河豚毒素停搏液对大鼠离体缺血再灌注损伤心肌功能及其桥粒蛋白表达的影响

目的:观察Na+通道阻滞剂河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)停搏液对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌桥粒蛋白(desmoplakin)表达及心功能的影响,探讨其对缺血再灌注损伤心肌的可能保护机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为St.Thomas-2停搏液灌注组(STH-2组,n=10)和TTX停搏液灌注组(TTX组,n=10),分别应用相应的停搏液停搏,建立大鼠离体心脏Langendorff-Neely灌注模型;待搏动稳定,灌注30min后停搏60min,再灌注60min,观察各组心脏停搏前后的心率(HR)、冠状动脉流量(CAF)、左心室收缩末期压力(LVESP)和压力变化速率(±dp/dt)的恢复率,采用免疫组化和Western印迹法检测心肌桥粒蛋白的分布及量的变化。结果:恢复灌注后,与TTX组比较,STH-2组心肌桥粒蛋白分布紊乱,表达明显减少(P<0.01),心功能指标(HR、CAF、LVESP和±dp/dt)的恢复率也明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论:河豚毒素停搏液有利于缺血再灌注损伤心肌功能的恢复,效果优于经典的STH-2停搏液,其保护作用可能与其保护心肌桥粒蛋白表达有关。

HL-1心肌细胞中桥粒蛋白基因表达下调对Nav1.5功能的影响

目的采用基因沉默技术抑制HL-1细胞的桥粒蛋白(DSP)基因表达以明确DSP与Nav1.5的结构和功能关系。方法用基因沉默技术抑制DSP基因的表达,然后采用Western blotting检测HL-1细胞DSP和Nav1.5蛋白的表达,用双免疫荧光方法检测DSP与Nav1.5蛋白的表达与定位情况,并用全细胞膜片钳技术检测细胞钠通道的电生理特征。结果与空白组和对照组相比,siRNA-DSP组的DSP和Nav1.5蛋白表达量降低。免疫荧光检测发现空白组和对照组DSP与Nav1.5蛋白存在共定位情况,而siRNA-DSP组DSP和Cx43蛋白共定位则遭到破坏,并且膜片钳检测发现siRNA-DSP组峰值电流从(156.3±6.2)pA/pF减少至(41.8±3.1)pA/pF(P<0.05),电压依赖的失活曲线V0.5从-42 mV左移至-61 mV(P<0.05)和从失活恢复时间延长。结论 DSP表达抑制不仅使DSP与Nav1.5的共定位特征遭到破坏,而且还改变了Nav1.5电生理特征。

桥粒蛋白基因突变与致心律失常性右室心肌病的分子遗传学研究进展

致心律失常性右室心肌病是一种病因复杂的遗传性心肌病,临床上甚至导致致命性心律失常,尤其在年轻人和运动员。该病的病理组织学特征是右心肌被纤维化组织取代,以至于发生早期室性心律失常和晚期心力收缩减弱和心衰。目前已经发现了7个致病基因与本病相关,其中有5个是桥粒蛋白编码基因(PG,PKP2,DP,DSG2,DSC2),表明桥粒蛋白基因突变越来越被关注和认识。对致心律失常性右室心肌病(ARVC)与桥粒基因突变的基因表型及发病机制做一综述。

落叶毒素引起角质形成细胞桥粒蛋白损伤的研究

落叶毒素由金黄色葡萄球菌分泌 ,是金黄色葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征的主要致病因素。金黄色葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征与落叶型天疱疮在临床及组织病理上非常相似 ,电镜发现落叶毒素作用于桥粒 ,近期研究揭示落叶毒素的作用底物为桥粒芯蛋白 1。关于落叶毒素致病机制的理论主要有 :落叶毒素的微观结构显示其类似于谷氨酸特异的丝氨酸蛋白酶 ,通过酶解作用裂解桥粒芯蛋白 1;落叶毒素还可能具有超抗原活性 ,通过免疫反应破坏桥粒。对落叶毒素作用位点、作用机制的研究将有助于了解金黄色葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征和天疱疮等相关疾病的发病机制 。

