从自噬和副凋亡途径初探桔梗皂苷-D抗乳腺癌作用与机制

目的从自噬和副凋亡途径探讨桔梗皂苷-D(PD)抗乳腺癌的作用和潜在机制。方法结晶紫法检测不同浓度PD(10、20、40μmol/L)对三种乳腺癌细胞株4T1、MDA-MB-231、MCF-7细胞存活率的影响;MDC荧光标记法与LC3B荧光染色激光共聚焦显微镜观察适宜浓度PD作用乳腺癌细胞后自噬发生的情况;PD联合自噬抑制剂氯喹作用三种乳腺癌细胞株,明确PD诱导自噬在细胞死亡中的作用;光镜与电镜下观察适宜浓度PD作用后乳腺癌细胞形态学的变化。结果与PD 0μmol/L组比较、PD20、40μmol/L组4T1[(63.10±2.15)%、(32.28±1.19)比(99.75±4.20),P<0.01]、MDA-MB-231[(63.10±2.15)%、(52.87±3.46)%和(82.04±5.27)%,P均<0.01]、MCF-7[(32.38±1.20)%、(3.25±0.627)%、(59.30±5.72)%,P均<0.01]细胞存活率均明显降低。MDC法与LC3B荧光染色法发现经PD处理的三种乳腺癌细胞后发生自噬现象。与PD组比较,PD联合氯喹组可进一步降低4T1、MDA-MB-231和MCF-7三种乳腺癌细胞株的存活率[4T1:(23.31±1.07)%比(40.35±2.94)%,P<0.01;MDA-MB-231:(31.40±2.73)%比(56.69±4.02)%,P<0.01;MCF-7:(52.72±4.50)%比(92.24±7.85)%,P<0.001]。光镜与电镜观察经PD处理的三种细胞质内出现大量空泡结构,并伴有线粒体肿胀,类似副凋亡的形态学改变。结论PD具有明确的抑制乳腺癌细胞株4T1、MDA-MB-231和MCF-7存活率的效应,该效应伴随自噬现象的发生,但自噬抑制剂的加入提示PD诱导的细胞自噬是对自身的保护作用。经PD处理的三种乳腺癌细胞出现类似副凋亡的形态学改变,初步推测PD对乳腺癌细胞的抑制作用可能与副凋亡相关。

桔梗皂苷-D诱导肺腺癌A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞

目的:探究桔梗皂苷-D(Platycodin-D,PD)诱导肺腺癌细胞(A549)和A549顺铂耐药细胞(A549/DDP)凋亡和周期抑制的作用机制,为PD治疗非小细胞肺癌和产生顺铂耐药的非小细胞肺癌提供实验基础。方法:采用MTT法检测细胞的增殖抑制率和耐药指数;流式细胞术检测细胞周期阻滞和凋亡作用;Hoechst-33258荧光染色观察细胞核形态的变化;Western-blot蛋白印迹法分析凋亡通路和细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:MTT检测结果显示,PD对A549和A549/DDP细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性。Hoechst 33258荧光染色发现,随着PD浓度增加,两种细胞核形态都有明显的改变。进一步流式细胞术结果表明,PD诱导A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞。Westernblot检测结果表明,PD通过上调Bax、Caspase-9、cleaved-Caspase-3和PARP的表达,下调Bcl-2和Caspase-3的表达诱导A549和A549/DDP细胞凋亡。此外,PD通过下调Cyclin-D1、Cyclin-D3、CDK4、CDK6、E2F1和p-Rb及上调P18的蛋白水平诱导A549细胞周期G0/G1阻滞。同时,PD通过下调Cyclin-B1、p-Cdc2、E2F1和p-Rb及上调P27的蛋白表达诱导A549/DDP细胞周期G2/M阻滞。结论:PD通过线粒体途径诱导A549和A549/DDP细胞凋亡诱导,并且引发A549细胞G0/G1周期阻滞和A549/DDP细胞G2/M阻滞周期阻滞。

桔梗皂苷-D抗肿瘤机制研究进展

桔梗皂苷-D(PD)是从桔梗中提取的一种三萜类单体。近年来研究表明,PD有广泛的抗癌作用,且疗效满意。本文从增殖、凋亡、浸润和转移、免疫及抗炎等方面对PD抗肿瘤作用机制进行综述,为进一步更好开发和利用PD、发挥其抗肿瘤优势提供参考。

桔梗皂苷-D抑制非小细胞肺癌H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移的作用机制研究

目的探究桔梗皂苷-D(platycodin-D,PD)抑制非小细胞肺癌(NSCLC)H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移的作用及其作用机制。方法细胞黏附实验、划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力。RT-PCR检测H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA的表达。同时,Western blot法检测MMP-2和MMP-9蛋白、其上游ERK信号通路相关蛋白和p-Akt的表达水平。结果PD有效抑制H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移能力,并呈浓度依赖性(P<0.05)。PD降低H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA的表达(P<0.01);同时,PD下调H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达,并抑制其上游Ras、p-c-Raf、p-ERK 1/2和p-Akt的表达,并呈浓度和时间依赖性。结论 PD抑制NSCLC细胞黏附、侵袭和迁移,并且此作用与下调MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表达,抑制其上游ERK信号通路和p-Akt表达有关。

