桦褐孔菌菌丝体发酵产活性多糖研究

本文通过液体深层发酵培养桦褐孔菌菌丝体的方式,以胞内和胞外多糖产量以及发酵代谢产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为指标,对发酵培养基营养成分和培养条件进行了单因素优化研究。经过优化的发酵培养基营养组成为:葡萄糖20g/L、牛肉膏4 g/L、K_(2)HPO_(4)1g/L、无水MgSO_(4)·1g/L、MnSO_(4)·H_(2)O 0.1g/L。桦褐孔菌菌丝体在优化后培养基中产生的发酵液对α-葡萄糖苷酶的抑制率为67.08%,是未经优化的4.5倍。

基于代谢组学研究桦褐孔菌多糖对高脂血症大鼠的降血脂作用

该文研究桦褐孔菌多糖(Inonotus obliquus polysaccharides,IOP)对高脂血症大鼠肝组织内源代谢物的影响,探讨桦褐孔菌多糖降血脂的机制。通过高脂饮食诱导建立高脂血症大鼠模型,检测大鼠血清中相关指标含量,利用高效液相色谱串联高分辨率质谱仪在正离子与负离子两种模式下,结合生物信息分析进行质谱数据解读,筛选桦褐孔菌多糖对高脂血症大鼠肝脏作用的差异代谢物,分析其可能涉及的代谢通路。结果表明:模型组(model group,MG)大鼠体质量增长较快,磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)组与桦褐孔菌多糖(inonotus obliquus polysaccharide,IOP)组大鼠体质量增长趋势相近;血清生化指标结果表明,与MG相比,IOP使大鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平极显著降低(p<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平极显著升高(p<0.01);肝脏代谢组学结果表明,与MG组相比,IOP组大鼠肝组织中脱氧胆酸、17-羟基亚麻酸、12,13-二羟基丙酮等16种代谢物发生显著变化,涉及代谢通路为核黄素代谢、亚油酸代谢、不饱和脂肪酸生物合成以及初级胆汁酸生物合成。基于代谢组学结果表明桦褐孔菌多糖对高脂血症大鼠有一定干预作用,可能与核黄素代谢、亚油酸代谢、脂肪酸生物合成以及胆汁酸生物合成有关。

桦褐孔菌总多糖的含量测定及不同部位含量比较

目的:评价桦褐孔菌药材质量,建立桦褐孔菌药材总多糖含量测定方法,并比较桦褐孔菌不同部位中总多糖含量的差异。方法:采用紫外-可见分光光度法测定桦褐孔菌中总多糖的含量,并对桦褐孔菌药材黑褐色外壳和内部黄色菌肉中总多糖含量进行比较。结果:无水葡萄糖质量浓度在18.03~108.19μg/mL范围内,线性关系良好(r=0.999 1);总多糖含量测定精密度、重复性、稳定性的RSD均小于3%(n=6),平均加样回收率为100.97%(RSD=2.86%);23批桦褐孔菌药材总多糖含量为24.71~90.33 mg/g,桦褐孔菌黑褐色外壳中的总多糖含量明显高于内部菌肉,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:所建立的含量测定方法简便,重复性、稳定性、可操作性良好,可为桦褐孔菌药材的质量控制和质量标准提高提供参考。

桦褐孔菌对2型糖尿病患者血糖与血脂的影响

目的 探讨桦褐孔菌提取物对2型糖尿病患者血糖与血脂的影响,为桦褐孔菌的临床应用提供理论依据。方法 将2020年4月—2022年12月就诊于河北医科大学第一医院的70例2型糖尿病患者随机分为实验组与对照组,每组35例。实验组在原治疗方案基础上给予桦褐孔菌提取物2 g口服,3次/d,对照组继续原治疗方案不变。观察比较2组患者治疗前及治疗12周、24周末的空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,记录2组不良反应发生情况。结果 研究过程中,实验组因出现脑血管疾病退出1例,因对桦褐孔菌不耐受退出2例,因不能坚持随访退出2例;对照组因胃部不适退出1例,因不能坚持随访退出2例。2组患者治疗12周、24周末FPG、2hPG、HbA1c、TG、TC、LDL-C水平均较治疗前显著下降(P均<0.05),但2组治疗12周末各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05);治疗24周末,实验组TG、TC、LDL-C水平均明显低于对照组(P均<0.05),其余指标组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。2组不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 桦褐孔菌可安全有效改善2型糖尿病患者血脂,但对于2型糖尿病患者血糖未见明显影响。

