桑白皮提取物中桑根酮C、桑根酮D及桑辛素的HPLC含量测定

目的:建立HPLC同时测定桑白皮提取物中桑根酮C、桑根酮D及桑辛素的含量测定方法,为其质量控制和评价提供参考。方法:采用InterSustain AQ-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈(A)-0.1%醋酸水(B),梯度洗脱(0~20 min,45%~70%A;20~26 min,70%~80%A);流速1 mL·min^-1;柱温30℃;检测波长276 nm。结果:3种成分均能实现完全分离,且与其他成分分离度良好。3种成分分别在0.280~4.480μg、0.196~3.136μg、0.054~0.865μg范围内呈良好的线性关系,回归系数分别为1.0000、0.9992、0.9992。桑根酮C、桑根酮D及桑辛素的平均加样回收率(n=6)分别为95.41%、101.02%、101.27%,RSD分别为1.91%、2.31%、1.84%。结论:所用方法操作简便,测定准确,重复性好,可用于桑白皮提取物的质量控制与评价。

桑根酮C吸入型粉雾剂的制备与体外性能初步评价

目的 设计制备桑根酮C吸入型粉雾剂,并对其粉体学性质、吸入性能及稳定性等方面进行初步评价。方法 选择聚乳酸-羟基乙酸共聚物为载体材料,以二氯甲烷和乙酸乙酯为溶剂,聚乙烯醇为乳化剂,采用乳化-溶剂挥发法来制备桑根酮C微球,并采用冷冻干燥制备粉雾剂;对粉雾剂的载药量、包封率、粉体学性质、吸入性能及稳定性等进行考察。结果 所制备的桑根酮C微球呈球形,粉雾剂中微球的粒径为(4.86±0.89)μm, zeta电位为(-4.37±1.10) mV,符合吸入制剂要求;水分含量为(3.01±0.59)%,吸湿增重百分率为(1.96±0.57)%,略有引湿性;堆密度为(0.136±0.005) g/mL,休止角为(24.31±2.54)°,粉体流动性良好;能迅速雾化,雾化性能良好,排空率均大于规定值90%;包封率高,约为100%,载药量为(0.764±0.011)%;pH值为中性,且在不同温度下稳定性良好。结论 所制备的桑根酮C吸入型粉雾剂达到了预期目标,为该制剂的后期生物应用提供了一定的实验基础。

不同来源桑白皮降压成分桑根酮C含量测定

目的 :研究不同来源桑白皮中桑根酮C含量和测定方法。方法 :用HPLC法测定 ,以MeOH H2 O(75∶2 5 )为流动相 ,2 80nm为检测波长。结果 :桑根酮C平均回收率为 96 .94 % ,RSD为 1.72 % ,线性范围为 0 .32～ 4 .80 μg。不同来源最高含量 0 .5 5 % ,最低含量 0 .0 2 %。结论 :HPLC方法稳定可靠 。

从桑白皮中提取药物成分桑根酮C

开发了从中药桑白皮中分离和精制桑根酮 C的工艺路线 .用紫外光谱、红外光谱、质谱以及核磁共振谱 (13 C- NMR与 1H- NMR)进行结构鉴定 ,证实其为桑根酮 C(Sanggenon C)

