桑辛素通过调节胆固醇代谢改善油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积

目的观察桑辛素对油酸(oleic acid,OA)诱导的HepG2细胞脂质蓄积的改善作用,并探讨其可能机制。方法以300μM OA处理HepG2细胞24 h诱导建立脂质蓄积模型,2.5、5、10μM的桑辛素和OA共同作用于细胞24 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,油红O染色观察细胞内脂质含量情况,DiI-LDL检测细胞脂质摄取能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定桑辛素对胆固醇代谢关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体a(PPARα)和胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)蛋白表达的情况,并将桑辛素与低密度脂蛋白受体(LDLR)和PPARα通过AutoDock vina软件进行分子对接验证。结果OA刺激HepG2细胞导致细胞内脂滴颗粒明显增加,脂质含量明显升高(P<0.01)。与模型组相比,桑辛素可明显改善模型组肝细胞脂质蓄积,并降低脂质含量(P<0.05)。桑辛素可抑制HepG2细胞对DiI-LDL的摄取,上调细胞中PPARα和CYP7A1的蛋白表达水平(P<0.05)。分子对接显示桑辛素与LDLR和PPARα受体表现出良好的对接活性。结论桑辛素对HepG2细胞脂质蓄积模型有明显的改善作用,其机制可能与调节PPARα通路有关。

桑辛素对新型冠状病毒主蛋白酶抑制作用的研究

目的 探讨桑辛素对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制作用。方法 利用软件AutoDock将桑辛素与主蛋白酶晶体结构6LU7的活性位点进行分子对接;而后利用主蛋白酶荧光偏振筛选模型检验桑辛素对于新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性。结果 桑辛素与主蛋白酶活性位点具有较强的分子间相互作用,分子对接过程释放的自由能为-8.3 kcal/mol;在药理活性测试中,桑辛素在400、200、100、25μmol/L浓度对主蛋白酶的抑制率分别为45%、34%、8%、1%。结论 实验表明,桑辛素具有一定的主蛋白酶抑制活性。与既往报道的小分子黄酮类化合物相比,桑辛素对主蛋白酶的抑制活性明显增强,其原因可能为黄酮母核引入了脂溶性取代基进而增强了其与主蛋白酶活性位点处的结合能力相关,为黄酮母核类主蛋白酶抑制剂的结构优化提供参考。

桑辛素对乳头状甲状腺癌TPC⁃1细胞凋亡的影响

目的探讨桑辛素对乳头状甲状腺癌(PTC)细胞系TPC⁃1细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L)桑辛素处理TPC⁃1细胞,MTT检测细胞增殖活性。采用不同浓度桑辛素或联合N⁃乙酰⁃L⁃半胱氨酸(N⁃Acetyl⁃l⁃cysteine,NAC)处理TPC⁃1细胞24 h,分为0μmol/L桑辛素组、5μmol/L桑辛素组、10μmol/L桑辛素组、20μmol/L桑辛素组和20μmol/L桑辛素+5 mmol/L NAC组。Hoechst33258染色法观察细胞核形态变化;Annexin V⁃FITC/PI法检测细胞凋亡水平;DCFH⁃DA染色法检测细胞内ROS水平;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl⁃2和Cleaved⁃caspase⁃3及p38MAPK/p53轴相关蛋白p⁃p38MAPK(Thr180/Thr182)、p38MAPK、MDM2、p53和PUMA等表达水平。结果不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L)桑辛素处理后,TPC⁃1细胞增殖活性逐渐降低,并且随着药物干预时间的延长,细胞增殖活性逐渐降低(P<0.001)。与20μmol/L桑辛素组比较,20μmol/L桑辛素+5 mmol/L NAC组细胞核呈致密浓染的细胞数减少,细胞凋亡率、促凋亡蛋白Bax、cleaved⁃caspase⁃3及细胞内ROS、p⁃p38MAPK/p38MAPK、p53和PUMA蛋白表达水平明显降低(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl⁃2、MDM2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论桑辛素可能通过调控ROS介导的p38MAPK/p53轴诱导TPC⁃1细胞凋亡,为桑辛素用于PTC的治疗提供一定理论依据。

桑白皮中桑辛素的含量测定

目的:对不同产地,不同品种及规格的桑白皮中的桑辛素进行含量测定。方法:采用高效液相色谱法,Alltima C_(18)色谱柱(4．6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水(58:42),检测波长270nm。结果:未经除去黄棕色外皮的桑白皮样品与除去外部黄棕色外皮的样品中桑辛素含量差异明显,样品中的桑辛素主要存在于桑白皮的黄棕色外皮中。桑白皮桑辛素含量与样品厚度与有关。结论:本方法简便,稳定,为桑白皮质量控制提供参考依据。