桦褐孔菌发酵豆乳的工艺探究及品质分析

为开发出一种新型桦褐孔菌发酵豆乳饮料,采用液体发酵技术,以东北黄豆为原料,以桦褐孔菌为发酵剂研制发酵型功能性豆乳饮料。以桦褐孔菌发酵豆乳多糖含量作为指标,采用单因素试验及响应面法对桦褐孔菌豆乳发酵工艺进行优化。结果表明:桦褐孔菌豆乳的最佳发酵工艺条件为接种量6.3%、豆浆添加量119 mL、发酵温度28℃、发酵时间4 d,测得多糖含量4.55μg/mL。发酵后饮料添加5%蔗糖、0.10%乳酸和2.00%的蜂蜜可明显提高产品适口性和品质。

桦褐孔菌提取物对黄曲霉素B_(1)暴露小鼠肝损伤的缓解作用

[目的]探究桦褐孔菌提取物(IOE)对黄曲霉毒素B1(AFB_(1))暴露小鼠肝损伤的保护作用及机制。[方法]选取30只6周龄、体重相近的SPF级雄性C57BL/6小鼠,随机分为5组,对照组连续灌胃蒸馏水10 d;AFB_(1)组第1~7天连续灌胃蒸馏水,第8~10天连续灌胃2 mg/kg AFB_(1);不同浓度IOE组第1~7天分别连续灌胃25、50和100 mg/kg IOE,第8~10天各组均连续灌胃2 mg/kg AFB_(1),灌胃剂量均为0.2 mL,每天1次。试验结束后对小鼠称重并采集血液、肝脏组织,统计肝脏指数;通过苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理变化;利用流式细胞仪分析肝脏细胞凋亡情况。通过细胞毒性试验,筛选AFB_(1)诱导AML12细胞损伤最适条件,并以此建立肝损伤模型,给予不同浓度IOE进行干预,利用CCK-8法测定细胞活力,确定IOE防治AFB_(1)诱导AML12细胞损伤的剂量范围。使用ELISA法检测血清和细胞中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测肝脏和AML12细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达量;采用Western blotting检测肝脏和AML12细胞中NLRP3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。[结果]与对照组相比,AFB_(1)组肝细胞排列紊乱、细胞肿胀,细胞凋亡率极显著升高(P<0.01);血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均极显著升高(P<0.01);肝脏中TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因表达量均极显著升高,Bcl-2基因表达量极显著降低(P<0.01);NLRP3和Bax蛋白水平极显著升高,Bcl-2蛋白水平极显著降低(P<0.01)。与AFB_(1)组相比,不同浓度IOE组小鼠炎性细胞浸润减少,细胞排列整齐,细胞凋亡率极显著降低(P<0.01);血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量极显著降低(P<0.01);肝脏TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因mRNA表达量极显著降低,Bcl-2基因表达量极显著升高(P<0.01);NLRP3和Bax蛋白水平均极显著降低,Bcl-2蛋白水平极显著升高(P<0.01)。细胞毒性试验结果显示,AFB_(1)诱导AML12细胞损伤最适条件为10μg/mL AFB_(1)作用24 h, IOE防治AFB_(1)诱导AML12细胞损伤的浓度梯度为1.5、3、6μg/mL。体外试验结果显示,AML12细胞中各炎性因子分泌、凋亡相关基因及蛋白表达量变化趋势与体内试验结果均一致。[结论]IOE可通过调节NLRP3、Bax和Bcl-2表达抑制炎性因子分泌,降低细胞凋亡,进而缓解AFB_(1)暴露引起的小鼠肝脏损伤。