桑根酮C通过激活caspase 3及caspase 9诱导前列腺癌PC3细胞凋亡

目的探讨桑根酮C诱导雄激素非依赖型前列腺癌PC3细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 MTT法检测桑根酮C对PC3细胞増殖的抑制作用:实验分6组,分别加入不同浓度的桑根酮C(0、1、5、20、50、100μmol/L),作用24 h检测细胞生长抑制率;20μmol/L桑根酮C加入PC3细胞,分别于0、6、12、24、48 h收集细胞,MTT法检测生长抑制率。流式细胞技术检测细胞凋亡率:20μmol/L桑根酮C加入PC3细胞,分别于0、12、24、48 h收集细胞检测凋亡率。荧光分光光度计检测caspase 3的活性:20μmol/L桑根酮C作用PC3细胞,分别在0、6、12、18、24、48 h收集细胞,检测caspases 3的活性。MTT法检测caspase 3、caspase 8及caspase 9抑制剂对桑根酮C抑制PC3细胞增殖的影响:实验分4组,分别加入DMSO、z-DEVD-fmk、z-LEHD-fmk及z-IETD-fmk,1 h加入桑根酮C,24 h收集细胞,MTT法计算细胞生长抑制率。结果桑根酮C能抑制PC3细胞的增殖,呈剂量、时间依赖性,桑根酮C 1、5、20、50、100μmol/L作用PC3细胞24 h的增值抑制率分别为:4.86%、12.92%、52.34%、82.05%、87.45%,1μmol/L组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),其他组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。半数有效抑制浓度IC50为18.76μmol/L。20μmol/L桑根酮C作用PC3细胞,分别在6、12、24、48、72 h检测增值抑制率为:10.57%、27.09%、51.88%、80.73%、87.99%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。20μmol/L桑根酮C可诱导PC3细胞的凋亡,在12、24、48 h的凋亡率分别为:7.43%、20.91%、37.56%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。检测caspases 3的活性18 h比对照组增加了7.6倍,应用caspase抑制剂后发现caspase 3及caspase 9的抑制剂可显著逆转桑根酮C对PC3细胞增殖的抑制作用,抑制率从52.48%降到24.29%及28.81%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。而caspase8抑制剂作用不明显,与对照组相比差异没有统计学意义(P>0.05)。结论桑根酮C可通过激活caspase 3及caspase 9途径诱导PC3细胞的凋亡。

桑白皮的鉴别及蜜炙炮制对其主要成分桑根酮C含量的影响

研究桑白皮的各种理化鉴别方法,蜜炙炮制后分离和精制有效成分桑根酮C,并分析蜜炙炮制对其的影响。方法:对桑白皮性状、显微结构、主要的化学成分进行鉴别,采用传统工艺和干燥箱蜜炙炮制法分别炮制桑白皮,利用桑白皮的特性分离并纯化桑根酮C,用红外光谱和紫外光谱分析有效成分的组成。结论:鉴别结果证明实验用桑白皮为正品桑白皮,干燥箱蜜炙炮制法优于传统工艺法,通过分析光谱,纯化后药物中含有葡萄糖,蜜炙炮制对有效成分桑根酮C没有影响。

从桑白皮中提取药物成分桑根酮C及质量分析

桑白皮具有降血压、利尿利泻、杀菌消炎、止咳、抗浮肿、镇静抗惊厥的作用,中医主治肺热喘咳吐血、水肿、脚气,小便不利、糖尿病、传染性肝炎、产后出血不止,具有很好的药用价值。桑根酮C具有明显的降血压作用。通过提取桑白皮中的有效成分桑根酮C,对提取出来的浸膏得率为10.6%,先后用丙酮,苯,乙醚萃取,得率分别为:62.7%、45%、20%。然后将乙醚萃取后的初产品过聚酰胺层析柱,得到比较纯的桑根酮C的初产品,将桑根酮C粉末与FeCl3,乙醇溶液反应显紫红色,测得桑根酮C的红外吸收光谱图,显示有羟基(3369cm-1),共轭羰基(1629cm-1),环氧键(1261cm-1,796.5cm-1),双键(1680～1620cm-1)等特征吸收峰。测得桑根酮C的紫外吸收光谱图显示在220nm,230nm,280nm,310nm有最大吸收,说明有共轭体系,其中283～288nm的紫外吸收验证分子中有共轭羰基,分子中有苯环。测得的官能团结构与桑根酮C的结构式基本一致。

高效液相色谱法测定不同生长年限和不同部位桑白皮中桑根酮C的含量

建立高效液相色谱法检测不同生长年限和不同部位桑白皮中桑根酮C的含量,采用SB-C18色谱柱（250mm×4.6mm）;以甲醇-水（75∶25）为流动相;检测波长280nm;柱温30℃.结果桑根酮C在0.730~2.920μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9999,n=6）,平均回收率为97.65%,RSD为2.24%.不同生长年限和不同部位桑白皮中桑根酮C含量差异较大,生长年限越长桑根酮C含量越高,主根中桑根酮C含量比根茎高,须根含量最低.

