天疱疮患者抗桥粒芯糖蛋白与疾病相关性分析

目的探讨酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清桥粒芯糖蛋白（Dsg）1和Dsg3在天疱疮诊断及治疗中的应用价值。方法选择2014年1-12月在该科确诊为天疱疮的患者47例（观察组）,同期排除天疱疮的患者52例为对照组。间接免疫荧光法（IIF）检测抗表皮棘细胞桥粒抗体,ELISA检测Dsgl、Dsg3;分析其与天疱疮病情的相关性。结果 ELISA法的敏感性为95.74%,特异性为92.31%。IIF法敏感性为93.62%,特异性为86.54%。二者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。30例寻常型天疱疮患者16例Dsg1、Dsg3均阳性,8例红斑型和5例落叶型天疱疮患者均只有Dsg1阳性,2例增殖型天疱疮Dsg1、Dsg3均为阳性。寻常型和增殖型天疱疮Dsg1、Dsg3滴度分别为130.85±86、112.30±85.05,疾病活动性评分（5.10±1.86）分,相关系数分别为r=0.476（P=0.008）、r=0.816（P=0.001）。落叶型和红斑型天疱疮Dsg1滴度142.59±78.52,疾病活动评分平均为（2.77±0.92）分,r=0.800,P=0.001。结论 ELISA检测Dsg1、Dsg3敏感性、特异性高,有助于天疱疮的诊断及病情严重程度的评价。

桥粒芯糖蛋白1、3在HaCaT细胞、A431细胞及原代角质形成细胞中的表达

目的测定不同类型角质形成细胞（KC）桥粒芯糖蛋白（DSG）1、DSG3及DSG1mRNA、DSG3mRNA表达。方法不同KC（HaCaT细胞、A431细胞及原代KC）培养后，直接免疫荧光观察细胞DSG1、DSG3的表达，定量聚合酶链反应（qPCR）测定DSG1mRNA、DSG3mRNA相对表达水平。结果DSG1与DSG3表达于三种角质形成细胞，荧光强度显示，A431细胞高于HaCaT细胞，HaCaT细胞高于原代KC。三种细胞均表达DSG1、DSG3mRNA，原代KCDSG1与DSG3mRNA的相对表达量分别为HaCaT细胞的291．7％及237．4％，差异有统计学意义（P〈0．01）；A431细胞DSG1mRNA为HaCaT细胞的0．1％、DSG3mRNA则为HaCaT细胞的18．8％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论三种KC均可用于对DSG1、DSG3的相关研究；相对而言，正常培养的A431细胞表面DSG1、DSG3表达较HaCaT细胞及原代KC高；原代KCDSG1、DSG3mRNA水平较HaCaT细胞及A431细胞高。

桥粒芯糖蛋白抗体与天疱疮临床表型和疾病活动度的关系及其变化规律

目的评估酶联免疫吸附试验(ELISA)检测桥粒芯糖蛋白1(Dsg1)、Dsg3抗体与天疱疮患者临床表型、疾病活动度的关系及变化规律。方法收集2015年1月至2018年1月在中国医学科学院皮肤病医院就诊的天疱疮患者111例,按临床分型,采用ELISA测定患者初发时、控制阶段、维持阶段及复发时血清Dsg1、Dsg3抗体水平变化,并分析其变化规律。采用SPSS22软件,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,结果天疱疮初发时、控制阶段、维持阶段及复发时分别有92例、53例、33例、9例患者完成检测。92例初发患者中,36例落叶型天疱疮患者Dsg1和Dsg3抗体水平阳性率分别为100%277%,10例黏膜型寻常型天疱疮分别为20%、80%,46例黏膜皮肤型寻常型天疱疮分别为97.82%、95.65%。初发时、控制阶段、维持阶段和复发时落叶型天疱疮患者Dsg1抗体水平分别为(137.43±77.74)/13.94±14.81),(21.50±58.33)、(121.13±86.89)U/ml;黏膜型寻常型天疱疮患者Dsg3抗体水平分别为(125.61±94.81),(34.5±16.26)、0.6、258U/ml;黏膜皮肤型寻常型天疱疮患者Dsg1抗体水平分别为(115.39±70.62)、(15.74±25.10)、(3.62±12.09)、(78.60±92.25)U/ml;Dsg3抗体水平分别为(137.98±81.25)、(58.14±63.46)、(29.26±64.70)、(136.9±101.47)U/ml。落叶型天疱疮Dsg1抗体水平和黏膜型寻常型天疱疮、黏膜皮肤型寻常型天疱疮Dsg3抗体水平在控制阶段、维持阶段均低于初发时、复发时(P<0.05),治疗过程中2例患者出现表位扩展现象,4例患者病情稳定期时出现Dsg抗体高滴度现象:结论Dsg抗体谱与天疱疮临床表型相关,其ELISA值可用于监测疾病活动,并可对治疗的有效性作出评价。

