桑椹花青素-3-葡萄糖苷对癫痫模型小鼠的保护作用及海马BDNF/TrkB通路的影响

目的:研究桑椹花青素-3-葡萄糖苷对癫痫模型小鼠的保护作用及海马脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)通路的影响。方法:将120只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、单药(桑椹花青素-3-葡萄糖苷)和激动剂联用组(桑椹花青素-3-葡萄糖苷+TrkB激动剂LM22B-10),每组30只。单药组和激动剂联用组小鼠每天灌胃600μg/kg桑椹花青素-3-葡萄糖苷1次、连续给药6周,激动剂联用组小鼠在给药第6周时每天侧脑室注入LM22B-10(5 mg/kg)1次;正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水。末次给药后,除正常组外,其余各组小鼠均采用氯化锂-匹罗卡品建立癫痫模型。造模成功后,各组分别取10只小鼠记录其癫痫自发性再发作的潜伏期、发作频率及持续时间,每天观察6 h,连续观察4周;并于造模第14、28、36天记录其脑电图,统计1 h内脑电波异常发生次数。于造模后第6天,各组分别取10只小鼠检测其血清钙离子水平,并取各组剩余10只小鼠检测其海马组织中BDNF mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠癫痫自发性再发作的潜伏期、发作频率、持续时间及造模第14、28、36天脑电波异常发生次数均显著增加(P<0.05),血清钙离子水平及海马BDNF mRNA、蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,单药组小鼠癫痫自发性再发作行为的潜伏期、发作频率、持续时间及造模第28、36天脑电波异常发生次数均显著减少(P<0.05),血清钙离子水平及海马BDNF mRNA、蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05);与单药组比较,激动剂联用组小鼠癫痫自发性再发作的潜伏期、发作频率、持续时间及造模第28、36天脑电波异常发生次数均显著增加(P<0.05),血清钙离子水平及海马BDNF mRNA、蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。结论:桑椹花青素-3-葡萄糖苷对癫痫模型小鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制海马BDNF/TrkB通路的激活有关。

用乙醇提取桑椹花青素的工艺优化及影响产品稳定性的因素分析

花青素是一种天然色素和抗氧化剂,但其易受多种因素影响而发生降解。以桑椹冻干粉为原料,采用乙醇浸提的方法,以花青素得率为考核指标,在单因素试验的基础上采用Box-Behnken设计及响应面试验方法优化桑椹花青素的提取工艺,并对影响桑椹花青素稳定性的因素进行分析。在料液质量浓度为0.073 g/m L、提取剂乙醇体积分数50%、提取液p H 1、提取温度78.02℃、提取时间1.5 h的优化工艺条件下,用桑椹冻干粉提取花青素的得率达到6.93%。采用上述优化工艺提取桑椹花青素在保证提取得率的前提下,更加经济有效。提取的桑椹花青素在p H值为1时稳定性最好,H_2O_2对桑椹花青素有强烈的破坏作用,高浓度的Na_2S_2O_3也会使其发生降解;紫外光、室外自然光、室内散射光对桑椹花青素的稳定性均有影响;Na^+、Mg^(2+)、Ca^(2+)、Zn^(2+)、Fe^(2+)、Fe^(3+)等以及柠檬酸都对桑椹花青素有增色作用;高温(50~80℃)和蔗糖对桑椹花青素的稳定性无显著影响。由于桑椹花青素的不稳定性,在其产品加工及应用中需选择或设置适合的条件提高稳定性。

基于氯化胆碱/乙酸的桑椹花青素高效提取工艺

为建立新型绿色高效的桑椹花青素提取工艺体系,该研究以桑椹为原料,以低共熔溶剂(Deep eutectic solvents,DESs)为提取剂,探讨了DESs种类、含水量、料液比以及提取温度和提取时间对花青素提取效率的影响,并在单因素试验基础上,采用响应面试验设计优化了提取工艺条件。结果显示:在提取剂为氯化胆碱/乙酸(1/3 n/n)-水(80/20 V/V),料液比为1/10(g/mL)、提取温度为60℃,提取时间为40 min时,花青素的得率达6.35 mg/g,实验结果与响应面模型预测值接近,表明模型适用。此工艺提取桑椹花青素的效率远高于传统提取剂,这说明由适当比例氢键供体和受体所构成的DESs与目标产物之间强烈的氢键作用更有助于花青素的浸出和溶解。本研究结果为绿色可设计的DES溶剂用于天然产物的高效制备提供了借鉴。

桑椹矢车菊素-3-芸香糖苷抵抗链脲佐菌素诱导胰岛β细胞凋亡的作用

矢车菊素-3-芸香糖苷(C3R)是桑椹花青素的主要成分,研究从成熟桑椹中提取C3R对链脲佐菌素(STZ)诱导人源性胰岛β细胞凋亡的抑制作用及可能的调控机制。采用MTT法及流式细胞计数检测发现:桑椹C3R对正常胰岛β细胞株INS-1具有极显著的促增殖作用(P<0.01);50μg/m L桑椹C3R液处理STZ诱导凋亡模型胰岛β细胞株INS-1 48 h后,其早期凋亡、晚期凋亡和坏死的细胞数量极显著下降(P<0.01)。以经桑椹C3R液处理的STZ诱导凋亡模型胰岛β细胞的c DNA为模板,通过qRT-PCR检测细胞中的几个凋亡相关蛋白基因的转录水平变化,其中抗凋亡蛋白基因Bcl-x L的mRNA转录水平极显著上调(P<0.01),促凋亡蛋白基因Bad、Bax及Caspase 8、Caspase 6基因的mRNA转录水平极显著下调(P<0.01)。研究结果表明,桑椹C3R对STZ诱导的胰岛β细胞凋亡具有明显的抵抗作用,由此也证实了桑椹花青素的药用开发价值。