HPLC程序可变波长法同时测定桑白皮中绿原酸、东莨菪内酯和桑辛素

目的建立同时测定桑白皮药材中绿原酸、东莨菪内酯和桑辛素的方法。方法 Kromasil C18柱(4.6 mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;进样量10μL;检测波长(0～12 min,327 nm;12～20 min,345 nm;20～30 min,270 nm)。结果绿原酸、东莨菪内酯和桑辛素进样量分别在0.094 4～1.416μg、0.104～1.56μg和0.113 2～1.698μg范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.53%(RSD=1.19%)、98.98%(RSD=1.40%)、98.91%(RSD=1.34%)。结论该方法准确性高,重复性好,可作为桑白皮药材及饮片的质量控制方法。

薄层色谱扫描法测定桑白皮中桑辛素含量

目的:建立不同产地桑白皮中桑辛素含量的薄层扫描测定方法。方法:以桑辛素为对照品,采用双波长薄层色谱扫描法测定其含量。固定相为硅胶GF254高效薄层板,展开剂为石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯(1.5∶0.8∶1),测定波长为273 nm,参比波长为500 nm。结果:桑辛素在200~1100 ng范围内呈良好的线性关系(r=0.999 1),平均回收率为99.24%(RSD=1.51%,n=6)。结论:薄层色谱扫描法操作简单、结果准确,可用于桑白皮中桑辛素的定量及定性分析。

桑辛素对D-半乳糖致小鼠老年性痴呆模型的保护作用及机制研究

[目的]研究桑辛素对D-半乳糖致小鼠老年性痴呆的保护作用,并初步探讨其作用机制。[方法]采用皮下注射D-半乳糖100 mg/(kg·d),连续8周,建立小鼠痴呆模型。桑辛低中高剂量组分别灌胃给药10、20、40 mg/(kg·d),吡拉西坦组灌胃给药0.75 g/(kg·d),空白对照组灌胃给予等量蒸馏水。给药8周后,利用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力,苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织海马齿状回结构的病理变化。检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的含量;检测脑组织乙酰胆碱转移酶(ChAT)活性、乙酰胆碱(ACH)含量以及p53蛋白的表达。[结果]与空白对照组比较,模型组小鼠的逃避潜伏期明显延长,站台穿越次数明显减少(P<0.01),脑海马齿状回神经元损伤严重,血清TNF-α和IL-1β的含量升高(P<0.01),脑组织ChAT活性和ACH含量明显降低(P<0.01),p53蛋白的表达量明显升高(P<0.01)。与模型组比较,桑辛素给药组的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05或P<0.01),站台穿越次数明显增加(P<0.05或P<0.01),脑海马神经元损伤明显改善,血清TNF-α和IL-1β的含量降低(P<0.05或P<0.01),脑组织ChAT活性和ACH含量明显升高(P<0.05或P<0.01),p53蛋白的表达量明显降低(P<0.05或P<0.01),呈剂量依赖性。吡拉西坦组上述指标也明显改善。[结论]桑辛素对D-半乳糖致小鼠老年性痴呆具有较好的保护作用,其作用机制可能与减轻炎症、抑制凋亡和增加神经突触间的ACH含量和ChAT活性有关。

桑白皮提取物中桑根酮C、桑根酮D及桑辛素的HPLC含量测定

目的:建立HPLC同时测定桑白皮提取物中桑根酮C、桑根酮D及桑辛素的含量测定方法,为其质量控制和评价提供参考。方法:采用InterSustain AQ-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈(A)-0.1%醋酸水(B),梯度洗脱(0~20 min,45%~70%A;20~26 min,70%~80%A);流速1 mL·min^-1;柱温30℃;检测波长276 nm。结果:3种成分均能实现完全分离,且与其他成分分离度良好。3种成分分别在0.280~4.480μg、0.196~3.136μg、0.054~0.865μg范围内呈良好的线性关系,回归系数分别为1.0000、0.9992、0.9992。桑根酮C、桑根酮D及桑辛素的平均加样回收率(n=6)分别为95.41%、101.02%、101.27%,RSD分别为1.91%、2.31%、1.84%。结论:所用方法操作简便,测定准确,重复性好,可用于桑白皮提取物的质量控制与评价。