桑根酮C抗炎作用实验研究

目的:探讨桑根酮C对小鼠急性炎症反应的作用及其机制。方法:昆明小鼠随机分成6组,每组10只,分别腹腔注射桑根酮C 5、15、50、100 mg/kg、地塞米松5 mk/kg(阳性对照组)、相同体积的二甲基亚砜(DMSO,溶剂组),给药30 min后,各鼠腹腔注射0.6%醋酸0.2 m L/只,30 min后处死小鼠,剖腹收集腹腔洗液,应用紫外分光光度计测上清液吸光度A值分析桑根酮C对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响。6组给药30 min后观察桑根酮C对角叉菜胶所致小鼠足肿胀的影响,在各鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶30μL致炎,5 h后处死小鼠,对称剪下鼠足计算肿胀度。然后去皮剪碎后离心取上清液,用考马斯亮蓝法测蛋白的含量、ELISA法测定足跖组织中各种炎症反应因子髓过氧化物酶(MPO)、NO、前列腺素2(PGE2)、白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子(TNFα)的水平。结果:桑根酮C可抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加和抑制角叉菜胶引起的小鼠足肿胀,溶剂组A值和肿胀度均高于阳性对照组[0.693±0.101比0.491±0.051,(78.37±6.55)mg比(39.52±5.11)mg,均P<0.05],桑根酮C各剂量组A值和小鼠足肿胀度均低于溶剂组(均P<0.05),且随剂量的增加A值和足肿胀度降低明显,相关分析显示桑根酮C对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加和角叉菜胶所致小鼠足肿胀的抑制作用呈剂量效应关系(r=0.761,P=0.013;r=0.794,P=0.008)。桑根酮C各剂量组和阳性对照组能明显降低炎症反应渗出液中蛋白及MPO、NO、PGE2、TNFα及IL-1β的含量,各组各指标含量均低于溶剂组(均P<0.05),且随桑根酮C抑制各炎症反应因子的释放呈剂量效应关系。结论:桑根酮C通过减少中性粒细胞浸润及抑制各种炎症反应介质的生成和释放来发挥抗炎作用。

桑根酮C对游离脂肪酸诱导人肝癌HepG2细胞脂质蓄积的改善作用

目的:研究桑根酮C对游离脂肪酸诱导的人肝癌HepG2细胞脂质蓄积的改善作用。方法:将HepG2细胞分为对照组、模型组、非诺贝特组(10μmol/L)和桑根酮C低、中、高浓度组(2、4、8μmol/L),除对照组外,其余各组细胞加入1 mmol/L游离脂肪酸以诱导建立脂质蓄积模型,且各给药组加入相应含药培养基进行培养。采用油红O染色法观察细胞中脂质蓄积情况,并测定脂质水平和三酰甘油(TG)含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法和Western blot法检测细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)、成脂甾醇元件结合蛋白固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活物1α(PGC-1α)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组细胞核明显萎缩、体积变小,脂滴数明显增加;细胞中脂质水平、TG含量以及SREBP-1c、FAS的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),PPARα、CPT-1、SIRT1、PGC-1α的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,桑根酮C各浓度组细胞核萎缩不明显、体积大小正常,脂滴数明显减少;细胞中脂质水平、TG含量以及上述PPARα通路相关基因的mRNA和蛋白(桑根酮C低浓度组的SREBP-1c蛋白除外)表达水平均显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论:桑根酮C可改善HepG2细胞的脂质蓄积;其作用机制可能与调节PPARα信号通路、提高细胞脂质氧化能力、抑制脂质合成有关。