桦褐孔菌品质鉴定及抗氧化活性研究

目的确定桦褐孔菌多糖的最佳提取工艺,并对桦褐孔菌多糖的抗氧化活性进行评价。方法应用水提法、超声法、微波法和酶法分别对桦褐孔菌多糖进行3次提取;以VC为对照,测定桦褐孔菌多糖对FRAP、DPPH·、·OH和ABTS·的还原能力。结果超声法在料液比m(g)∶V(mL)=1∶20、超声功率400 W、提取温度80℃、提取时间90 min时,多糖提取率最高,为10.35%;抗氧化活性研究结果显示,当桦褐孔菌的多糖浓度为400μg/mL时,其总抗氧化能力相当于244.04μmol/L的FeSO 4,对DPPH·的清除率较弱,对·OH和ABTS·的清除率均可达80%以上。结论超声法提取桦褐孔菌多糖效果最好,其抗氧化活性较高。

桦褐孔菌抗糖尿病的研究进展

糖尿病的特征为高血糖,是一种严重危害身体健康并降低生活质量的代谢疾病。近年来糖尿病患病人数不断增加,有关糖尿病预防和治疗药物的研发和应用越来越多。桦褐孔菌是一种可食用的真菌,具备多种生物学功能,在降血糖方面效果尤其显著。但桦褐孔菌抗糖尿病作用机制复杂多样,仍需要探索和总结。现将对桦褐孔菌降血糖的物质组成以及可能的相关作用机制进行阐述,以期为桦褐孔菌用于糖尿病预防和治疗及新药研发提供思路。

基于肝脏代谢组学探讨桦褐孔菌醇提物肝损伤机制

目的利用肝脏代谢组学技术,探寻桦褐孔菌醇提物对大鼠肝损伤的潜在作用机制。方法将SD大鼠分为对照组、桦褐孔菌醇提物高剂量组(2.0 g·kg^(-1))、中剂量组(1.0 g·kg^(-1))、低剂量组(0.5 g·kg^(-1))。每日灌胃给药1次,连续给药12周。采用超高液相色谱-飞行时间串联质谱仪对各组大鼠肝脏进行代谢组学分析,辅以生化分析和肝脏组织病理学检查。结果与对照组比较,低、中、高剂量组组织出现不同程度炎性细胞浸润,高剂量组动物肝脏出现中央静脉淤血、胆管增生和肝细胞肿胀等组织病理学变化。桦褐孔菌醇提物高剂量组及中剂量组可降低血清中白蛋白(ALB)含量,中剂量组可升高血清中谷丙转氨酶(ALT)含量,高剂量组血清中胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平上升。通过代谢组学研究发现,肝脏样本中鉴定出30个差异性生物标志物,参与了7个代谢通路调节,其中类固醇激素生物合成、初级胆汁酸生物合成是主要代谢途径。结论桦褐孔菌醇提物可能通过类固醇激素生物合成、初级胆汁酸生物合成变化,促进炎性因子生成,引起SD大鼠出现一定程度的肝损伤,可为进一步研究桦褐孔菌醇提物肝损伤机制提供参考。

桦褐孔菌产降血糖活性物质分批发酵动力学研究

该研究通过液体深层发酵培养桦褐孔菌菌丝体的方式,研究桦褐孔菌发酵产具有降血糖活性代谢产物过程中不同初始葡萄糖添加量与菌丝体生长、桦褐孔菌基质消耗及降血糖代谢产物形成之间随培养时间变化的规律并建立分批发酵动力学模型。结果表明,桦褐孔菌菌丝体生长及降血糖活性代谢产物的形成在以30 g/L葡萄糖为碳源时最佳,与20 g/L葡萄糖为碳源的初始条件相比生物量提高了10.87%,最大生长速率提高了11.9%,最大比生长速率提升了19.3%,降血糖活性代谢产物形成的最大速率以及最大比形成速率分别提升了27.9%、50.57%,此时发酵液对α-葡萄糖苷酶抑制率达到最高89.82%,且此时的最大基质消耗速率均高于其他组。

