桑葚花色苷对PC12细胞氧化损伤的保护作用

通过建立大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)氧化应激损伤模型,探讨桑葚花青素中2个矢车菊素类化合物即矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)和矢车菊素-3-O-芸香糖苷(cyanidin-3-O-rutinoside,C3R)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的细胞氧化损伤的保护作用及相关作用机制。采用噻唑蓝法检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,试剂盒测定细胞中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)以及过氧化氢酶(catalase,CAT)的水平。Western Blot检测抗氧化以及细胞凋亡蛋白的表达水平。结果表明,650μmol/L H_(2)O_(2)处理PC12细胞12 h后,细胞存活率显著降低(P<0.01),50、100μmol/L的C3G、C3R能显著升高细胞活力(P<0.05)及GSH、SOD和CAT等抗氧化酶的活性(P<0.05),降低细胞内ROS以及MDA的含量。此外50、100μmol/L的C3G、C3R处理后显著抑制PC12细胞内c-Jun氨基末端激酶和细胞外调节蛋白激酶蛋白磷酸化水平,抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3以及Bcl-2相关X蛋白等凋亡蛋白的表达(P<0.05),促进核因子E-2-相关因子和血红素加氧酶1抗氧化蛋白的表达水平。综上,C3G、C3R对H_(2)O_(2)所致的PC12细胞氧化损伤具有保护作用,可能与抑制细胞凋亡通路相关蛋白的表达,提高胞内抗氧化酶活性,清除胞内过量ROS,降低细胞凋亡有关。

桑葚花色苷酸奶发酵条件优化及品质分析

为促进桑葚花色苷在食品加工中的应用,提高其潜在的开发利用价值,该研究以桑葚花色苷、纯牛奶、白砂糖为主要原料,制备桑葚花色苷酸奶。以感官评分为主要评价指标,通过单因素、正交试验对桑葚花色苷酸奶发酵条件进行优化,并对桑葚花色苷酸奶的理化指标及抗氧化能力进行测定。结果表明,桑葚花色苷酸奶的最佳发酵条件为桑葚花色苷加热时间1 min、桑葚花色苷添加量4%、白砂糖添加量10%、菌种添加量0.15%、发酵时间8 h、发酵温度42℃,在此发酵条件下,桑葚花色苷酸奶感官评分为92分,1,1二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率达到68.6%,贮藏第13天仍可达到55.6%,具有较高的开发价值。

PEG/(NH_(4))_(2)SO_(4)双水相优化桑葚花色苷的萃取工艺

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相技术萃取桑葚花色苷,以萃取率为指标,通过单因素试验考察了料液比、超声时间、浸提温度和硫酸铵质量分数对萃取桑葚花色苷的影响,进一步通过正交试验优化萃取条件。结果表明,PEG/(NH_(4))_(2)SO_(4)双水相萃取桑葚花色苷的最佳工艺为料液比1:30、超声时间50 min、浸提温度50℃、硫酸铵质量分数20%。该工艺条件下桑葚花色苷的萃取率为96.01%。该工艺提取得到的桑葚花色苷稳定可行,结果重现性好。

桑葚花色苷诱导人胃癌SGC-7901细胞自噬凋亡的研究

目的:观察桑葚花色苷对人胃癌SGC-7901细胞自噬和凋亡的作用及机制。方法:MTT法检测桑葚花色苷对SGC-7901细胞增殖的作用;流式细胞术分析桑葚花色苷对SGC-7901细胞凋亡的影响;Hoechst33342/PI活细胞染色观察凋亡细胞核形态学变化;透射电镜观察SGC-7901细胞的超微结构变化。Western blot检测SGC-7901细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和凋亡蛋白BAX、BCL-2及Caspase-8的表达。结果:桑葚花色苷能抑制SGC-7901细胞增殖,流式细胞术及Hoechst33342/PI双染结果显示桑葚花色苷可诱导SGC-7901细胞凋亡。透射电镜观察显示桑葚花色苷干预后的SGC-7901细胞发生自噬。Western blot证实桑葚花色苷可提高SGC-7901细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,BAX/BCL-2比值以及Beclin1、Caspase-8的表达。结论:桑葚花色苷能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,诱导细胞出现凋亡和自噬,其机制与上调SGC-7901细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,BAX/BCL-2比值及Beclin1、Caspase-8的表达有关。

