低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白2表达的影响

目的:观察桥粒芯糖蛋白2(desmoglein2,Dsg2)在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用Dsg2抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H.E染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃温度条件下保存皮肤组织结构保存较好,Dsg2含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤可能与Dsg2破坏有关。

PI3K/AKT途径在调节侵袭性前列腺癌中的E-钙黏蛋白和桥粒芯糖蛋白2中的作用

目的本研究旨在通过检查E-钙黏蛋白和桥粒芯糖蛋白2(DSG2)的功能意义,全面了解细胞-细胞黏附在前列腺癌侵袭性中的作用和调节。方法首先在正常前列腺组织和前列腺癌组中使用免疫荧光检查E-钙黏蛋白表达。进行相关和存活分析以评估其临床意义。在体外和体内分析这种遗传改变的功能意义,后者通过使用肿瘤发生以及外渗和转移性肿瘤形成测定。结果在原发性前列腺癌患者中,E-钙黏蛋白和DSG2的表达降低与早期的生化复发显着相关。产生转基因DU145 E-钙黏蛋白敲低和组成型活性AKT过表达株系。显示E-钙黏蛋白的缺失导致体内原发性和转移性肿瘤形成受损,表明除了已知的肿瘤抑制因子之外,E-钙黏蛋白的肿瘤启动子作用。AKT的激活导致E-cadherin表达和Snail核定位的显着降低,表明PI3K/AKT信号传导途径在E-钙黏蛋白的瞬时抑制中的作用。结论这些发现通过PI3K途径的调节说明了细胞-细胞黏附在进展为侵袭性前列腺癌中的关键作用。

鲍温病中桥粒芯糖蛋白1+2表达的研究

目的 : 探讨桥粒相关蛋白与皮肤肿瘤的关系 ,对桥粒芯糖蛋白 1+2在鲍温病中的表达水平进行了研究。方法 : 采用免疫组织化学染色方法检测 18例鲍温病皮损中桥粒芯糖蛋白 1+2的表达情况 ,以 8例正常皮肤组织作对照。结果 : 桥粒芯糖蛋白 1+2在正常皮肤 (8 8)表皮全层细胞间呈现较强的染色 ;鲍温病中 4例 (4 18)表达近似正常对照 (+++) ,12例表达为胞周灶状染色 (++) ,2例表达为胞浆内近核颗粒状染色 (+)。结论 : 桥粒芯糖蛋白 1+2在皮肤鲍温病中表达部分下调 ,可能与肿瘤的恶性程度有关。

桥粒芯蛋白2在胆管癌中的表达及其临床意义

目的探讨桥粒芯糖蛋白2(DSG2)在胆管癌组织中的表达及临床意义。方法选取141例胆管癌患者作为研究对象,采用免疫组织化学法检测DSG2在胆管癌组织中的表达情况。结果胆管癌组织中DSG2的高表达率高于癌旁正常组织(P<0.05)。不同性别、年龄、组织学分级、T分期胆管癌患者胆管癌组织中DSG2的高表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);N0、M0、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期胆管癌患者胆管癌组织中DSG2的高表达率均高于N1、M1、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期胆管癌患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示:不同性别、组织学分级、年龄、M分期胆管癌患者的总生存期比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同DSG2表达情况、T分期、N分期、TNM分期胆管癌患者的总生存期比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示:DSG2低表达为影响胆管癌患者生存的独立危险因素(P<0.05)。结论 DSG2在胆管癌中异常表达,可能与胆管癌的发生、发展相关,推测其可能作为胆管癌的一种新型肿瘤标志物,为胆管癌的诊治以及预后评估提供一个新的思路。