桥粒蛋白与离子转运相关通道

桥粒为细胞与细胞之间的一种连接结构,参与细胞间机械应力传导.在心肌组织中,桥粒与粘着连接及缝隙连接共同构成闰盘,对于维护心肌闰盘结构和功能的完整性具有重要作用.近年来,越来越多的研究表明,桥粒蛋白基因突变、表达的缺失或功能异常,可引起心肌细胞钠、钾离子通道、缝隙连接蛋白等心肌电活动相关结构的重塑,增加心肌电学异质性,进而促发心律失常.本文将就桥粒蛋白与离子转运相关通道关系的最新研究进展进行综述.

桥粒蛋白生化免疫特性研究

桥粒在含高浓度脲(0.5mol/L)的变性剂中(100℃)作用30分钟即能完全溶解.经SDS-PAGE分离获得7条高分子量(>67kd)蛋白带和一些小分子量角蛋白。这7条高分子量蛋白带是桥粒的特异组成蛋白,即桥粒蛋白Ⅰ和Ⅱ(Desmoplakin Ⅰ和Ⅱ),多肽3、4a、4b、5、6,它们的分子量分别为250kd和215kd、165kd、130kd、115kd、83kd及75kd.用制备电泳法1次可提取Desmoplakin Ⅰ 2～2.5mg,纯度达93.1％.等电聚焦电泳测定其等电点为6.8～7.2。氨基酸组成分析甘氨酸含量很高,免疫印迹表明能被Desmoplakin Ⅰ McAb识别.

抗桥粒芯蛋白1、3抗体及大疱性类天疱疮180、230抗体联合检测诊断大疱性皮肤病的应用价值

目的 探讨抗桥粒芯蛋白1、3(Dsg1、3)抗体及大疱性类天疱疮180、230(BP180、230)抗体联合检测在大疱性皮肤病临床诊断中的应用价值。方法 自2020年3月至2023年1月,纳入郑州大学第一附属医院收治的经组织病理结果、直接免疫荧光检测确诊的大疱性皮肤病患者88例为观察组,选取本院同期健康体检者76名为对照组。分析两组Dsg1、Dsg3、BP180、BP230抗体的阳性检出情况;分析观察组血清Dsg1、Dsg3、BP180、BP230抗体标本诊断类型占比及观察组不同年龄组大疱性皮肤病疾病类型阳性率占比;绘制ROC曲线分析Dsg1、Dsg3、BP180、BP230抗体单一及联合检测对大疱性皮肤病的诊断价值。结果 两组血清Dsg1、Dsg3、BP180、BP230抗体阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。据Dsg1、Dsg3、BP180、BP230抗体检测结果,诊断类型:BP、PV、PF、PF+BP、PV+BP阳性率分别为32.95%、20.45%、11.36%、7.95%、3.41%。其中BP阳性率占比最高,PV+BP阳性率占比最低,两者比较差异具有统计学意义(P<0.05)。>60岁组BP阳性率高于≤60岁组,PV及PF阳性率低于≤60岁组,差异有统计学意义(P<0.05)。Dsg1、Dsg3、BP180、BP230抗体联合检测对大疱性皮肤病灵敏度、特异度分别为91.02%、88.66%,AUC(95%CI)为0.821(0.745~0.911),均高于上述抗体单一检测(P<0.05)。结论 Dsg1、Dsg3、BP180、BP230抗体在大疱性皮肤病诊断中具有重要参考价值,且联合检测可提高诊断的准确性;大疱性皮肤病患者年龄和抗体类型之间也存在一定的关联,联合检测Dsg1、Dsg3、BP180、BP230抗体有助于大疱性皮肤病进行更精细的诊断和治疗。

