MCI和AD病人BIN1基因多态性与情景记忆能力关系

目的观察轻度认知功能障碍(MCI)、阿尔茨海默病(AD)病人情景记忆编码和提取成绩的变化,以及这种变化与桥连整合蛋白1(BIN1)基因多态性的关联。方法健康查体者(NC组)209例,MCI病人(MCI组)119例,AD病人(AD组)66例,应用情景记忆编码及提取测试方法,对各组情景记忆编码及提取成绩和反应时间进行检测;应用限制性片段长度多态性检测方法,检测BIN1基因的多态性,分析各组之间基因多态性分布的特点,以及其与情景记忆成绩的关系。结果 MCI组和AD组编码正确率低于NC组,差异有显著性(F=25.50,q=4.48、6.88,P<0.05),AD组低于MCI组,差异有显著性(q=2.63,P<0.05)。MCI组和AD组提取正确率低于NC组,差异有显著性(F=66.80,q=6.90、11.20,P<0.05),AD组低于MCI组,差异有显著性(q=4.79,P<0.05)。MCI组和AD组编码反应时间长于NC组,差异有显著性(F=37.10,q=5.43、8.41,P<0.05),AD组长于MCI组,差异有显著性(q=4.39,P<0.05)。MCI组和AD组提取反应时间较NC组延长,差异有显著性(F=80.74,q=4.48、6.88,P<0.05),AD组较MCI组延长,差异有显著性(q=2.63,P<0.05)。3组之间BIN1基因的CC、TT、CT基因型及C和T等位基因分布频率差异无显著性(P>0.05),3组BIN1不同基因型间情景记忆编码及提取成绩差异均无显著性(P>0.05)。结论 BIN1基因多态性与MCI、AD发病无显著性关联,BIN1的不同基因型对MCI及AD病人的情景记忆编码、提取成绩无影响。

BIN1基因对阿尔茨海默病细胞模型Tau磷酸化及p38MAPK/NF-κB通路的影响

目的:探讨BIN1基因对AD细胞模型Tau磷酸化及p38MAPK/NF-κB通路的影响。方法:①构建BIN1过表达质粒与BIN1的小干扰RNA(siRNA),qPCR检测BIN1表达效果,选取效果最佳片段转染PC12细胞。②通过Aβ25-35诱导转染的PC12细胞建立AD细胞模型,利用qPCR方法检测Tau和p-Tau的mRNA转录水平,MTT法及Caspase3活性检测判断AD模型是否建立成功。③实验分为4组:空白组,AD模型组,过表达组,siRNA组。④Westernblot法检测各组细胞BIN1表达水平及Tau、磷酸化Tau(p-Tau,Ser396位点)、p38MAPK、核因子κB(NF-κB)蛋白的表达;⑤生化试剂盒检测各组细胞上清中一氧化氮(NO)水平;ELISA法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β等炎性因子表达。结果:①BIN1过表达质粒显著上调BIN1的转录水平(P<0.01),siRNA明显下调BIN1的转录水平表达(P<0.01)。②MTT实验结果显示,AD模型组细胞存活率较空白组显著下降(P<0.01);Caspase3活性检测结果显示,AD模型组细胞Caspase3活性较空白组显著增加(P<0.01)。③Westernblot检测结果显示,BIN1在AD模型组、过表达组中表达明显高于空白组(P<0.01),在siRNA组中表达明显低于空白组(P<0.01);空白组、siRNA组、AD模型组、过表达组中Tau、p-Tau(Ser396)蛋白表达依次增多,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。④与AD模型组相比较,过表达组中p38MAPK和NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),siRNA组中p38MAPK和NF-κB蛋白水平明显降低(P<0.05)。⑤空白组、siRNA组、AD模型组、过表达组中IL-1β、TNF-α、NO水平依次增多,单因素方差分析及组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:BIN1可能通过影响p38MAPK/NF-κB信号通路参与了tau蛋白的异常磷酸化过程,导致AD病程持续发展。