超声辅助提取桑黄子实体多糖及其单糖组分分析

以桑黄子实体为原料,采用超声波辅助法提取桑黄子实体多糖。以多糖得率为考核指标,在单因素试验的基础上通过响应面法优化提取工艺,并分析桑黄子实体多糖的单糖组分。结果表明:最佳提取工艺条件为超声时间30 min、料液比1∶42(g/mL)、超声温度60℃,在此条件下桑黄子实体多糖得率为8.12%。桑黄子实体多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖组成,含量分别为60.3%、14.4%、12.1%、6.2%。

野生与人工栽培桑黄子实体中的粗多糖和粗酚含量及药用活性比较

为了明确人工栽培桑黄(Phellinus spp.)的药用价值,以野生桑黄和人工栽培桑黄的子实体为材料,检测分析其水溶性活性物质粗多糖和粗酚的含量,以及其抗肿瘤、抗感染活性。采用乙醇浸提及甲醇萃取的方法提取栽培桑黄子实体粗酚的得率显著高于野生桑黄子实体,经超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-MS)技术分析2种桑黄子实体中的桑黄酚主要由丁香酸、原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸4种单体酚组成。采用MTT法检测2种桑黄子实体来源粗多糖、粗酚以及4种单体酚物质对体外培养HCT116、HT-29、HepG 2肿瘤细胞的增殖均有较强抑制作用,2种来源的活性成分样品在相同剂量下的抑制作用差异不显著,其中原儿茶醛抑制肿瘤细胞增殖的活性较强。用流式细胞术体外检测桑黄粗酚中的单体酚物质对结肠炎患者外周血CD4+T细胞凋亡具有诱导活性,且咖啡酸、原儿茶酸抑制细胞增殖并诱导其凋亡的活性较强。研究结果表明,人工栽培桑黄子实体有良好的药用价值,其中多糖和原儿茶醛成分是抑制结肠癌、肝癌细胞增殖的主要活性物质,丁香酸、原儿茶酸通过诱导CD4+T细胞凋亡发挥抗感染作用。

一年生和两年生桑黄子实体的成分和生物活性

测定了一年生、两年生桑黄(Phellinus baumii)子实体水提物中的粗多糖、醇提物中的黄酮和三萜含量,并研究了不同生长年份子实体水提粗多糖和醇提物体外刺激淋巴细胞生长、抑制L1210肿瘤细胞生长的作用及抗氧化活性。结果表明,一年生桑黄子实体醇提物中黄酮、三萜和水提物中粗多糖的含量略高于两年生桑黄;当水提粗多糖浓度为10μg/mL时,SH2-W对体外淋巴细胞的增殖率高于SH1-W,当浓度为50和200μg/mL时,两组样品间无显著差异;两种桑黄醇提物对体外肿瘤细胞L1210的抑制作用随浓度增大而增强,相同剂量下,两组样品间无差异;相同浓度下SH1-E对H2O2的清除率高于SH2-E,但两组样品DPPH.的清除率和还原力无显著差异。

桑黄子实体多糖的提取及其对D-半乳糖诱导的3T3细胞损伤的保护作用

为优化桑黄子实体多糖提取工艺,探讨其体外抗氧化活性及其对D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的小鼠胚胎成纤维3T3细胞损伤的保护作用,本实验采用水提醇沉法,通过单因素-正交试验优化提取工艺,并经琼脂糖凝胶层析柱纯化,通过噻唑蓝法及β-半乳糖苷酶(senescence-associated-β-galactose,SA-β-gal)染色法观察桑黄子实体多糖对D-gal诱导的3T3细胞损伤模型的作用,测定桑黄子实体多糖对细胞上清液中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力的影响。逆转录聚合酶链式反应法检测桑黄多糖对衰老细胞中转录因子E2相关因子2(transcription factor E2-related factor 2,Nrf2)-抗氧化反应元件(antioxidant response elements,ARE)信号通路中相关基因mRNA表达水平。结果表明:提取温度80℃、提取时间3 h、料液比1∶40(m/V)、提取次数4次,平均多糖提取率为6.64%;纯化处理后多糖质量分数为76.28%;桑黄子实体多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率为77.14%,对超氧阴离子自由基清除率为31.22%,对羟自由基清除率为56.86%,具有抗氧化活性;噻唑蓝法结果显示,与模型组相比,桑黄子实体多糖质量浓度达到100μg/mL时细胞存活率极显著增加(P<0.01);SA-β-gal染色法结果显示桑黄子实体多糖可显著提高模型组细胞存活率(P<0.05),对D-gal诱导的3T3细胞细损伤具有保护作用;与模型组相比,桑黄子实体多糖组显著降低3T3细胞外液中ROS水平(P<0.05)、极显著降低MDA浓度(P<0.01)、显著提高CAT活力(P<0.05);与模型组相比,桑黄子实体多糖组中Nrf2通路及其3个下游基因(GCLC、NQO_1和GCLM)的mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:桑黄子实体多糖提取方法稳定可靠,获得的桑黄子实体多糖具有一定的抗氧化活性,能提高细胞的增殖活性,对D-gal诱导的3T3细胞细损伤具有保护作用,桑黄子实体多糖的抗氧化机制可能由Nrf2通路介导,提高GCLC、NQO_1、GCLM的mRNA表达而实现。