桑葚花色苷的提取及对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453生长的抑制

目的以超声辅助乙醇浸提法提取桑葚花色苷,观察其对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453体内外生长的抑制作用。方法将桑葚冷冻干燥,冷冻干粉于常温下用70%乙醇以1∶15的料液比超声提取1 h,提取液采用AmberliteTMXAD7HP型大孔吸附树脂以1 ml/min的吸附流速和1 ml/min的洗脱流速在pH3.0酸性环境下纯化,得到桑葚花色苷提取物。利用CCK-8法检测不同浓度桑葚花色苷提取物(50、100、150、200 mg/ml)对人乳腺癌细胞MDA-MB-453增殖活力的影响;以24只雌性BALB/c裸鼠建立MDA-MB-453细胞移植瘤模型,随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别以0、50、100、200 mg/(kg.d)的桑葚花色苷提取物膳食干预,检测其对肿瘤生长的影响。结果获得花色苷含量为(41.8±4.8)%的桑葚花色苷提取物;CCK-8法检测发现桑葚花色苷提取物可显著降低乳腺癌细胞活力,并显示剂量-效应关系[50、100、150、200 mg/ml桑葚花色苷提取物处理组抑制率分别为(14.8±1.8)%、(29.8±2.2)%、(33.0±2.7)%、(44.3±3.8)%];体内实验发现,高剂量组和中剂量组移植瘤体积和质量均显著低于对照组[体积抑制率分别为(55.5±4.8)%、(39.3±3.2)%;质量抑制率分别为(51.6±4.2)%、(38.9±3.1)%],表明桑葚花色苷提取物膳食干预可有效抑制移植瘤的生长。结论桑葚花色苷提取物能够显著抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-453的生长。

桑葚花色苷热降解动力学及清除DPPH活性的热稳定性研究

通过测定温度、pH值对桑葚花色苷的影响,对桑葚花色苷热稳定性进行研究.结果表明,桑葚花色苷热降解符合动力学一级反应,随着温度、pH值的升高,降解速率k不断增大,建立的降解动力学模型拟合度高.酸性条件有利于桑葚花色苷的稳定,pH=3.5时,桑葚花色苷溶液82 C加热1 h,花色苷残留率和对DPPH清除活性的保留率分别为88.3%、88.0%,表现出较好的热稳定性.

桑葚花色苷对大鼠心肌保护作用

目的探讨桑葚花色苷对大鼠急性缺血心肌的保护作用。方法将大鼠随机分为5组,空白对照组、模型组、桑葚高、中、低剂量组,制成异丙肾上腺素性心肌缺血模型,测定各组大鼠血浆中超氧化物歧化酶总活性(T-SOD)、丙二醛(MDA)及心肌ATP酶活性。结果心肌缺血(模型组对照组)大鼠血浆T-SOD活性降低,MDA含量升高,ATP酶活性降低,桑葚高中剂量组能改善上述变化。结论桑葚花色苷可提高SOD、ATP酶的活性以及降低MDA活性发挥心肌保护作用。

树脂法分离纯化桑葚花色苷

分别对12种大孔吸附树脂和6种阳离子交换树脂对桑葚花色苷的吸附性能进行了比较,通过静态吸附和解吸实验筛选出最佳大孔吸附树脂为LX-68,最佳阳离子交换树脂为D001。分别对这2种树脂进行静态和动态条件优化,确定了LX-68树脂最佳纯化条件为:以吸光度值0.991,pH值为3的色素液,8BV/h上样,用pH值为2、体积分数为80%的酸性乙醇作洗脱剂,洗脱流速为1BV/h,纯化后色素色价为114,纯度为39.9%,花色苷收率为91.5%。D001树脂最佳纯化条件为:以吸光度1.411Abs,pH值为2的色素液,6BV/h上样,用pH值为1、60%的酸性乙醇以3BV/h的洗脱流速洗脱,得到色价为65的色素粉末产品,纯度为24.1%,花色苷收率为67.6%。LX-68树脂和D001树脂对桑葚花色苷均具有较好的吸附分离性能,且LX-68树脂的分离效果优于D001树脂。

桑葚花色苷大孔吸附树脂纯化工艺

通过吸附、洗脱试验,分析大孔吸附树脂对桑葚花色苷的纯化效果,筛选出适合分离纯化桑葚花色苷的大孔吸附树脂,并确立树脂纯化工艺的参数。结果表明,XDA-6型大孔吸附树脂对桑葚花色苷分离效果良好,纯化吸附条件为上清液浓度1.5 mg/mL,pH值3.5,洗脱条件为洗脱剂乙醇溶液浓度60%。