桑辛素对LPS诱导急性肺损伤小鼠保护作用机制研究

目的探讨桑辛素对LPS诱导急性肺损伤模型小鼠的保护作用。方法小鼠腹腔注射LPS建立急性肺损伤动物模型。将小鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(地塞米松2mg·kg-1)、桑辛素低剂量组(10mg·kg-1)、桑辛素高剂量组(20mg·kg-1)。观察各组小鼠肺组织病理学变化,测量肺W/D,计数支气管肺泡灌洗液总细胞及NL、肺组织中SOD,MDA、IL-6、TNF-α含量及NFκB p65蛋白表达水平。结果桑辛素低剂量组(10mg·kg-1)、桑辛素高剂量组(20mg·kg-1)可有效减轻LPS导致的肺组织病理学变化,明显降低肺泡灌洗液中炎症细胞的数目,显著降低肺湿/干重比重,提高肺组织中SOD活力,降低MDA、IL-6、TNF-α的含量,抑制NFκB p65蛋白的表达。结论桑辛素可以有效保护LPS诱导的急性肺损伤。

桑辛素大鼠体内代谢产物鉴定

目的采用超高效液相色谱-高分辨质谱联用技术(UPLC-HRMS)分析鉴定桑辛素在大鼠体内的代谢产物。方法灌胃给药后,收集空白组和给药组大鼠血浆、尿液和粪便。采用Agilent Extend C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),5 mmol/L乙酸铵水溶液(A)-乙腈(B)流动相系统进行梯度洗脱;在负离子模式下进行分析。结果根据所获得的精确相对分子质量、色谱保留行为、特征碎片离子,共分析鉴定了包括原形药物在内的8个代谢物。结论应用UPLC-HRMS能全面阐明桑辛素在大鼠体内的代谢情况,并为进一步的药效学研究及黄酮类化合物的开发、利用提供借鉴。

基于槲皮苷和桑辛素“双指标”成分检测的桑树寄生质量控制方法研究

为建立一种桑树寄生药材质量控制的方法,采集10批不同产地桑树寄生样品与其寄主桑枝,并采集柳树寄生、肉桂寄生与其寄主柳枝、桂枝作为对照药材,采用高效液相色谱法同时测定桑寄生药材与其寄主样品中槲皮苷与桑辛素的含量,测定条件:色谱柱Waters C_(18)柱(5μm, 4.6×250 mm),以乙腈(A)-0.1%磷酸(C)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长为256 nm(槲皮苷)和269 nm(桑辛素)。结果显示:10批桑树寄生样品的槲皮苷含量为1.98-3.11 mg/g,桑辛素含量为0.27-4.27μg/g;以桑树、柳树和肉桂为寄主的寄生药材均含有槲皮苷,寄主桑枝、柳枝和桂枝均不含槲皮苷,表明槲皮苷属于药材基源广寄生的专属性成分,即广寄生均含有槲皮苷,与寄主无关;桑树寄生与其寄主桑枝均含有桑辛素,柳树寄生、肉桂寄生及其寄主柳枝、桂枝均不含桑辛素,表明桑辛素为桑树寄主的特有成分,桑树寄生药材中的桑辛素为寄主桑树输送而来。本方法可同时测定桑树寄生药材中的槲皮苷与桑辛素"双指标"成分含量,有效鉴定寄主来源,实现对桑树寄生药材的质量控制,方法简便、可行。

桑辛素对骨科疾病的研究进展

近年来,桑辛素作为一种低毒、高效、来源丰富的药物研究热点,在抗炎、抗肿瘤、镇痛等方面的研究颇有成效。该文通过检索知网、万方、维普、PubMed等数据库探讨桑辛素对骨关节炎、骨质疏松、骨肉瘤、腰椎间盘退行性变等疾病的作用机制与研究进展,以期为后续的临床研究提供新思路。

桑辛素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胶质瘤细胞的机制研究

目的探讨桑辛素在胶质瘤细胞的抗癌作用。方法用CCK-8检测细胞增殖情况,利用Traswell试验进行细胞迁移分析,用异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况,采用免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测靶基因mRNA和蛋白水平的变化。结果桑辛素能明显抑制U251细胞的增殖活性(P<0.05),其中100和1000μg/mL桑辛素的抑制效果最佳。100μg/mL的桑辛素能明显抑制U251细胞的迁移能力(P<0.05),并诱导细胞凋亡(P<0.05)。Wnt/β-catenin信号通路参与桑辛素诱导的抗肿瘤活性,桑辛素可下调Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(β-catenin和Cyclin D1)的表达(P<0.05)。结论桑辛素可通过Wnt/β-catenin信号途径抑制胶质瘤细胞的生长,因此,桑辛素可能是一种潜在的胶质瘤抗癌药物。