桑根酮C体内外抗肿瘤作用研究

目的研究桑根酮C对3种肿瘤细胞增殖的抑制作用及其体内抗肿瘤作用。方法体外实验,选取3种癌细胞,桑根酮C体外共同培养,SRB法测桑根酮C对肿瘤细胞增殖的影响,计算IC 50。B16F0、B16F10细胞给予不同浓度桑根酮C,考察对B16F0、B16F10细胞内外黑素色含量的影响。体内实验,建立小鼠H22肿瘤动物模型,3个剂量(12.5、25、50 mg/kg)桑根酮C腹腔注射于小鼠体内,10 d后,取瘤组织和脏器,考察桑根酮C对荷瘤小鼠肿瘤生长和脏器指数的影响。结果桑根酮C抑制B16F0、B16F10、HepG2细胞增殖,其中HepG2最为敏感,IC 50为50.58±0.03μmol/L。不同浓度的桑根酮C都可使B16F0、B16F10细胞内外黑素色含量增加。桑根酮C高、中、低剂量对移植瘤小鼠肿瘤生长的抑制率为35%~47%,呈剂量依赖性;与模型组比较,均有显著性差异(P<0.05)。而且桑根酮C对荷瘤小鼠脏器指数影响非常小,与空白组比较没有显著性差异。结论桑根酮C对3种肿瘤细胞增殖有抑制作用,其在体内有抗肿瘤作用,且对小鼠脏器不良影响小。

桑根酮C药理作用及其机制的研究进展

桑根酮C是一种从中药桑白皮中提取分离出来的黄酮类化合物。本文就桑根酮C的药理作用及其作用机制进行系统梳理和归纳,发现该成分可通过调控转化生长因子β_(1)、核因子κB来改善肺纤维化;可通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡来发挥抗肿瘤作用;可通过调控钙调磷酸酶/活化T细胞核因子2、过氧化物酶体增殖物激活受体α、Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶等多条信号通路,增强自噬,减轻炎症反应和降低氧化应激水平来发挥心脏保护、肝保护和神经保护作用;可通过抑制破骨细胞吸收并促进成骨细胞形成来发挥抗骨质疏松作用;对多种酶均有一定的抑制作用;可通过调控核因子κB信号通路来发挥抗炎作用;可通过清除自由基来发挥抗氧化作用。但有关桑根酮C的药理作用研究多集中在细胞和动物水平上,且具体作用机制尚不明确,今后仍需要开展基础研究和临床试验进行探索和验证。

用渗滤法从桑白皮中浸取桑根酮的动力学模型

研究了用渗滤法从桑白皮中浸取药用成分桑根酮C、D的动力学, 并建立了渗滤过程中的传质模型. 通过多参数拟合得到高浓度下桑根酮C、D在丙酮和桑白皮纤维间的浸取等温线, 以及在渗滤过程中的内扩散系数及液膜传质系数, 并关联了渗滤过程中液膜传质系数和流速的关系. 结果显示, 本文所建立的传质模型较好地反映了渗滤操作中的传质过程.

HPLC法同时测定桑白皮中5种成分

目的建立HPLC法同时测定桑白皮Morus alba L.中绿原酸、二氢桑色素、氧化白藜芦醇、桑辛素O、桑根酮C的含有量。方法桑白皮甲醇提取物的分析采用Dimonsiol C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.2%醋酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长340 nm。结果绿原酸、二氢桑色素、氧化白藜芦醇、桑辛素O、桑根酮C分别在3.25~104.00μg/mL(r=0.999 6)、4.81~154.00μg/mL(r=0.999 7)、5.38~172.00μg/mL(r=0.999 5)、1.88~60.00μg/mL(r=0.999 7)、11.19~358.00μg/mL(r=0.999 5)范围内线性关系良好。平均加样回收率分别为98.98%(RSD=1.70%)、100.73%(RSD=1.35%)、99.71%(RSD=1.64%)、100.07%(RSD=1.11%)、99.90%(RSD=2.16%)。结论该方法准确简便,重复性好,可用于桑白皮药材的质量控制。