桑葚花色苷提取物对乳腺癌细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

目的:观察桑葚花色苷提取物对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453、MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。方法:利用超声辅助乙醇萃取法提取桑葚花色苷,pH示差法测定提取物花色苷总含量,以50、100和150 mg/mL桑葚花色苷提取物作用三种乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453和MCF-7 24 h,采用Annexin V/PI双染流式细胞分析法检测细胞凋亡水平变化,JC-1探针染色激光共聚焦扫描显微镜观察MDA-MB-453细胞线粒体膜电位水平变化。结果:凋亡分析结果表明,桑葚花色苷提取物作用后三种乳腺癌细胞凋亡率均升高,显示出促凋亡效应,且具有剂量-效应关系,100和150 mg/mL组凋亡率显著升高(P<0.05)。激光共聚焦扫描显微镜检测结果显示,桑葚花色苷提取物作用24 h,可使MDA-MB-453细胞线粒体膜电位显著下降,表现为红色/绿色荧光的比值显著降低(P<0.05)。结论:桑葚花色苷提取物可显著降低乳腺癌细胞线粒体膜电位,并促发细胞凋亡。

桑葚花色苷对乳腺癌裸鼠肿瘤组织中VEGF、p53及Ki67表达的影响

目的:探究桑葚花色苷对乳腺癌裸鼠肿瘤组织中VEGF、p53及Ki67表达的影响。方法:选择60只健康BALB/c裸鼠,按随机数字表分为5组,即对照组、桑葚花色苷低剂量组(SL组)、桑葚花色苷中剂量组(SM组)、桑葚花色苷高剂量组(SH组)以及阳性药(氟尿嘧啶)组,每组12只裸鼠。以注射乳腺癌MDA-MB-231细胞悬液到裸鼠右肩皮下的方法建立移植乳腺癌模型,分别检测和比较各组裸鼠的癌瘤湿重、癌重系数以及肿瘤组织中VEGF与p53、Ki67的表达。结果:治疗后,与对照组相比,各治疗组的癌瘤湿重水平及癌重系数均明显下降;与阳性药组相比,SM组及SH组的癌瘤湿重以及癌重系数下降程度更为明显,差异均具有统计学意义(P<0.05);治疗后,与对照组相比,各治疗组的VEGF与p53、Ki67阳性表达率均明显下降;且与阳性药组相比,SM组及SH组的VEGF与p53、Ki67阳性率下降程度更为明显,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:桑葚花色苷能够明显抑制乳腺癌的发展,这可能与其抑制P53、Ki67在和VEGF的表达有关。

桑葚花色苷抗氧化药理作用研究

目的探索桑葚花色苷抗氧化保护作用。方法以桑葚果为原料,经冷冻干燥,乙醇超声提取,离心得到桑葚花色苷粗提物后进行药理实验,连续给药(10、5、2.5g/kg)7天后,检查相应指标。结果发现桑葚花色苷粗提物高、中剂量组对小鼠常压缺氧具有保护作用;在小鼠心肌缺血线粒体膜实验中发现,桑葚花色苷粗提物高中剂量组能较低心肌线粒体中MDA含量,升高心肌线粒体中SOD量,较低剂量组和正常组具有显著性差异(P<0.05)。结论桑葚花色苷对小鼠常压缺氧和心肌缺血实验具有保护作用。

荧光衰退时间间隔对抗氧化物质ORAC值的影响分析

目的：实验定量探讨荧光衰退时间间隔的选取对抗氧化物质ORAC值的影响。方法：以维生素C和实验室自提的桑葚花色苷提取物为样品,Trolox为标准物,选取设置不同的荧光衰退时间间隔,应用ORAC法测定样品与标准物的荧光衰退曲线,计算样品ORAC值,分析不同荧光衰退时间间隔对样品AUC、Net AUC和ORAC值的影响。结果：荧光衰退时间间隔对于维生素C和桑葚花色苷提取物ORAC值的影响均在2%以内,定量地表明了荧光衰退间隔时间对于论文中样品ORAC值影响较小。结论：（1）研究结论为ORAC法中选取荧光衰退间隔时间提供参考,建议可在为1~5 min范围内随机选取;（2）基于手动记录读数的荧光酶标仪,研究结论建议可选取较长的荧光衰退间隔时间,如5 min,以有利于手动记录,也有利于与某些检测时间较短的试样交叉进行。