桦褐孔菌提取物对阿托伐他汀致小鼠肝损伤的保护作用

为了研究桦褐孔菌提取物(IOE)对阿托伐他汀(ATO)致小鼠药物性肝损伤的保护作用及机制,本试验将48只雄性昆明系小鼠随机分为6个组:对照组、模型组、IOE低、中、高剂量组[100、200、400 mg/(kg·bw)]和双环醇组[200 mg/(kg·bw)],采用ATO灌胃造模。除模型组外,IOE低、中、高剂量组给予不同浓度IOE,双环醇组给予双环醇作为阳性对照药物,连续灌胃2个月后,测定各组小鼠肝脏指数,检测肝功能、肝脏抗氧化应激和抗炎指标,观察各组小鼠的肝脏组织病理学特征,并检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达水平。结果显示,与对照组比较,模型组小鼠肝脏指数极显著升高(P<0.01);血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平极显著升高(P<0.01);肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著降低(P<0.01),丙二醛(MDA)含量极显著升高(P<0.01);c-Jun氨基末端激酶(JNK)和丝裂原活化蛋白激酶(p38)磷酸化水平极显著升高(P<0.01),B细胞淋巴瘤因子(Bcl-2)相关蛋白X(Bax)蛋白表达极显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达无差异(P>0.05)。与模型组比较,IOE高剂量组小鼠血清中ALT、AST、TNF-α、IL-1β和IL-6水平极显著降低(P<0.01),ALP水平显著下降(P<0.05);肝脏组织中SOD、CAT和GSH-Px活性极显著升高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.05)且具有剂量依赖性;JNK和p38磷酸化水平极显著降低(P<0.01),Bax蛋白表达极显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达无差异(P>0.05);与模型组相比,IOE低、中、高剂量组和双环醇组小鼠肝脏病理损伤明显减轻。结果表明,IOE对ATO致小鼠药物性肝损伤具有保护作用,其机制可能与提高体内抗氧化酶活性、抑制炎症和细胞凋亡以及激活MAPK信号通路有关。本试验结果可为预防和治疗临床长期服用ATO产生的肝毒性提供参考依据。

桦褐孔菌口服佐剂对禽类疫苗的体液免疫增强作用研究

为了明确桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation product,IOFP)作为禽类疫苗佐剂的适用性,选择商品化禽流感灭活疫苗和鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗分别免疫SPF鸡和SPF鸭,并饲喂含0.8%IOFP的饲粮,同时设置饲喂商品化饲粮的对照组。在免疫后不同时间点采集鸡和鸭的外周血,分离血清后分别测定禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)特异性血凝抑制(hemagglutinin inhibition,HI)抗体、鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)特异性抗体及二者中和抗体效价。使用统计学方法评价IOFP对机体体液免疫反应的影响。鸭免疫后28 d使用DTMUV强毒株攻毒,持续检测泄殖腔排毒量,以确定IOFP对DTMUV排毒量的影响。结果显示,IOFP作为口服佐剂能够显著提升AIV、DTMUV疫苗抗体和中和抗体水平,特别是对免疫早期抗体的改善效果尤为显著。此外,添加IOFP还能够减少DTMUV的排毒量,缩短排毒时间。由此可见,IOFP是一种禽类病毒性疫苗普遍适用的口服佐剂,对于缩短免疫“空窗期”、提升疫苗保护效果具有较好的改善作用。