抗构象表位桥粒芯蛋白抗体和乙酰胆碱受体抗体滴度与寻常型天疱疮病情活动度的相关性研究

目的研究寻常型天疱疮患者血清中相关抗体滴度与病情严重程度和病情活动度的相关性。方法收集2012—2015年于中国医学科学院皮肤病医院首次就诊的24例活动期寻常型天疱疮(PV)患者,评估患者活动期和稳定期天疱疮疾病面积指数(PDAI),并采集血清标本。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清标本中具有致病作用的抗构象表位桥粒芯蛋白(Dsg)抗体滴度、总Dsg抗体滴度和乙酰胆碱受体(AChR)抗体滴度。计量资料比较采用t检验,计数资料比较采用Fisher精确检验法,相关性比较采用Pearson分析。结果活动期患者的Dsg1抗体滴度(611.4±136.8)与抗构象表位Dsg1抗体滴度(585.5±134.7)差异无统计学意义(t=0.13,P=0.89),Dsg3抗体滴度(708.6±130.7)高于抗构象表位Dsg3抗体滴度(297.2±54.4,t=2.90,P<0.01)。活动期患者的Dsg1抗体滴度及抗构象表位Dsg1抗体滴度与PDAI评分均呈正相关(r=0.54、0.54,均P<0.01);Dsg3抗体滴度与PDAI评分无相关性(r=0.11,P=0.62),抗构象表位Dsg3抗体滴度与PDAI评分呈正相关(r=0.53,P<0.01)。20例稳定期患者血清中Dsg1抗体与抗构象表位Dsg1抗体滴度与首次就诊时比较均明显下降。Dsg3抗体滴度仅7例明显下降;13例仍存在较高滴度的Dsg3抗体,其中6例抗构象表位Dsg3抗体滴度明显下降,5例AChR抗体滴度由阳性转为阴性。结论Dsg1抗体及抗构象表位Dsg1抗体滴度都可以反映病情活动度。部分患者病情活动度与Dsg3抗体滴度不一致,抗构象表位Dsg3抗体或者AChR抗体可能有助于反映病情活动度。

71例天疱疮的棘层松解位置分析

目的 探讨天疱疮的棘层松解位置，为天疱疮出现不同位置棘层松解的表现提供解释。方法 收集43例寻常型天疱疮和28例落叶型天疱疮患者的临床资料、组织病理、免疫病理、天疱疮抗体指标值进行分析。结果 寻常型天疱疮中有35例棘层松解的位置发生在基底层上方，8例发生在表皮中上部，落叶型天疱疮中有25例棘层松解的位置发生在颗粒层、棘层上方，3例发生在表皮中下部，落叶型天疱疮患者抗Dsg1抗体指标较寻常型天疱疮患者显著升高（P = 0.047），寻常型天疱疮棘层松解的位置发生在表皮中上部的患者抗Dsg1、3抗体指标值与棘层松解发生在基底层上方的患者相比有差异，但无统计学意义。结论 寻常型天疱疮及落叶型天疱疮患者组织病理中，棘层松解的位置可发生于表皮中上部、表皮中下部。棘层松解的位置可能与抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体指标值等相关。

