桥粒芯胶蛋白3前导肽基因的克隆和原核表达

目的 :克隆人桥粒芯胶蛋白 3前导肽 (Dc3p)基因 ,并进行表达、纯化和鉴定。方法 :用PCR法从桥粒芯胶蛋白 (Dc)cD NA文库中扩增出Dc3p基因 ,与pGEX 4T 2载体连接成重组表达质粒pGEX 4T 2 Dc3p ;重组质粒转入BL2 1大肠杆菌 ,经诱导表达谷胱甘肽S 转移酶 Dc3p(GST Dc3p)融合蛋白 ,该蛋白经GlutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化 ,SDS PAGE和免疫印迹法检测鉴定。结果 :经酶切及序列分析鉴定 ,重组质粒pGEX 4T 2 Dc3p成功构建 ,诱导后高表达GST Dc3p融合蛋白并得到纯化 ,免疫印迹法证实表达蛋白为GST Dc3p。结论 :获得高表达、高纯度的GST Dc3p融合蛋白 ,为Dc3p的功能及免疫学分析打下基础。

TP63对非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性及DSC3/DSG3基因表达的影响

目的探讨肿瘤蛋白(TP)63对非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性及桥粒芯胶蛋白(DSC)3/桥粒芯糖蛋白(DSG)3的影响。方法体外培养人非小细胞肺癌吉非替尼敏感细胞株PC9、吉非替尼耐药细胞株PC9/GR,将PC9/GR细胞随机分为对照组、TP63-siRNA组(转染TP63-siRNA)和NC-siRNA组(转染NC-siRNA),用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测转染后细胞吉非替尼半数抑制浓度(IC50)和细胞增殖情况;流式细胞术检测PC9/GR细胞凋亡情况;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞TP63、DSG3、DSC3 mRNA表达;蛋白印迹分析法检测各组细胞TP63、DSG3、DSC3蛋白表达。结果与PC9细胞相比,耐药细胞PC9/GR中TP63 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与对照组和NC-siRNA组相比,TP63-siRNA组PC9/GR细胞IC50值,细胞增殖、迁移、侵袭能力,TP63、DSG3、DSC3 mRNA及蛋白表达显著下降,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论TP63在PC9/GR细胞中高表达,干扰TP63表达可抑制DSC3/DSG3表达,逆转PC9/GR对吉非替尼耐药性。

天疱疮小鼠模型研究的现状及进展

天疱疮(pemphigus)是一种机制不明的慢性自身免疫性大疱性疾病。研究和制作其动物模型对疾病的原因、发病机制及治疗措施等具有重要意义,但目前尚无统一的标准方法。本文就国内外天疱疮的小鼠模型(Dsg3-/-小鼠,过继免疫的Rag2-/-小鼠,Dsc3缺陷小鼠,单链可变区抗体scFv致病性)及人皮肤移植免疫缺陷鼠相关研究的现状和进展作一综述。