桔梗皂苷-D对大鼠肺纤维化的干预作用及部分机制研究

目的:研究桔梗皂苷-D(PD)对大鼠肺纤维化的干预作用。方法:50只Wistar大鼠随机分为假手术对照组、模型组、PD 25 mg/kg组、PD 50 mg/kg组、甲强龙组。大鼠一次性气管内滴注盐酸博莱霉素诱导肺纤维化模型。观察各组大鼠的生存状况;检测大鼠血清中I型胶原(C-I)、III前胶原肽(PIIIP)、透明质酸(HA)的含量并进行比较;检测大鼠肺组织TGF-βmRNA的表达情况。结果:PD组大鼠的生存率较模型组高,PD能有效降低大鼠血清中C-I、PIIIP、HA的含量(P<0.05),并能下调大鼠肺组织TGF-βmRNA表达(P<0.05)。结论:PD可以改善盐酸博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠的一般情况,并通过抑制大鼠肺组织TGF-βmRNA表达,以达到抗纤维化的作用。

桔梗皂苷-D对胃癌细胞侵袭迁移能力的影响及机制研究

目的:通过研究桔梗皂苷-D(Platycodin D,PD)对MKN-45细胞增殖、迁移和侵袭的影响,探讨PD抑制胃癌细胞侵袭转移的作用和可能机制。方法:体外培养胃癌MKN-45细胞,并加入不同浓度PD(1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L)进行处理,MTT检测细胞活性;细胞划痕实验观察细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;采用RT-q PCR检测ICAM-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2及MDM2 mRNA表达水平;Western blot检测ICAM-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2及MDM2蛋白表达水平。结果:PD呈浓度和时间依赖性抑制MKN-45细胞活性及MKN-45细胞的迁移和侵袭。PD显著下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9及MDM2 mRNA和蛋白表达水平,上调TIMP-2 mRNA和蛋白表达水平。结论:PD能抑制胃癌MKN-45细胞的迁移和侵袭,其作用机制与下调ICAM-1、MMP-2和MMP-9表达水平以及抑制原癌基因MDM2的表达有关。

桔梗皂苷-D对大鼠肝纤维化的干预作用及部分机制研究

目的:研究桔梗皂苷-D(PD)对大鼠肝纤维化的干预作用及作用机制。方法:将大鼠随机分为5组,除对照组外,其余各组每周2次皮下注射四氯化碳(CCL4)溶液诱导肝纤维化模型,次日PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组分别给予PD 10、25、50 mg·kg-1·d-1灌胃持续给药治疗,对照组和模型组以等量0.9%氯化钠溶液代替。给药12周后,处死大鼠采集样本,检测各组大鼠血清ALT、AST、TNF-α、血清肝纤维指标(HA、LN、PIIIP、C-Ⅳ)水平;肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形成蛋白-7(BMP-7)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达量;HE和天狼猩红染色观察肝组织病理学变化。结果:与模型组比较:PD各组能显著降低大鼠血清ALT、TNF-α、HA及肝组织TGF-β1mRNA水平,显著升高肝组织BMP-7mRNA水平(P<0.05);PD中剂量组和高剂量组能显著降低大鼠血清AST、LN及肝组织α-SMA mRNA水平(P<0.05);PD高剂量组能显著降低大鼠血清PIIIP、C-Ⅳ水平(P<0.05);肝组织纤维化程度明显改善。结论:PD具有抗肝纤维作用,并可能是通过降低TGF-β1和调高BMP-7的表达、抑制肝星状细胞的细胞增殖和活化,以达到抗纤维化的作用。

桔梗皂苷-D诱导Hela细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究桔梗皂苷-D对宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将体外培养的Hela细胞系随机分为4组,对照组常规培养,桔梗皂苷-D低、中、高剂量组(7,14,28μmol/L)分别加入相应浓度桔梗皂苷-D进行培养。各组细胞培养24 h后,收集细胞用于后续检测。采用CCK8法检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡比率,采用TUNEL染色法观察细胞核的形态变化,采用RT-PCR法检测细胞内Bax、P53、Caspase-3、Bcl-2、Hippo信号通路关键因子(MST、LATS、YAP、TAZ、C-myc、β-Catenin)mRNA表达水平,采用Western blot法检测细胞内Bax、P53、Caspase-3、Bcl-2、Hippo信号通路关键因子蛋白表达水平。结果与对照组比较,各组桔梗皂苷-D细胞活力随桔梗皂苷-D浓度增高而显著下降(P均<0.05)。与对照组比较,桔梗皂苷-D各组G1期细胞比例显著增高(P均<0.05),且G1期细胞占比随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐增高,桔梗皂苷-D中、高剂量组G2期及S期Hela细胞占比显著降低(P均<0.05)。与对照组比较,桔梗皂苷-D各组TUNEL染色阳性细胞核的比率和早期凋亡细胞比例均显著增高(P均<0.05),且随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐增高。与对照组比较,桔梗皂苷-D各组Bax、P53、Caspase-3、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐升高(P均<0.05),YAP、TAZ、C-myc、β-Catenin的mRNA和蛋白表达水平随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐降低(P均<0.05)。结论桔梗皂苷-D能显著抑制Hela细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能是通过激活Hippo信号通路,下调该通路下游YAP、TAZ的过度表达,上调促凋亡因子Bax、P53、Caspase-3表达,从而使Hela细胞发生G1期阻滞,促进Hela细胞凋亡。