桥粒胶蛋白2及其在肿瘤疾病中的研究进展

桥粒(Desmosome,DSM)是大型的大分子蛋白质集合体,它将中间丝细胞骨架与钙黏蛋白介导的细胞黏附点机械地连接起来,为维持经历机械应力组织(如皮肤、心肌和胃肠道黏膜等)提供结构完整性。桥粒胶蛋白(Desmocollins,DSCs)属于钙黏蛋白超基因家族,在细胞间黏附中发挥重要作用。桥粒胶蛋白2(Desmocollin-2,DSC2)是DSC家族成员,已被发现在几种类型的癌症中异常表达,影响肿瘤细胞的侵袭和转移,并参与肿瘤进展。DSC2在人类不同疾病中的表达和调控机制的差异为其治疗提供了潜在靶点。研究并阐明DSC2在肿瘤中的发生机制,探索临床检查和治疗的具体靶点,可为疾病的早期治疗提供实用思路。本文对DSC2的分子结构及其相关分子机制、DSC2与肿瘤的关系进行综述。

血清抗桥粒芯蛋白1、抗桥粒芯蛋白3及抗表皮基底膜抗原180抗体在自身免疫性大疱病诊断中应用研究

目的:探讨血清抗桥粒芯蛋白1(Dsg1)、抗桥粒芯蛋白3(Dsg3)及抗表皮基底膜抗原180抗体(BP180)在口腔自身免疫性大疱病(ABD)诊断中应用价值。方法:选取2020年1月—2022年1月我院收治的152例口腔ABD患者(ABD组)、152例口腔溃疡患者(溃疡组)及152例健康人群(对照组),比较各组及不同病情程度患者血清Dsg1、Dsg3、BP180,统计血清Dsg1、Dsg3、BP180检出口腔ABD情况,应用Spearman分析血清Dsg1、Dsg3、BP180与病情程度关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Dsg1、Dsg3、BP180及联合诊断口腔ABD价值。结果:ABD组血清Dsg1、Dsg3、BP180大于溃疡组、对照组(P<0.05);血清Dsg1阳性检出口腔ABD 134例,Dsg3阳性检出口腔ABD 138例,BP180阳性检出口腔ABD 128例,血清Dsg1阳性、Dsg3阳性联合BP180阳性检出口腔ABD 150例;不同病情患者间血清Dsg1、Dsg3、BP180比较显示:重度>中度>轻度,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);血清Dsg1、Dsg3、BP180与口腔ABD患者病情程度呈正相关(P<0.05);血清Dsg1、Dsg3、BP180诊断口腔ABD的ROC曲线下面积分别为0.941、0.954、0.934,三者联合诊断口腔ABD的ROC曲线下面积为0.993;三者联合的特异度、准确度高于单一指标的灵敏度、准确度。结论:血清Dsg1、Dsg3、BP180与口腔ABD及其病情严重程度有关,三者联合诊断口腔ABD具有较高的灵敏度、特异度、准确率,可作为口腔ABD诊断和病情评估的标志物。

大理州南涧县云南不明原因猝死病例亲属ARVC桥粒蛋白基因突变分析

目的 分析云南省大理州南涧县云南不明原因猝死(简称云南猝死)病例亲属常见致心律失常性右室心肌病(ARVC)桥粒蛋白基因突变情况,为病因假设和防控措施提供依据.方法 采集病例亲属(n=7)和对照村民(n=7)的血液样本,同时进行病例亲属和对照村民的基本情况调查和心电图检查.提取血液样本DNA为PCR扩增模板,采用Sanger法进行桥粒斑菲素蛋白2(PKP2)、桥粒芯蛋白2(DSG2)、桥粒芯胶蛋白2(DSC2)、桥粒斑蛋白(DSP)和桥粒斑珠蛋白(JUP)5个ARVC桥粒蛋白基因共97个外显子的测序,综合分析基因突变情况.结果 病例亲属中有5人携带基因突变位点,包括DSP基因20号外显子c.2862 C>T(p.Cys954Cys)、24F号外显子c.7122 C>T (p.Thr2374Thr)杂合同义突变,DSC2基因15号外显子c.2326 A>G(p.Ile776Val)杂合错义突变,均为单杂合突变携带者;其中,为父子关系的病例亲属2人均携带DSC2基因同一位点突变.经心电图检查,在携带基因突变位点的病例亲属5人中,有3人发生ST-T改变或顺钟向转位改变.对照村民均未检测到PKP2、DSG2、DSC2、DSP、JUP 5个基因的突变.结论 南涧县云南猝死病例亲属存在ARVC桥粒蛋白DSP和DSC2基因突变.DSC2基因c.2326 A>G (p.Ile776Val)致病性突变可能与部分云南猝死病例的发病有关.