宫颈癌组织中DSG2、CENPM蛋白表达水平及临床预后意义

目的分析宫颈癌患者癌组织中桥粒芯糖蛋白(DSG)2、着丝粒蛋白(CENP)M表达水平及临床预后意义。方法选取92例老年宫颈癌患者,收集92份宫颈癌组织(癌变组)和癌旁组织(距肿瘤边缘4 cm处,癌旁组),另外选取85例正常宫颈组织为对照组。应用免疫组化法检测DSG2、CENPM蛋白水平。比较两组DSG2、CENPM蛋白表达差异及不同临床病理特征宫颈癌患者癌组织中DSG2、CENPM蛋白表达差异,采用多因素Cox回归分析宫颈癌患者预后相关因素。结果癌变组DSG2、CENPM蛋白阳性表达率明显高于癌旁组、对照组(P<0.001)。FIGOⅡ期、低分化、淋巴结转移癌组织中DSG2、CENPM蛋白阳性表达率更高(P<0.001)。DSG2、CENPM蛋白阳性与阴性表达患者5年生存率差异有统计学意义(P<0.001)。FIGOⅡ期、低分化、淋巴结转移、DSG2阳性、CENPM阳性宫颈癌患者5年生存率显著降低(P<0.05)。FIGOⅡ期、低分化、淋巴结转移、DSG2阳性、CENPM阳性为宫颈癌患者预后的危险因素(P<0.001)。结论老年宫颈癌组织中DSG2、CENPM蛋白阳性表达增加,宫颈癌临患者FIGOⅡ期、低分化、淋巴结转移阳性表达水平更高,同时DSG2、CENPM蛋白阳性表达患者预后更差。

55型人腺病毒致hDSG2转基因小鼠肺感染动物模型的建立及意义

背景55型人腺病毒(human adenovirus type 55,HAdV-B55)可引起呼吸道感染,严重者可发展为病毒性肺炎甚至危及生命。理想的HAdV-B55感染模型对发病机制、药物治疗以及多价疫苗的研制有重要价值。目的建立HAdV-B55人源化受体桥粒芯糖蛋白2(humanized receptor desmoglein-2,hDSG2)转基因小鼠肺感染动物模型。方法雄性hDSG2转基因小鼠、野生型C57BL/6(C57)小鼠各25只,按感染后3 d、5 d、7 d、14 d和PBS对照随机分为5组,每组5只,感染小鼠用HAdV-B55(108 TCID50)滴鼻进行感染,对照组用相同剂量的PBS滴鼻,每日称重并观察小鼠活动情况,分别于感染后3 d、5 d、7 d、14 d取材,对照组滴鼻后14 d取材。测定各组的肺系数、肺组织病理、肺组织内HAdV-B55基因拷贝量、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和γ干扰素表达水平以及血清中IL-6浓度水平。结果hDSG2转基因小鼠感染HAdV-B55病毒后一般状况较C57小鼠恢复慢,体质量增长较慢(P<0.01),且表现出活动减少、蜷缩抱团等急性感染症状;hDSG2转基因小鼠的肺组织病理表现较C57小鼠重,主要为肺泡壁增厚和炎性细胞浸润,同时肺系数增高显著(P<0.05),肺组织内HAdVB55基因拷贝量显著增多(P<0.05),肺组织内IL-6表达水平(P<0.05)与血清中IL-6浓度显著升高(P<0.01)。结论采用经鼻滴入HAdV-B55方法,可以建立hDSG2转基因小鼠肺感染的动物模型,该模型稳定性和持续致病性较好,具有进一步深入研究的价值。

DSG2^(F536C)点突变基因敲入小鼠心脏表型的观察研究

目的观察桥粒芯糖蛋白2(DSG2)点突变(DSG2^(F536C))基因敲入小鼠心脏结构、功能、病理学改变,并初步探讨其纤维化的发生机制。方法构建DSG2^(F536C)突变基因敲入小鼠模型,分为纯合子突变组(DSG2^(mt/mt))、杂合子突变组(DSG2^(mt/wt))和野生型组(DSG2^(wt/wt))。分别行超声心动图检查小鼠心脏结构和功能,Masson三色染色和HE染色观察心肌组织病理特点,并用Western blot法测定心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达。结果与DSG2^(wt/wt)组小鼠相比,DSG2^(mt/wt)组小鼠左室射血分数和缩短分数显著降低,DSG2^(mt/mt)组小鼠则较DSG2^(mt/wt)组进一步降低,并伴有室壁明显变薄和心腔显著扩大。DSG2^(mt/mt)组小鼠的右心室出现心肌排列紊乱、纤维化和炎性反应,约1/3的小鼠同时累及左心室,而DSG2^(mt/wt)组小鼠仅见心肌排列紊乱。与DSG2^(wt/wt)组小鼠相比,DSG2^(mt/wt)组和DSG2^(mt/mt)组小鼠心肌组织TGF-β_1蛋白表达明显升高。结论 DSG2^(F536C)小鼠表现出心室扩大、室壁变薄、心功能下降、炎性反应和心室纤维化浸润和TGF-β_1升高等表征,类似于临床致心律失常性右室心肌病(ARVC)患者的表型,提示其为致病性突变。此外,DSG2^(F536C)基因敲入小鼠为深入研究DSG2突变导致ARVC的发病机制提供了良好的动物模型。

