桑白皮黄酮提取物对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

【目的】观察桑白皮黄酮提取物对2型糖尿病大鼠(T2DM)胰岛素抵抗的作用。【方法】采用高脂饲料喂养联合糖皮质激素灌胃法复制2型糖尿病大鼠模型。将40只SD大鼠分成4组:正常对照组、模型组、罗格列酮组和桑白皮黄酮提取物组(以下简称中药组),每组10只。灌胃给药10周。于给药6、10周末,测量大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平,空腹胰岛素(INS)含量,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);于第10周末,做口服葡萄糖耐量试验(OGTT)。【结果】中药组可显著降低模型大鼠体质量(P<0.05或P<0.01),并低于正常对照组;模型组FBG、TC、TG、INS、HOMA-IR水平较正常对照组均显著升高(P<0.05或P<0.01);除给药6周的中药组FBG含量无显著变化外,其他中药组和罗格列酮组均可显著降低FBG、TC、TG、INS、HOMA-IR水平(P<0.05或P<0.01)。OGTT结果显示:模型组大鼠血糖在0 min以及口服葡萄糖后20、60、90、120 min时均显著高于正常对照组,且各时间点血糖值比较,差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.001);中药组在各个时间点的血糖值均低于模型组(P<0.01或P<0.001)。【结论】桑白皮黄酮提取物具有改善糖尿病大鼠糖耐量及胰岛素抵抗的作用。

桑白皮黄酮提取物通过调控miR-223-3p表达对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响

目的 探讨桑白皮黄酮提取物对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制。方法 体外培养小鼠足细胞,分为对照组、高糖组、高糖+桑白皮黄酮提取物组、高糖+miR-223-3p组、高糖+miR-NC组、高糖+桑白皮黄酮提取物+anti-miR-223-3p组和高糖+桑白皮黄酮提取物+anti-miR-NC组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)荧光定量法检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western印迹检测各组细胞中活化的半胱天冬酶(cleaved caspase)-3、足细胞损伤标志物去氧肾上腺素(Nephrin)、结蛋白(Desmin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中miR-223-3p表达水平。结果 与对照组比较,高糖组足细胞存活率、细胞中ROS和MDA水平及cleaved caspase-3、Desmin和Vimentin蛋白水平显著升高(P<0.05),SOD活力、Nephrin蛋白和miR-223-3p水平显著降低(P<0.05)。与高糖组比较,桑白皮黄酮提取物组足细胞存活率、细胞中ROS和MDA水平及cleaved caspase-3、Desmin和Vimentin蛋白水平显著降低(P<0.05),SOD活力、Nephrin蛋白和miR-223-3p水平显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-223-3p组足细胞存活率、细胞中ROS和MDA水平及cleaved caspase-3、Desmin和Vimentin蛋白水平显著降低(P<0.05),SOD活力和Nephrin蛋白水平显著升高(P<0.05)。与高糖+桑白皮黄酮提取物+anti-miR-NC组比较,高糖+桑白皮黄酮提取物+anti-miR-223-3p组足细胞存活率、细胞中ROS和MDA水平及cleaved caspase-3、Desmin和Vimentin蛋白水平显著升高(P<0.05),SOD活力和Nephrin蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论 桑白皮黄酮提取物可降低高糖引起的小鼠足细胞损伤,其作用机制可能与上调miR-223-3p表达有关。