桑白皮药材和黄酮提取物中异戊烯基黄酮类成分的鉴别与含量测定

目的:建立桑白皮药材和黄酮提取物中异戊烯基黄酮类成分的鉴别和的含量测定方法。方法:薄层色谱鉴别方法,采用硅胶G薄层板,三氯甲烷-甲酸-甲醇(5∶1∶0.3)为展开剂,紫外灯(365 nm)检视;以桑根酮C为对照,紫外-可见分光光度法测定总黄酮的含量;高效液相色谱法测定桑根酮C、D和桑辛素的含量。结果:薄层色谱鉴别,可见供试品色谱中与桑根酮D相应的荧光斑点;总黄酮测定,桑根酮C在0.0391~0.1564 mg·mL^(-1)浓度范围与吸光度呈良好线性关系,桑白皮药材平均回收率为97.4%,RSD=2.10%(n=5),黄酮提取物平均回收率为96.7%,RSD为1.49%(n=5);高效液相色谱法,桑根酮C、D及桑辛素分别在0.185~1.48μg、0.086~0.43μg、0.233~2.097μg进样量范围内与峰面积值呈良好线性关系,桑白皮药材中桑根酮C的回收率为98.8%,桑根酮D为98.6%,桑辛素为97.8%。RSD分别为2.61%、2.24%、2.06%(n=6)。黄酮提取物中桑根酮C的回收率为97.1%,桑根酮D为98.2%,桑辛素为97.3%;RSD分别为1.85%、2.32%、1.55%(n=6)。结论:该方法简单有效,可准确鉴别和测定桑白皮药材和黄酮提取物中的专属性成分的。

桑根酮C通过促进β-catenin的泛素化水平抑制胶质母细胞瘤的迁移侵袭能力

胶质母细胞瘤属于浸润性的恶性肿瘤,目前其化疗新药物的寻找和治疗仍待突破。桑根酮C(Sanggenon C,SC)来源于桑白皮,在多种癌症中发挥着抗肿瘤功效。本研究利用显微镜拍摄、transwell实验和免疫荧光实验验证了SC对胶质母细胞瘤的迁移侵袭能力的影响;基因富集、实时荧光定量PCR(real-time qPCR)以及泛素化实验用于阐明SC抑制胶质母细胞瘤迁移侵袭能力的分子机制。显微镜拍摄结果显示,对胶质母细胞瘤进行加药处理后细胞形态明显回缩,细胞迁移侵袭能力被削弱;Transwell实验和免疫荧光实验也验证了SC能抑制胶质母细胞瘤迁移侵袭能力的猜测;基因富集实验结果表明SC可能调控迁移侵袭相关基因的表达,并且影响Wnt/β-catenin信号通路的活性;Westernblotting揭示了SC可调控β-catenin的泛素化水平,并且抑制β-catenin及其下游蛋白的表达;Real-timeqPCR实验结果在转录水平上佐证Westernblotting的结果。SC通过调控β-catenin的泛素化水平抑制胶质母细胞瘤的迁移侵袭能力,为胶质母细胞瘤的治疗提供了新的思路。