云南不明原因猝死重点病区县人群ARVC桥粒蛋白基因突变筛查

目的了解云南省鹤庆县云南不明原因猝死(简称云南猝死)病例及病例亲属的5个常见致心律失常性右室心肌病(ARVC)桥粒蛋白基因突变情况, 探索ARVC桥粒蛋白基因突变与云南猝死之间的病因联系。方法 2021年1月, 收集鹤庆县8个发病自然村的云南猝死病例尸解心腔血, 采集病例亲属外周静脉血。提取血样DNA, PCR扩增后采用Sanger法对5个桥粒蛋白基因[桥粒斑蛋白(DSP)、桥粒芯蛋白2(DSG2)、桥粒斑菲素蛋白2(PKP2)、桥粒斑珠蛋白(JUP)、桥粒芯胶蛋白2(DSC2)]的97个外显子位点进行测序, 综合分析基因突变情况。结果收集云南猝死病例3人份血样, 采集病例亲属36人份血样。39份血样共检出26个基因突变位点, 总突变率为26.80%(26/97), DSP、DSG2、PKP2、JUP、DSC2基因分别有13、5、3、3、2个位点发生突变。其中19个为已报道突变, 7个为新发现突变:DSP基因3号外显子c.372G>A、15号外显子c.2090A>G、17号外显子c.2371C>A、24-I号外显子c.8458T>G, DSG2基因8号外显子c.861C>T, PKP2基因3号外显子c.892C>A、8号外显子c.1725G>T。3例云南猝死病例及36名病例亲属均为复合基因突变携带者, 同一人同时携带3 ~ 9个基因突变位点。结论鹤庆县云南猝死病例及病例亲属存在ARVC桥粒蛋白DSP、DSG2、PKP2、JUP、DSC2基因突变, 可能是部分云南猝死发病的遗传背景因素。

云南省大理州祥云县云南不明原因猝死病区人群ARVC桥粒蛋白基因突变筛查

目的了解云南省大理州祥云县云南不明原因猝死(简称云南猝死)病区人群常见致心律失常性右室心肌病(ARVC)桥粒蛋白基因的突变情况,探索ARVC桥粒蛋白基因突变与云南猝死之间的病因联系。方法收集祥云县云南猝死病例(n=1)的尸解心腔血,采集同发病例(n=1)和病例亲属(n=16)的外周静脉血,提取血样DNA,PCR扩增后采用Sanger法对5个ARVC桥粒蛋白基因[桥粒斑菲素蛋白2(PKP2)、连接桥粒斑珠蛋白(JUP)、桥粒斑蛋白(DSP)、桥粒芯糖蛋白2(DSG2)、桥粒芯胶蛋白2(DSC2)]的97个外显子进行测序;同时,调查云南猝死病例、同发病例及病例亲属的基本情况和遗传家系,综合分析基因突变情况。结果云南猝死病例和同发病例携带JUP、DSP、DSG2基因突变,病例亲属中PKP2、JUP、DSP、DSG2、DSC2基因各有2、14、16、15、4人发生突变。云南猝死病例、同发病例及病例亲属携带6个相同的突变位点:JUP基因3号外显子c.213 T>C同义突变,14号外显子c.2089 A>T错义突变;DSP基因19号外显子c.2631 G>A同义突变,24号外显子c.8472 G>C同义突变;DSG2基因8号外显子c.861 C>T同义突变,15号外显子c.3321 T>C同义突变。结论祥云县云南猝死病例、同发病例及病例亲属携带的6个相同突变位点(JUP基因c.213 T>C、c.2089 A>T,DSP基因c.2631 G>A、c.8472 G>C,DSG2基因c.861 C>T、c.3321 T>C)可能与部分云南猝死的发病有关。