DSG2基因p.Phe531Cys纯合突变所致致心律失常性右心室心肌病家系的临床表型和遗传学分析

目的对桥粒芯糖蛋白2(DSG2)基因p.Phe531Cys罕见纯合突变所致致心律失常性右心室心肌病(ARVC)一个家系的基因型-表型进行分析,并对突变位点进行生物信息学分析。方法临床观察性研究。收集2022年7月于南京医科大学附属江宁医院心血管内科住院的1例确诊为ARVC的先证者及其家系成员的临床资料进行评估。采集静脉血进行二代测序,并用Sanger测序验证。从美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库获取DSG2基因野生型氨基酸序列,通过人工编辑获得突变型氨基酸序列,对DSG2蛋白二级及三级结构进行预测分析。结果先证者(Ⅲ2)符合ARVC诊断标准,其余家系成员均不符合。先证者为DSG2基因p.Phe531Cys纯合突变,先证者女儿(Ⅳ1)携带DSG2基因杂合突变。生物信息学分析提示,该突变位点在脊椎动物中保守性较好,氨基酸突变后蛋白质稳定性降低。突变型DSG2及野生型DSG2蛋白质二级结构无明显差异,三级结构突变位点处的折叠角度发生变化。结论DSG2基因p.Phe531Cys纯合突变可导致ARVC,不同的基因型可导致不同的临床表现。

DSG2^(F536C)点突变基因敲入小鼠的心外膜电压标测与心肌纤维化

目的探讨桥粒芯糖蛋白2(DSG2)点突变(DSG2^(F536C))小鼠心外膜电压标测及心肌纤维化特征.方法通过点突变基因敲入建立DSG2^(F536C)小鼠模型,根据基因型分为纯合子组(Hom)、杂合子组(Het)和野生型组(WT),每组各6只.以10周龄小鼠,采用多微电极紧贴在小鼠左、右室表面行在体心外膜标测,Matlab软件分析心外膜标测数据,测定左、右室单极与双极电压的最高值.取心肌标本,Masson三色染色后光镜观察心脏形态变化,并测量左、右室胶原容积分数,评估心肌纤维化.结果Hom组的右室单极电压最高值较WT组、Het组小鼠显著降低[(0.582±0.080)mV vs(2.217±0.146)mV、(2.017±0.062)mV,P<0.05],右室双极电压最高值较W T组显著降低[(0.210±0.080mVvs0.978±0.190mV,P<0.05].三组左室单极与双极电压最高值无差异[WT:(2.340±0.560)mV、Het:(1.920±0.190)mV、Hom:(1.975±0.180)mV,P>0.05;WT:(2.083±0.620)mV、Het:(1.610±0.200)mV、Hom:(1.317±0.120)mV,P>0.05].与WT组、Het组相比,Hom组右室胶原容积积分显著升高(39.792%±9.322%vs 3.161%±0.296%、3.157%±0.213%,P<0.001),左室则无显著差异.Hom组已有显著心肌纤维化形成,而WT组、Het组则无相似表现.结论DSG2^(F536C)点突变基因敲入纯合子小鼠在10周龄时右室心外膜单、双极电压均明显降低,心肌纤维化程度显著.左室纤维化不明显,相应电压标测也未测得显著差异.