桔梗皂苷-D干预大鼠肺成纤维细胞纤维化的实验研究

目的 观察桔梗皂苷-D（PD）对转化生长因子（TGF-β1）诱导大鼠肺成纤维细胞纤维化的干预作用影响.方法 通过TGF-β诱导大鼠肺成纤维细胞纤维化,采用PD对细胞进行干预,检测大鼠肺纤维化细胞代谢活性,RT-PCR检测细胞信号蛋白Smad3、Smad7基因的表达,以及流式细胞术检测细胞上TGF-βII受体的表达.结果 干预组细胞代谢活性平均OD值0.299±0.022,模型组0.342±0.012（P＜0.05）;干预组Smad7表达较模型组上调,Smad3表达较模型组下降;干预组平均TGF-β II受体表达率（28.97±0.54）%,模型组（36.62±0.58）% （P＜0.05）.结论 PD可以抑制TGF-β诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和Smad3及TGF-β II受体表达,增强抑制性信号蛋白Smad7的表达.

桔梗皂苷-D联合5-氟尿嘧啶通过葡萄糖转运蛋白-1抑制宫颈癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨桔梗皂苷-D(PD)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对宫颈癌细胞的增殖抑制作用。方法用CCK-8实验检测PD单用及与5-FU联用对宫颈癌细胞的增殖抑制作用及半抑制浓度(IC 50)。将细胞分为对照组、20μmol/L PD组、20μmol/L 5-FU组及联合处理组(10μmol/L PD+10μmol/L 5-FU)。用流式细胞术检测各组细胞凋亡率、线粒体膜电位变化和活性氧水平变化;用细胞划痕实验检测细胞迁移;用Western blot检测各组蛋白表达变化。结果CCK-8实验结果显示,联合处理组宫颈癌细胞的存活率降低,与两个单药实验组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示联合处理组凋亡细胞比例达到42.37%,高于两个单药实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合处理组迁移的细胞数目显著降低,抑制效果达到50%,与两个单药实验组相比差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示联合处理组活性氧水平大幅度上升,加入NAC后联合处理组凋亡细胞比例下降为15.26%(P<0.05)。Western blot结果表明联合处理组葡萄糖转运蛋白-1(GLUT1)蛋白的表达量降低,加入NAC后GLUT1蛋白的表达升高。结论PD与5-FU联用能协同发挥抗癌作用,促进宫颈癌细胞凋亡,其作用机制是通过上调细胞中ROS水平,进而抑制GLUT1蛋白的表达。

桔梗皂苷-D对胃癌BGC823细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的探究桔梗皂苷-D对胃癌BGC823细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法将胃癌BGC823细胞随机分为对照组和低、中、高3个剂量实验组,对照组予以0.9%Na Cl,低、中、高剂量实验组分别以终浓度为5,10,20μmol·L-1桔梗皂苷-D处理。给药48 h后,噻唑蓝(MTT)法检测BGC823细胞增殖情况,Transwell小室实验及划痕法分别检测BGC823细胞侵袭及迁移能力。结果给药48 h后,低、中、高剂量实验组BGC823细胞增殖抑制率分别为(17.09±0.92)%,(32.03±0.87)%,(45.04±0.88)%;给药48 h后,对照组、低、中、高剂量实验组侵袭细胞数量分别为(348.74±24.79),(120.33±16.54),(82.05±10.21),(49.23±9.64)个,划痕愈合率分别为(67.01±3.72)%,(36.23±3.54)%,(27.14±3.20)%,(19.11±3.01)%。差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论桔梗皂苷-D可有效抑制胃癌BGC823细胞增殖,降低其侵袭及迁移能力,且具有显著的剂量依赖性。

乙烯利对桔梗生长发育、产量和品质影响的研究

田间试验研究了叶面喷施乙烯利对桔梗生长发育、产量及品质的影响。结果表明,叶面喷施乙烯利能有效缩短节间距,降低株高,从而提高桔梗抗倒伏能力;但对茎粗和分枝数影响不显著。随喷施乙烯利浓度的升高,桔梗产量呈上升趋势,喷施0.05%乙烯利的桔梗产量最高,0.07%次之,两者间差异不显著,但显著高于其它处理;喷施0.07%乙烯利的桔梗蛋白质、总皂苷、皂苷-D含量分别比对照增加了3.9%、15.8%、49.1%,水溶性浸出物和可溶性糖含量分别降低了9.0%和4.4%。可见,乙烯利对桔梗品质的调控具有浓度依赖性。综合考虑桔梗产量和品质,叶面喷施0.07%乙烯利效果最佳。