天疱疮患者皮损局部异位淋巴结构的病理学特征

目的 探讨天疱疮患者皮损处浸润淋巴细胞病理学特征及其与外周血抗桥粒黏蛋白（Dsg）1/Dsg3抗体滴度的相关性。方法 对2014—2016年上海交通大学医学院附属瑞金医院皮肤科93例寻常型和落叶型天疱疮患者的组织病理片进行分析。计算每例 × 50镜下淋巴细胞总数，定义为淋巴细胞密集程度指数。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定天疱疮患者血清中抗Dsg1/Dsg3抗体滴度。统计淋巴细胞密集程度指数与抗体滴度间相关性。对其中8例寻常型和8例落叶型天疱疮患者的皮损样本进行免疫组化染色，分析CD3^＋ T细胞、CD20^＋ B细胞、CD138^＋ 浆细胞的分布。结果 在93例病理切片中，Grade1、Grade2、Grade3淋巴细胞聚集出现概率分别为100.00%、68.09%、10.64%，寻常型（56例）和落叶型天疱疮（37例）比较，Grade1-3淋巴细胞聚集出现概率差异无统计学意义。淋巴细胞的密集程度在寻常型和落叶型天疱疮患者比较，差异无统计学意义，与天疱疮患者血清中特异性抗Dsg1和抗Dsg3 的抗体滴度无相关性。在16例天疱疮病例中，全部有CD3^＋ T细胞出现，15例有CD20^＋ B细胞，12例有CD138^＋ 浆细胞存在。16例切片中，Grade1-3淋巴细胞聚集区域中均含有大量的CD3^＋ T细胞，而含有CD20^＋ B细胞的淋巴细胞聚集占总数的52.80% ± 5.78%，含有CD138^＋ 浆细胞的淋巴细胞聚集占总数的34.59% ± 7.42%。CD3^＋ T细胞、CD20^＋ B细胞、CD138^＋ 浆细胞在寻常型（8例）和落叶型天疱疮（8例）分布差异无统计学意义。结论 天疱疮患者皮损处普遍出现不同程度的淋巴细胞浸润，可能形成异位淋巴结构，参与皮损的形成和加重。

天疱疮患者皮损局部B淋巴细胞及其产生特异性抗体的功能研究

目的 检测寻常型天疱疮患者皮损局部B淋巴细胞及其产生特异性抗体的功能。方法 寻常型天疱疮患者35例，健康对照22例。取健康对照皮肤和寻常型天疱疮患者初发水疱或糜烂皮损组织，分离获得单个核细胞。流式细胞仪检测患者皮损局部淋巴细胞、CD19＋ B细胞比例，以及特异性识别桥粒芯糖蛋白1（Dsg1）和Dsg3的CD19＋ B淋巴细胞比例。体外培养寻常型天疱疮患者皮损局部淋巴细胞，ELISA法检测培养上清液中抗Dsg1和Dsg3抗体滴度，采用受试者工作特征曲线（ROC）分析阳性率。结果 寻常型天疱疮患者皮损局部淋巴细胞、CD19＋ B细胞比例分别为17.95% ± 3.85%、4.27% ± 1.13%，高于健康对照组（7.83% ± 1.29%、0.61% ± 0.31%），差异有统计学意义（t = 2.49，U = 13.00，均P 〈 0.05）。天疱疮患者皮损局部CD19＋ B淋巴细胞中，表达IgG的细胞比例为（38.33 ± 5.56）%，表面识别Dsg1与Dsg3的细胞比例分别为12.87% ± 1.267%、10.42% ± 1.243%。局部淋巴细胞体外培养6 d后，培养上清液中抗Dsg1与Dsg3抗体滴度分别为（4.89 ± 1.56） U/ml、（35.45 ± 13.03） U/ml，阳性率分别为85%（17/20）和95%（19/20）。 结论 寻常型天疱疮患者皮损局部有可与Dsg1及Dsg3特异性结合的B淋巴细胞聚集，体外培养后可产生特异性抗Dsg1与抗Dsg3自身抗体。