致心律失常性右室心肌病桥粒蛋白基因突变检测

目的致心律失常性右室心肌病(ARVC)为常染色体遗传性疾病,目前已经发现了与之相关的数个基因。大陆ARVC患者的致病基因筛查鲜有报道。方法本研究纳入2例家族性ARVC患者及10例散发的ARVC患者,提取其外周血DNA,设计DSP、PKP2、DSG2、DSC2和JUP/PG基因各外显子的引物,聚合酶链反应(PCR)扩增其功能区的外显子片段,直接测序,将测序结果与正常基因组进行比对以确定其突变位点。结果去除单核苷酸多态(sNF)后,12例ARVC患者中有5例存在基因突变:DSG2基因第8号外显子、第14号外显子存在错义突变位点;JUP基因第3号外显子存在同义突变位点、第5号外显子基因存在错义突变位点。结论中国ARVC人群的DSG2基因和JUP基因存在致病突变。

桥粒斑蛋白研究进展

桥粒是上皮细胞的重要超微结构特征。它所含的蛋白成份十分复杂。八十年代以来,国外在该领域的研究非常活跃。其中研究最深入的是桥粒斑蛋白(desmoplakin,简 DP)Ⅰ和Ⅱ。本文就 DPⅠ和 DPⅡ的研究进展综述如下。一、DPⅠ和 DPⅡ的生化特性 DPⅠ和 DPⅡ是桥粒的主要蛋白,分子量分别为250kd 和215kd,定位在桥粒斑(desmosnal plaque)。其等电点均为 pH6.

桥粒蛋白基因突变与婴儿猝死综合征

婴儿猝死综合征(SIDS)指1岁以内健康的婴儿在无明显病因下而发生猝死,经系统解剖、全面的现场调查和临床病史回顾仍难以完全解释其死亡原因.桥粒蛋白基因变异可引起心肌Cx43蛋白表达异常及心肌细胞钠电流的改变.本文综述介绍桥粒蛋白基因突变与SIDS发生的相关性.

天疱疮患者抗桥粒芯糖蛋白与疾病相关性分析

目的探讨酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清桥粒芯糖蛋白（Dsg）1和Dsg3在天疱疮诊断及治疗中的应用价值。方法选择2014年1-12月在该科确诊为天疱疮的患者47例（观察组）,同期排除天疱疮的患者52例为对照组。间接免疫荧光法（IIF）检测抗表皮棘细胞桥粒抗体,ELISA检测Dsgl、Dsg3;分析其与天疱疮病情的相关性。结果 ELISA法的敏感性为95.74%,特异性为92.31%。IIF法敏感性为93.62%,特异性为86.54%。二者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。30例寻常型天疱疮患者16例Dsg1、Dsg3均阳性,8例红斑型和5例落叶型天疱疮患者均只有Dsg1阳性,2例增殖型天疱疮Dsg1、Dsg3均为阳性。寻常型和增殖型天疱疮Dsg1、Dsg3滴度分别为130.85±86、112.30±85.05,疾病活动性评分（5.10±1.86）分,相关系数分别为r=0.476（P=0.008）、r=0.816（P=0.001）。落叶型和红斑型天疱疮Dsg1滴度142.59±78.52,疾病活动评分平均为（2.77±0.92）分,r=0.800,P=0.001。结论 ELISA检测Dsg1、Dsg3敏感性、特异性高,有助于天疱疮的诊断及病情严重程度的评价。