桑白皮总黄酮对小鼠肺癌模型的影响及相关机制

目的 探讨桑白皮总黄酮对小鼠肺癌模型的影响及相关机制。方法 将小鼠分为空白对照组(20只),模型组(14只),桑白皮总黄酮低(16只)、中(16只)、高剂量组(18只)。使用乌拉坦诱导建立小鼠肺癌模型,从造模首日开始,桑白皮总黄酮低、中、高剂量组分别灌胃桑白皮总黄酮15、30、60 mg/kg,对照组、模型组灌胃给予等体积的蒸馏水,1次/d,连续16周,第16周试验结束时统计各组存活小鼠的肺癌发生率、肺肿瘤结节数量。酶联免疫吸附法检测血清鳞状上皮细胞癌抗原、癌胚抗原、神经特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原199(CA199)浓度;免疫组化法检测小鼠肺组织中N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白表达阳性率;Western blot检测小鼠肺组织中PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平。结果 肺癌发生率、肺肿瘤结节数量在各组间比较差异具有统计学意义(P<0.01),各剂量桑白皮总黄酮组肺癌发生率、肺肿瘤结节数量均明显低于模型组(P<0.05);随着桑白皮总黄酮剂量的增加,肺癌发生率、肺肿瘤结节数量下降幅度逐渐明显。模型组血清鳞状上皮细胞癌抗原、癌胚抗原、NSE、CA125、CA199明显高于空白对照组(P<0.01),各剂量桑白皮总黄酮组血清鳞状上皮细胞癌抗原、癌胚抗原、NSE、CA125、CA199明显低于模型组(P<0.01);随着桑白皮总黄酮剂量的增加,血清鳞状上皮细胞癌抗原、癌胚抗原、NSE、CA125、CA199浓度逐渐降低。模型组小鼠肺组织中N-钙黏蛋白表达阳性率明显高于空白对照组,E-钙黏蛋白表达阳性率明显低于空白对照组(P<0.01),与模型组比较,各剂量桑白皮总黄酮组小鼠肺组织中N-钙黏蛋白表达阳性率明显降低,E-钙黏蛋白表达阳性率明显升高(P<0.05);随着桑白皮总黄酮剂量的增加,上述变化逐渐明显。模型组小鼠肺组织中PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平明显高于空白对照组(P<0.01),与模型组比较,各剂量桑白皮总黄酮组小鼠肺组织中PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.05);随着桑白皮总黄酮剂量的增加,PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平逐渐下降。结论 桑白皮总黄酮能够有效抑制乌拉坦诱导的小鼠肺癌发生及血清肿瘤标志物和上皮-间质转化过程,可能与抑制PI3K/AKT信号通路活化有关。

桑白皮黄酮提取物对2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝血管生成相关基因的影响

目的:初步探索桑白皮黄酮提取物对2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用及机制研究。方法:将24只雄性大鼠随机分为3组,分别为正常组、模型组、桑白皮黄酮组(1.0 g·kg^(-1))。采用腹腔注射小剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ)结合高脂饲料喂养的方法,建立2型糖尿病伴非酒精性脂肪肝的模型,灌胃治疗16周时,观察比较桑白皮黄酮提取物对各组大鼠血清中空腹血糖(FBG),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),糖耐量(OGTT)变化,油红O染色和苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF)mRNA的表达。结果:灌胃干预16周后,与正常组比较,模型组大鼠FBG,TC,TG,LDL-C,含量均显著高于正常组(P<0.05),应用桑白皮黄酮治疗后,上述生化指标较模型组均有显著下降(P<0.05)。糖耐量试验显示模型组胰岛素敏感性下降,应用桑白皮黄酮治疗后胰岛素敏感性较模型组有显著改善。油红O染色结果显示模型组肝细胞胞浆内可见大量红染的脂肪滴,而桑白皮黄酮组肝细胞胞浆内未见红染的脂肪滴。HE染色结果显示模型组肝小叶中肝细胞发生明显的小泡样脂肪变性,部分肝细胞中脂滴融合成大的脂肪空泡,小叶中可见点状坏死,周围有炎性细胞浸润,而桑白皮黄酮组肝细胞结构正常。模型组肝脏中VEGF,PDGF mRNA表达量较正常组有显著升高,应用桑白皮黄酮治疗后,肝脏中VEGF,PDGF mRNA表达量明显降低(P<0.05)。结论:桑白皮黄酮提取物对实验性2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪性肝有一定的防治作用,其作用机制可能与抑制肝脏中VEGF,PDGF mRNA的表达有关。