不同来源和采收时期桑黄子实体的主要活性成分含量比较

桑黄是一类具有重要药用价值的大型真菌,桑黄药材质量的好坏,取决于其活性成分含量的多少,而活性成分含量与桑黄来源和桑黄采收时期密切相关。通过测定不同来源桑黄子实体中多糖、麦角甾醇、多酚、黄酮、三萜类化合物和糖蛋白的含量以及测定不同生长期子实体中活性成分含量及单包产量,分析其变化规律。结果表明:人工栽培桑黄子实体中的多糖、麦角甾醇、三萜、多酚含量显著高于野生多年生桑黄子实体,其中桑枝木屑袋料栽培湖南SHG号桑黄子实体中的多糖含量最高,质量比达80.86 mg/g,比含量最低的西藏野生多年生桑黄子实体中多糖含量高213.29%;湖南SHH1号桑黄子实体中三萜、麦角甾醇含量最高,质量比分别达到26.29 mg/g、3.213 mg/g;浙江号桑黄子实体中多酚含量最高,达33.18 mg/g,湖南SHH2桑黄子实体的多酚含量最低,为6.79 mg/g;野生多年生桑黄子实体中的黄酮含量极显著高于人工袋料栽培桑黄子实体,其中秦岭号桑黄子实体中的黄酮质量比高达25.59 mg/g;所有桑黄子实体已检测的活性成分中糖蛋白的含量变幅最小。桑黄子实体中多糖、麦角、三萜3种活性成分的含量以及单包桑黄子实体产量直接影响到单包桑黄子实体的3种活性成分产量,并且桑黄子实体中3种活性成分含量的影响更显著,几乎与单包桑黄子实体中3种活性成分产量的变化趋势保持一致。在不同采收时期桑黄子实体中多糖、麦角、三萜3种活性成分含量及单包产量差异极显著,单包桑黄子实体产量差异显著。菌袋开口后70 d桑黄子实体中的多糖、麦角甾醇含量及单包产量均达到最大值,分别为81.06 mg/g、3.309 mg/g、2.605 g、0.106 g,随后又逐渐下降;菌袋开口后65 d,桑黄子实体的三萜含量及单包产量达到最大值,分别为24.29 mg/g、0.741 g,随后又逐渐下降。综合考虑主要活性成分含量,桑黄袋料栽培开口生长65~70 d时采收最佳。研究结果将为人工袋料栽培桑黄开发原料的选择、质量控制和标准综合评价提供科学参考。

桑黄子提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 探讨白桦树桑黄子实体提取物(EBPI)对荷瘤小鼠瘤体质量、Caspase-3蛋白表达、免疫功能的影响,并阐明其潜在的作用机制.方法 建立S_(180)荷瘤小鼠模型,即在无菌工作台上将0.2 mL的细胞悬液于30 min内接种每只小鼠右腋窝皮下.将荷瘤小鼠随机分为正常对照组、模型组、环磷酰胺组(CTX)、低0.5 g/(kg·d)、中1 g/(kg·d)和高2 g/(kg·d)剂量EBPI组,每组10只.采用称重法测量计算并观察EBPI对S_(180)荷瘤小鼠免疫器官指数(脾脏指数、胸腺指数、肝脏指数)、各组小鼠瘤体质量的影响;脾脏淋巴细胞计数及Western blotting法观察EBPI对S_(180)荷瘤小鼠脾淋巴细胞及瘤体Caspase-3蛋白表达的影响.结果 低、中和高剂量EBPI组与模型组、CTX组比较脾指数和胸腺指数均提高显著(P<0.01),而肝脏指数无明显升高或降低(P>0.05);与CTX组比较,S_(180)荷瘤小鼠脾淋巴细胞数升高(P<0.05);低、中和高剂量EBPI组瘤体质量及抑瘤率与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05).中、高剂量EBPI组瘤体质量和抑瘤率明显低于CTX组(P<0.05).Western blotting结果显示,低、中和高剂量EBPI组Caspase-3蛋白的表达较对照组明显升高(P<0.05),且Caspase3蛋白的表达量与EBPI浓度呈正相关关系.结论 EBPI可显著提高S_(180)荷瘤小鼠的免疫器官指数,提高脾脏淋巴细胞数,增加Caspase-3蛋白表达,抑制S_(180)荷瘤小鼠瘤体的生长.

不同破壁技术对桑黄功能性成分提取率的影响

以桑黄干燥子实体为原料,比较普通粉碎、双螺杆挤压膨化和流化床对撞式气流超微粉碎对桑黄颗粒粒径、形貌和功能性成分提取的影响。结果表明,与普通粉碎相比,双螺杆挤压膨化和流化床对撞式气流超微粉碎细胞破壁彻底,平均粒径(D_(50))分别为7.44μm和5.53μm,粉碎后的桑黄粉对黄酮、多酚、粗多糖的提取率分别比普通粉碎提高60.4%、73.4%、72.8%和53%、69.5%、68%,普通粉碎样品的功能性成分提取不完全。