桉柠蒎油抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子产生的作用及其机制研究

目的探究桉柠蒎油(ELP)抑制脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞炎症因子产生的作用及作用机制。方法构建LPS刺激的RAW264.7炎症细胞模型。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用Griess法检测一氧化氮(NO)的产生;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定LPS处理后培养液中炎症因子的浓度;采用Western-blot法检测蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测LPS处理后核转录因子κB亚基(p65)、激活子蛋白1亚基(c-Jun)和干扰素调节因子3(IRF3)的入核情况。结果ELP在6.25~400μg/mL的剂量范围内对LPS处理的RAW264.7细胞活力没有明显抑制作用。ELP(50~300μg/mL)能有效地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白介素-1β(IL-1β)和受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(Rantes)的产生。ELP能剂量依赖性地降低Toll样受体4(TLR4)信号通路关键蛋白kappa B抑制因子激酶α/β(IKKα/β)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p38、p65、核因子kappa B抑制蛋白α(IκBα)、c-Jun和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平。ELP同时能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞p65、c-Jun和IRF3的入核。结论ELP能剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子的产生,其作用机制与阻断TLR4/NF-κB、TLR4/AP-1和TLR4/IRF3信号通路有关。