桑白皮总黄酮的镇痛抗炎药理作用研究

目的研究桑白皮总黄酮的镇痛抗炎药理作用。方法采用小鼠扭体法和热板法镇痛实验,研究桑白皮总黄酮的镇痛作用,通过观察桑白皮总黄酮对小鼠毛细血管通透性和二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响,研究其抗炎作用。结果桑白皮总黄酮(400,800 mg/kg)能明显减少醋酸所致小鼠的扭体次数,而对热板法所致疼痛无明显作用,桑白皮总黄酮(400mg/kg)能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀和醋酸所致的毛细血管通透性增加。结论桑白皮总黄酮具有一定的外周性镇痛作用和抗炎作用。

桑白皮总黄酮对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究桑白皮总黄酮对小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用常规急性肝损伤模型,测定桑白皮总黄酮对小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性。结果桑白皮总黄酮可明显降低四氯化碳(CCl4)(P<0.05,P<0.01)、对乙酰氨基酚(AAP)(P<0.05,P<0.01)致小鼠急性肝损伤模型血清ALT、AST的活性,而对硫代乙酰胺(TAA)致小鼠急性肝损伤模型血清ALT、AST活性无明显作用。结论桑白皮总黄酮对CCl4、AAP所致的小鼠肝损伤有明显保护作用。

桑白皮总黄酮对小鼠睡眠功能和自发活动影响的研究

目的研究桑白皮总黄酮对小鼠睡眠功能和自发活动的影响。方法 1)催眠:昆明种小鼠随机分为生理盐水对照组、1.0 mg/kg桑白皮总黄酮组、2.0 mg/kg桑白皮总黄酮组、4.0 mg/kg桑白皮总黄酮组(下同),观察给药后桑白皮总黄酮对各组小鼠阈上剂量和阈下剂量戊巴比妥钠睡眠时间和入睡时间(睡眠作用)的影响;2)自发活动:采用抖笼法测定桑白皮总黄酮对小鼠自发活动(镇静作用)的影响。结果 1)各剂量的桑白皮总黄酮均能显著缩短阈上剂量和阈下剂量戊巴比妥钠的入睡时间和显著延长阈上剂量和阈下剂量戊巴比妥钠的睡眠时间;2)各剂量的桑白皮总黄酮对小鼠自发活动均具有明显抑制作用,均能明显减少中波和大波的活动。结论桑白皮总黄酮具有明显的抑制小鼠自发活动和镇静催眠作用。

桑白皮总黄酮抑制分泌性中耳炎大鼠耳黏膜的自噬作用

目的探讨桑白皮总黄酮对分泌性中耳炎(OME)大鼠耳黏膜水肿的改善以及对自噬的影响。方法26只大鼠腹腔注射卵清蛋白致敏后耳内激发建立OME模型,建立模型成功后,将26只大鼠随机分为模型组和治疗组,每组13只,另取10只大鼠作为正常组。治疗组大鼠灌胃桑白皮总黄酮25 mg·kg^(-1),正常组和模型组大鼠灌胃等剂量生理盐水,连续给药2周。ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达,HE染色观察中耳组织病理学变化,TUNEL染色检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p62蛋白相对表达量。结果模型组大鼠耳黏膜细胞肿胀,黏膜厚度增加,炎症细胞浸润,可见多处细胞脱落;治疗组耳黏膜细胞肿胀情况好转,少量黏膜细胞脱落,炎症细胞浸润减少。与正常组比较,模型组TNF-α、IL-6和IL-1β含量、细胞凋亡率、Beclin1以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,p62蛋白相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,治疗组TNF-α、IL-6和IL-1β含量、细胞凋亡率、Beclin1以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相对表达量降低,p62蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论桑白皮总黄酮可改善OME大鼠耳黏膜水肿及炎症反应,可能是通过抑制自噬发挥作用。

