱层析法和制备液相色谱仪进行分离纯化。确定桉叶中最高活性单体为鞣花酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷酸和五没食子酰葡萄糖,测得其IC50分别为22.51、32.96、31.75μg/mL;并通过酶抑制动力学试验比较了他们的抑制类型和Ki值,得出鞣花酸的Ki值最小、为1.048μg/mL,可知其抑制黄嘌呤氧化酶活性效果在3种活性单体中最优。

桉叶提取物与常用抗氧化剂活性比较研究

采用清除DPPH自由基法、清除ABTS自由基法、对Fe3+还原能力法(FRAP)、氧自由基吸收能力法(ORAC)以及抗脂质过氧化法,分别比较广林9号桉叶提取物(G9EX)与茶多酚、BHA、BHT、TBHQ、Vc、VE常用抗氧化剂抗氧化活性。结果表明,G9EX清除DPPH自由基能力强于相同浓度茶多酚、BHA、BHT、VE,弱于TBHQ、Vc;其清除ABTS自由基能力强于相同浓度茶多酚、BHA、BHT、Vc、VE,弱于TBHQ;其对Fe3+还原能力强于相同浓度茶多酚、BHA、BHT、VE,弱于TBHQ、Vc;G9EX有着良好的抗脂质过氧化能力,效果与BHA、BHT相当,但弱于茶多酚、TBHQ、VE;G9EX的ORAC值为5.46μmolTE/mg,高于茶多酚(4.8μmolTE/mg),约为Vc(1.5μmolTE/mg)3.6倍、VE(1.4μmolTE/mg)的3.9倍。桉叶提取物作为一种天然抗氧化剂有着良好的应用前景。

桉叶多酚提取物体内外抗氧化活性评价

桉叶资源丰富且生物活性高,但少有研究对桉叶多酚提取物进行系统的抗氧化活性评价。本实验旨在研究纯化后桉叶多酚提取物体内外抗氧化活性。以化学法、RAW264.7巨噬细胞模型、秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)模型为评价方法,以自由基清除率、抗氧化酶活力及线虫寿命等为指标,评价桉叶多酚提取物的抗氧化能力。结果表明,桉叶多酚提取物具有良好的自由基清除能力和还原能力,在一定质量浓度下效果接近抗坏血酸。桉叶多酚提取物能显著提高氧化损伤RAW264.7巨噬细胞内抗氧化酶(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶)活力和谷胱甘肽含量,并显著降低丙二醛含量(P<0.05),呈量效关系。此外,桉叶多酚提取物显著降低常规培养和氧化损伤条件下线虫体内活性氧积累量(P<0.05),提高线虫抗氧化能力,起到延长线虫寿命的作用。桉叶多酚提取物在体内外均表现出良好的抗氧化活性,具备开发食品抗氧化剂或功能食品的潜力。