桑辛素对喉癌干细胞干性表型调控的作用研究

目的探索桑辛素对喉癌干细胞干性表型调控的影响。方法流式细胞仪分选并检测CD133^+喉癌干细胞比例;肿瘤球形成实验检测CD133^+喉癌干细胞的自我更新能力;Transwell实验检测CD133^+喉癌干细胞的迁移能力;改良MTT实验检测化疗药物对CD133^+喉癌干细胞的细胞毒性作用;免疫荧光染色、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot检测CD133^+喉癌干细胞的干细胞标志物表达;在不同浓度的桑辛素处理CD133^+喉癌干细胞后(以桑辛素0μmol/L为对照),通过肿瘤球形成实验、Transwell实验、改良MTT实验及Western blot,分别检测CD133^+喉癌干细胞的自我更新能力、迁移能力、化疗药物的细胞毒性作用及干细胞标志物表达变化。结果流式细胞仪分选结果显示,CD133^+喉癌干细胞占喉癌细胞的比例为(3.50±0.34)%;经过培养富集后,其比例可达(93.20±5.23)%。肿瘤球形成实验结果显示,与喉癌细胞相比,CD133^+喉癌干细胞具有增强的自我更新能力(P<0.001);Transwell实验显示,与喉癌细胞相比,CD133^+喉癌干细胞的迁移能力增强(P<0.05);改良MTT实验结果显示,与喉癌细胞相比,CD133^+喉癌干细胞抵抗化疗药物(5-氟尿嘧啶及顺铂)的细胞毒性作用(P<0.05);免疫荧光染色、RT-qPCR及Western blot结果显示,干细胞标志物(CD133、ALDH1、Sox2、ABCG2及N-cadherin)在CD133^+喉癌干细胞中呈高表达水平。通过不同浓度的桑辛素处理CD133^+喉癌干细胞,其自我更新能力降低(P<0.05);迁移能力亦下降(P<0.05);此外,桑辛素处理的CD133^+喉癌干细胞对化疗药物的细胞毒性作用更加敏感(P<0.05);Western blot结果显示,不同浓度的桑辛素处理的CD133^+喉癌干细胞,其上述的干细胞标志物表达水平下调(P<0.05)。结论 CD133^+喉癌干细胞具有干性表型特征;桑辛素可减弱喉癌干细胞的干性表型,可能与下调其干细胞标志物表达相关。

基于PDE-4靶标的桑白皮提取物桑辛素M对小鼠哮喘模型的治疗作用和机制研究

目的 研究基于磷酸二酯酶4 （PDE-4）靶标的桑白皮提取物桑辛素 M 对小鼠哮喘模型的治疗作用和机制。方法 建立卵蛋白 （OVA）诱导哮喘小鼠模型,造模期间同时给予桑辛素 M（每天54 7mg/kg）灌胃,连续给药4周。造模结束后检测小鼠吸入乙酰甲胆碱激发后的气道反应性,提取小鼠肺组织总蛋白进行双向电泳,对表达差异显著的蛋白点进行鉴定分析。结果 桑辛素 M可显著降低哮喘小鼠气道高反应性,抑制气道嗜酸粒细胞浸润和气道炎症。蛋白质组学实验显示转胶蛋白-2、胞内氯离子通道蛋白5 （CLIC5）、G （o）蛋白-α亚基、二甲基精氨酸二甲基氨基酸水解酶2（DDAH2）4种蛋白在哮喘小鼠肺组织中表达显著下降,其余18种差异蛋白的表达则显著增加,而药物干预可显著抑制哮喘小鼠相关差异蛋白的表达下降或增加。结论 桑白皮提取物桑辛素 M可能通过改善气道上皮功能、舒张气管平滑肌、提高机体抗氧化能力、抑制炎性细胞浸润、抑制气道组织重塑而发挥抗哮喘作用。