桑白皮总黄酮对哮喘小鼠气道炎症反应的保护作用

目的:探讨桑白皮总黄酮(TFCM)对哮喘小鼠气道炎症反应的保护作用及机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组,TFCM低、中、高剂量组,地塞米松阳性对照组。除正常组外,其余小鼠给予卵清蛋白(OVA)致敏和激发。TFCM各剂量组给予TFCM(50、100、200 mg/kg),阳性对照组给予地塞米松(0.5 mg/kg),正常组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液。将小鼠置于动物肺功能检测系统中测定肺阻力和肺顺应性值;收集小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF)及血液样本,用于白细胞介素IL-4、IL-5、IL-13、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)、黏蛋白MUC5AC、MUC5B、IgE水平测定和总细胞、白细胞分类计数;肺组织HE、AB-PAS染色观察气道炎症情况。结果:与模型组比,TFCM处理可以显著升高小鼠肺阻力,降低肺顺应性(P<0.05);中、高剂量TFCM显著减少小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、巨噬细胞数量和下调IL-4、IL-5、IL-13、Eotaxin、IgE、MUC5AC、MUC5B水平(P<0.05);另外小鼠肺组织HE、AB-PAS染色结果显示TFCM可以使小鼠肺组织气道炎症明显减轻。结论:TFCM可以减轻小鼠气道炎症反应,且对小鼠哮喘有显著疗效。

桑白皮总黄酮通过调控TXNIP对高糖诱导的HK-2损伤的影响

目的:探讨桑白皮总黄酮对高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的影响,分析其机制是否与调控硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)表达有关。方法:用30 mmol/L葡萄糖处理HK-2细胞构建体外损伤模型。运用CCK-8法、流式细胞术、Western blot分析不同剂量的桑白皮总黄酮对高糖诱导的HK-2细胞活力、凋亡率、TXNIP表达的影响。商品试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。采用上述方法分析抑制TXNIP表达对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响。结果:高糖处理后HK-2细胞活力、SOD活性显著降低(P<0.05),凋亡率、TXNIP蛋白表达、MDA含量显著升高(P<0.05)。低、中、高剂量的桑白皮总黄酮显著增加高糖诱导HK-2细胞的活力、SOD活性,降低细胞凋亡率、TXNIP蛋白表达、MDA含量(P<0.05)。抑制TXNIP表达显著增加高糖诱导HK-2细胞的活力、SOD活性(P<0.05),降低细胞凋亡率、MDA含量(P<0.05)。过表达TXNIP可减弱桑白皮总黄酮对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用(P<0.05)。结论:桑白皮总黄酮通过下调TXNIP可减弱高糖诱导的HK-2凋亡和氧化损伤。

桑白皮不同部位对实验性高脂糖尿病小鼠的影响

目的建立实验性高脂糖尿病小鼠模型,分析桑白皮不同部位对其糖、脂质代谢以及股骨的影响。方法将70只雄性C57BL/6N小鼠根据体质量、血糖水平随机分为7组:即正常对照组、模型组、阳性药(二甲双胍)组、桑白皮总黄酮(MTF)组、桑白皮总生物碱(MTA)组、桑白皮总多糖(MTP)组、桑白皮药材提取物(ME)组,每组10只。高脂饲料(HFD)喂养,第7周测定小鼠血糖、血脂水平;第8周,用高脂饲料结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病小鼠模型;第9周,测定小鼠血糖、血脂水平,第10周小鼠不禁食,乙醚麻醉,摘眼球取血后解剖取各脏器以及股骨,称质量并测定空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平,股骨做病理切片。结果与正常对照组比较,模型组的血糖、血脂指标明显升高(P<0.01);与模型组比较,MTF组、MTA组均能明显控制高脂饲料喂养的小鼠体质量(P<0.05,P<0.01),其中MTF组能显著降低糖尿病小鼠FBG,TC,TG,LDL-C水平(P<0.05,P<0.01);MTA组能明显降低小鼠FBG、TC、TG水平(P<0.05);MTP组能明显抑制糖尿病小鼠TC、TG水平(P<0.05);MTF组和MTA组均能明显降低糖尿病小鼠尿酸(UA)和总胆红素(TBIL)水平(P<0.05)。病理切片表明正常对照组小鼠股骨未见异常;模型组小鼠股骨有不同程度的变形并且伴有骨密度的改变;MTF组小鼠6例中有3例不同程度病变。结论桑白皮各部位均具有一定的降糖作用,其中MTF对糖尿病小鼠的各项指标改善最为显著,同时对糖尿病导致的骨质疏松以及股骨头病变有抑制作用;其次是MTA,对FBG、TC、TG指标的改善作用也非常明显,MTP对指标的改善作用没有MTF和MTA显著,主要改善小鼠TG、TC水平。而ME对小鼠的各项指标均无明显影响,可能与给药剂量和提取方法有关。