ELISA技术检测寻常型天疱疮桥粒芯蛋白3抗体水平研究

目的:评价酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗桥粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)3抗体在寻常型天疱疮(PV)诊断中的意义。方法:对来自不同中心的106例PV患者和106例对照人群血清标本编盲后,进行ELISA检测抗Dsg3自身抗体和间接免疫荧光(IIF)法检测血清天疱疮自身抗体。结果:EIISA法检测Dsg3抗体敏感度为77.4%,特异性为94.3%;IIF法检测抗体敏感度为79.2%,特异性为94.3%。两组间的差异无统计学意义。结论:ELISA方法检测Dsg3抗体对于寻常型天疱疮的诊断是一种较好的辅助方法。

天疱疮患者病情与抗桥粒芯蛋白抗体水平的相关性研究

目的:研究天疱疮患者血清中抗桥粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)1和抗Dsg3抗体水平与其皮肤、口腔黏膜损害严重程度的相关性,同时对间接免疫荧光(IIF)检测的天疱疮抗体滴度与治疗中使用皮质类固醇控制剂量的相关性进行分析。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定55例天疱疮患者血清中抗Dsg1和抗Dsg3抗体水平。结果:抗Dsg1抗体水平与患者皮肤损害严重程度有显著相关性(P<0.01),抗Dsg3抗体水平与口腔黏膜损害严重程度有显著相关性(P<0.01)。天疱疮患者血清IIF滴度与抗Dsg1抗体水平相关(P<0.01),寻常型天疱疮患者IIF滴度与抗Dsg1和抗Dsg3抗体水平均有相关性(P分别<0.01和<0.05)。寻常型天疱疮患者皮质类固醇控制剂量与抗Dsg1抗体水平和IIF滴度显著相关(P<0.05)。结论:ELISA方法检测天疱疮患者抗Dsg1和抗Dsg3抗体对天疱疮的临床诊断、分型、衡量口腔黏膜和皮肤损害严重程度具有一定意义。

桥粒斑蛋白Ⅱ在各种上皮组织中的表达

桥粒斑蛋白Ⅱ（ｄｅｓｍｏｐｌａｋｉｎⅡ，ＤＰⅡ）是桥粒的主要蛋白成分之一，起连接细胞内中间丝和桥粒的作用。本文用研制的抗ＤＰⅡ单克隆抗体及免疫组织化学方法，观察ＤＰⅡ在牛、猪、猴、人各种上皮组织和非上皮组织中的表达。结果显示：ＤＰⅡ表达于牛、猪、猴、人的除甲状腺滤泡上皮外的所有被检上皮中，包括复层上皮、单层上皮、假复层上皮和移行上皮。阳性染色点大部分分布于细胞交界面上，少数弥散到细胞浆中。在鳞状上皮细胞的分化过程中，ＤＰⅡ的分布随桥粒的合成和降解而变化。ＤＰⅡ不表达于牛、猪、猴、人的非上皮组织中。上述结果表明，ＤＰⅡ抗原具有种属交叉性；ＤＰⅡ虽然不存在于所有桥粒中，但仍是一种有用的上皮组织标记物。本文还讨论了鳞状上皮中ＤＰⅡ分布与桥粒代谢的关系。

皮肤基底细胞癌组织中桥粒芯糖蛋白1+2表达的研究

目的:探讨皮肤基底细胞癌中桥粒芯糖蛋白1+2的表达。方法:采用免疫组化染色方法检测桥粒芯糖蛋白1+2在24例皮肤基底细胞癌皮损中的表达情况,并以8份正常组织作对照。结果:桥粒芯糖蛋白1+2在正常皮肤表皮细胞间表达较强,而皮肤基底细胞癌组织中表达显著减弱或无表达。结论:桥粒芯糖蛋白1+2可能在皮肤基底细胞癌的发生中起一定作用。