HPLC法同时测定桑白皮中6种活性成分的含量

目的:建立同时测定桑白皮中新绿原酸、桑皮苷A、绿原酸、紫云英苷、桑根酮C和桑辛素等6种活性成分含量的方法,为完善桑白皮的质量控制标准提供参考。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent 5 TC-C_(18),流动相为乙腈-0.1%甲酸(梯度洗脱),流速为1 mL/min,检测波长为280 nm。结果:新绿原酸、桑皮苷A、绿原酸、紫云英苷、桑根酮C和桑辛素检测质量浓度的线性范围分别为0.001 06~0.042 4、0.001 67~0.066 8、0.007 95~0.318、0.001 65~0.066 0、0.005 00~0.200和0.001 24~0.049 6 mg/mL(r均≥0.999 6),定量限分别为0.11、0.14、0.81、0.17、0.45和0.12μg/m L,检测限分别为0.04、0.05、0.41、0.07、0.18和0.04μg/m L,精密度试验的RSD分别为0.26%、0.31%、0.24%、0.27%、0.36%和0.44%(n=6),稳定性试验的RSD分别为0.68%、0.54%、0.62%、0.53%、0.41%和0.73%(n=6),平均方法回收率为99.1%、98.8%、98.8%、98.4%、98.5%和99.9%(RSD为0.5%~1.5%,n=9)。结论:该法简便、准确,可用于桑白皮中6种活性成分的同时测定。

桑根酮C抑制人肝癌HepG2细胞增殖的作用及机制研究

目的观察桑根酮C对人肝癌细胞HepG2增殖的影响,探究其作用机制。方法细胞分为空白组,不同浓度桑根酮C组。运用MTT法检测HepG2细胞增殖的情况,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡和周期的变化;荧光检测法测定26S蛋白酶体的活性;蛋白免疫印迹法检测各组IκB-α、Bax、Bcl-2、p53、p27、p21及CyclinB1、Ub-Prs蛋白的表达。结果桑根酮C能够抑制HepG2细胞增殖,其IC_(50)值为(71.59±3.83);能促进HepG2细胞凋亡,成时间、剂量依赖性关系;可诱导细胞生长停滞在G2/M期;桑根酮C可抑制26S蛋白酶体活性,其中对CT-L的影响最强,IC_(50)值为(29.66±1.5);桑根酮C还可引起Bax、Bcl 2、cyclinB1、P21和P27、p53及Ub-Prs、IκB-α蛋白表达上调,Bax/Bcl2比值增大。结论桑根酮C通过蛋白酶体抑制途径诱导HepG2细胞凋亡和细胞周期阻滞,进而抑制HepG2细胞增殖。

HPLC双波长法同时测定桑白皮水提物中6个成分的含量

目的:建立HPLC双波长法同时测定桑白皮水提物中桑皮苷A、绿原酸、单宁酸、桑根酮D、桑酮G、桑根酮C等6个主要成分的含量。方法:色谱柱为Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈为流动相A,0.2%甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱;检测波长:270 nm(单宁酸、桑根酮D、桑酮G、桑根酮C)、320 nm(桑皮苷A、绿原酸);柱温:30℃;流速:1.0 mL·min^(-1);进样量:20μL。结果:桑皮苷A、绿原酸、单宁酸、桑根酮D、桑酮G、桑根酮C分别在3.24~647.20μg·mL^(-1)、3.22~643.60μg·mL^(-1)、2.50~588.80μg·mL^(-1)、3.28~656.80μg·mL^(-1)、3.19~637.20μg·mL^(-1)、3.10~619.60μg·mL^(-1)质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r>0.999);加样平均回收率分别为99.18%、99.06%、98.96%、98.76%、98.99%、98.90%(n=9),其RSD分别为0.45%、0.33%、0.59%、0.36%、0.47%、0.49%。结论:该方法的准确度、重复性、耐用性均良好,适合用于桑白皮水提物中桑皮苷A等6个主要成分的定量测定。

一种简单科学高效的桑白皮总黄酮含量测定方法

目的:建立一种简单科学高效的桑白皮总黄酮含量测定方法。方法:采用紫外-可见分光光度法,桑根酮C对照品溶液在200~800nm波长范围内进行光谱扫描,选定波长为293nm,然后进行含量测定,及方法学考察。结果:桑白皮总黄酮测定在4.1180~24.7080ug/mL(r^(2)=0.99975)内线性良好,平均回收率为95.95%,RSD=2.50%(n=6)。结论:该方法简单科学可行,精密度、重复性、稳定性良好,是一种高效的桑白皮含量测定方法。