桑白皮不同有效部位群对小鼠呼吸道合胞病毒肺炎肺指数及肺组织病毒载量的影响

目的探讨桑白皮不同有效部位群对小鼠呼吸道合胞病毒肺炎病毒载量的影响。方法小鼠按体质量等级随机分为5组,分别为正常组、模型组、桑白皮总黄酮组、桑白皮总多糖组、病毒唑组,每组30只。以呼吸道合胞病毒滴鼻感染小鼠,治疗组分别予桑白皮总黄酮、桑白皮总多糖、病毒唑干预。每日观察小鼠的生存状态;呼吸道合胞病毒感染后3、5、7 d计算肺指数,实时荧光定量PCR(real time RT-PCR)检测小鼠肺组织中病毒载量。结果模型组与正常组比较肺指数在不同时间点有不同程度的增高(P<0.05);各治疗组与模型组比较,第3、5、7天肺指数均明显降低(P<0.05),总黄酮及总多糖组明显优于病毒唑组(P<0.05)。正常组肺组织未检测到呼吸道合胞病毒,模型组病毒载量随时间逐渐增多。各治疗组与模型组相比各时间点病毒载量有不同程度降低,但桑白皮总黄酮组最低,与桑白皮总多糖及病毒唑组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论桑白皮总黄酮对呼吸道合胞病毒肺炎有一定的治疗作用,优于桑白皮总多糖及病毒唑组。

桑白皮总黄酮联合知母总皂苷改善高脂血症伴骨质疏松症大鼠的作用机制

目的:探讨桑白皮总黄酮联合知母总皂苷对高脂血伴骨质疏松症大鼠的改善作用及其可能的机制。方法:40只SPF级雄性SD大鼠适应性喂养7 d后,随机分为正常组、模型组、骨化三醇组(45 ng·kg^(-1)),桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组(0.6 g·kg^(-1)+0.4 g·kg^(-1))和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组(1.2 g·kg^(-1)+0.2 g·kg^(-1))。除正常组外,其余各组大鼠高脂饲喂造模9周;正常组与模型组灌胃给予生理盐水,其他组灌胃给予相应药物;给药12周后,除正常组外,其余各组给药的同时肌肉注射糖皮质激素,给药22周后测定各组大鼠的体质量,生化法检测血清中总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),骨钙素(BGP)及骨碱性磷酸酶(BALP)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胫骨病理形态变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠骨组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA的表达水平;免疫荧光法检测大鼠PPARγ,Runx2的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量显著升高(P<0.01),血清中TC,TG,LDL-C含量显著增加(P<0.01);与模型组比较,桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组大鼠体质量显著降低(P<0.01),血清中TC,TG,LDL-C含量显著降低(P<0.01),BGP,BALP含量显著升高(P<0.01)。HE染色结果表明,与正常组比较,模型组大鼠胫骨脂肪空泡增多,成骨细胞数量减少;与模型组比较,桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组大鼠胫骨脂肪空泡减小,成骨细胞数量增加。免疫荧光与Real-time PCR结果表明,与正常组比较,模型组大鼠Runx2表达减少,PPARγ表达增加(P<0.01),与模型组比较,桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组上调Runx2的表达,下调PPARγ的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:桑白皮总黄酮联合知母总皂苷可上调Runx2,下调PPARγmRNA和蛋白的表达,从而影响了血液中TG和TC代谢,达到对骨质疏松的治疗作用,为临床防治高脂血症伴骨质疏松症的治疗提供了实验依据。