菠萝蜜主要功能活性成分及其研究进展

菠萝蜜既是一种特色的热带木本粮食作物,也是特色热带水果,成熟的菠萝蜜果肉肥厚、芳香可口、香味浓郁。果肉和种子是菠萝蜜主要组成部分,二者占果实重量超过70%。果肉含有丰富的碳水化合物、蛋白质、脂肪、纤维、维生素、矿物质等营养成分,富含菠萝蜜多糖、酚类化合物、类胡萝卜素、抗氧化成分等功能组分,具有抗氧化、抗炎、抗癌、辅助降血糖、提高免疫力等有益的生理作用;种子含有丰富的淀粉、蛋白质、脂肪、膳食纤维和其他微量元素等营养组分,可以用作食品增稠剂或粮食作物,富含抗性淀粉、皂苷、生物碱、有机酸、氨基酸等功能活性成分,具有缓解痉挛、制止副交感神经系统冲动、增强免疫力、调节情绪、预防衰老等生理功效。系统综述了菠萝蜜果肉、种子的功能活性成分及其研究进展,并在此基础上展望菠萝蜜的研究方向和应用前景,为菠萝蜜的进一步综合开发利用提供理论参考,以期菠萝蜜在功能性食品和医药领域发挥更大的作用。

HPLC法同时测定桑白皮中5种成分

目的建立HPLC法同时测定桑白皮Morus alba L.中绿原酸、二氢桑色素、氧化白藜芦醇、桑辛素O、桑根酮C的含有量。方法桑白皮甲醇提取物的分析采用Dimonsiol C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.2%醋酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长340 nm。结果绿原酸、二氢桑色素、氧化白藜芦醇、桑辛素O、桑根酮C分别在3.25~104.00μg/mL(r=0.999 6)、4.81~154.00μg/mL(r=0.999 7)、5.38~172.00μg/mL(r=0.999 5)、1.88~60.00μg/mL(r=0.999 7)、11.19~358.00μg/mL(r=0.999 5)范围内线性关系良好。平均加样回收率分别为98.98%(RSD=1.70%)、100.73%(RSD=1.35%)、99.71%(RSD=1.64%)、100.07%(RSD=1.11%)、99.90%(RSD=2.16%)。结论该方法准确简便,重复性好,可用于桑白皮药材的质量控制。

HPLC法同时测定新疆桑枝中五种活性成分的含量

建立HPLC法同时测定新疆桑枝中桑皮苷A、绿原酸、东莨菪素、白藜芦醇、桑辛素的方法。采用YMCPack ODS色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-甲醇-0.1%冰乙酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长330nm,270nm,流速1.0mL·min^(-1),检测波长为270nm,330nm。柱温为30℃,进样量为20μL。五种成分在25min内均达到完全分离,桑皮苷A、绿原酸、东莨菪素、白藜芦醇及桑辛素的平均回收率分别为99.3%、99.5%、100.1%、99.9%、102.1%,其RSD分别为2.7%、0.64%、1.92%、0.78%、1.13%。本方法操作简便、结果快速、准确可靠,具有较好的重复性和稳定性,为桑枝的质量标准提供实验依据。

响应曲面法优化桑白皮中3个成分的提取工艺

目的:建立同时测定桑巴皮中桑酮G、桑酮H和桑辛素含量的高效液相色谱法,采用响应曲面法对该3个成分的提取工艺进行优化。方法:分别以桑酮G、桑酮H、桑辛素的提取含量作为响应值,以乙醇体积分数、提取温度、提取时间为主要考察因素,在单因素试验基础上采用中心组合设计试验,确定3个成分的最佳提取工艺。结果:同时提取桑白皮中桑酮G、桑酮H和桑辛素的最佳工艺为乙醇体积分数68%,提取温度74℃,提取时间110 min,液料比14∶1,该工艺桑酮G得率为7.09 mg·g^-1,桑酮H得率为1.74 mg·g^-1,桑辛素得率为1.69 mg·g^-1,与预测值相比,相对误差分别为0.30%、0.41%、0.42%。结论:采用响应曲面法优化得到同时提取桑白皮中桑酮G、桑酮H、桑辛素的工艺科学合理,可用于扩大生产。

应用高速逆流色谱分离桑枝酚类成分

建立了高速逆流色谱(HSCCC)分离制备高纯度的桑枝酚类成分的新方法。分离条件如下:溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶1∶1∶2,v/v),上相为固定相,下相为流动相;流速2.0 mL/min;转速900 rpm;进样量75 mg。收集得到三个高纯度化合物,经HPLC、MS、1H和13C NMR等分别鉴定为反式氧化白藜芦醇(25.2mg),反式白藜芦醇(7.4 mg)和桑辛素M(29.1 mg)。高速逆流色谱可以高效分离桑枝成分,方法简便,技术可行,优于传统的柱色谱法。