桦褐孔菌黄酮对糖尿病肾病小鼠的治疗作用研究

目的:研究桦褐孔菌黄酮对糖尿病肾病小鼠的治疗作用。方法:取50只4周龄C57BL/6小鼠,随机抽取6只为正常对照组,其余小鼠以链脲佐菌素(STZ)联合高糖、高脂饲料喂养9周,建立糖尿病肾病模型,建模成功后取30只随机分为模型组、阳性对照组(缬沙坦20 mg/kg)和桦褐孔菌黄酮低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组,每组6只。连续灌胃给药6周,6周后,观察小鼠免疫功能的变化。结果:与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠中骨髓来源的树突状细胞及其上清液中分泌的外泌体表面MHC-Ⅱ、CD86、CD54与CD80等分子的表达均显著降低(P<0.01),脾中CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞及其分泌的IFN-γ因子数量均减少(P<0.01)。经治疗后,各组小鼠细胞及外泌体表面分子MHC-Ⅱ、CD86、CD54、CD80的表达均明显升高(P<0.05,P<0.01),CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞及IFN-γ的数量也不同程度增加(P<0.05,P<0.01)。结论:桦褐孔菌黄酮可以提高糖尿病肾病小鼠的免疫功能,对疾病有较好的治疗效果且安全性较高。

斑褐孔菌多糖的分离纯化及结构表征

目的对从斑褐孔菌中分离纯化出的均一酸性多糖BHP90-3L进行结构解析和表征。方法采用DEAE-琼脂糖凝胶、Sephadex G-75等柱色谱,对斑褐孔菌多糖进行分离纯化。运用单糖组成分析、红外分析、甲基化分析和核磁共振图谱分析等方法,对分离得到的斑褐孔菌酸性多糖BHP90-3L的绝对分子量(M_(w))、单糖组成、糖苷键类型、糖苷键连接方式和构象等进行研究,确定其结构。结果BHP90-3L是一种分子量为9.489×10^(3) Da的酸性杂多糖,主要含有甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖,各单糖组成摩尔比为2.78∶1.72∶7.17∶1.00;由GC-MS和核磁结果推测BHP90-3L主链连接方式是→6)-α-D-Man p-(1→、→3)-β-D-Glc p-(1→、→3)-β-D-Glc p A-(1→、→3,4)-α-D-Man p-(1→、→6)-α-D-Man p-(1→,其中→3)-β-D-Glc p-(1→、→3)-β-D-Glc p A-(1→均具有重复单元,侧链仅有β-D-Gal p-(1→。刚果红试验表明BHP90-3L不具有三股螺旋结构。结论斑褐孔菌多糖BHP90-3L是从斑褐孔菌中分离得到的新的均一酸性多糖,对其结构的研究,为斑褐孔菌多糖的进一步开发利用提供参考依据。

复方桦褐孔菌咀嚼片的制备及对高血脂症小鼠降血脂作用

为研发一种以桦褐孔菌和山楂为原料药制备的咀嚼片,并对成品的降血脂作用进行验证。本研究采用单因素方法和响应面试验优化咀嚼片最优制备工艺,测定小鼠血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)的水平变化,判断咀嚼片降血脂作用。结果表明,最佳处方工艺为30%主药,42.48%淀粉,26%甘露醇,0.02%阿斯巴甜以及1.5%硬脂酸镁;60%乙醇为润湿剂,过14目筛制粒,65℃干燥35 min。制备所得的咀嚼片可显著降低TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平,复方桦褐孔菌咀嚼片可以显著改善高脂血症小鼠血脂水平,修复高脂饮食诱发的肝细胞损伤,具有明显的降血脂作用。

桦褐孔菌液态发酵的研究进展

桦褐孔菌(Inonotus obliquus)是一种名贵的药用真菌,含有多糖、多酚、三萜类、类固醇等多种生物活性成分。野生桦褐孔菌生长缓慢且稀少,较多研究结果表明,通过液态发酵所得桦褐孔菌与野生桦褐孔菌成分基本相似。本文综述了桦褐孔菌的发酵培养基优化,液态发酵条件,多糖、多酚物质、三萜类等生物活性物质的研究进展,为其液态发酵、发酵产物、生物活性的进一步研究及相关功能性产品的开发奠定基础。

桦褐孔菌提取物对4T1乳腺癌小鼠的抗肿瘤作用

目的探究桦褐孔菌提取物对4T1荷瘤小鼠的体内抗肿瘤效果及其机制方法60只BALB/c雌性小鼠,随机数字法分为6组:空白对照组,4T1荷瘤模型组,25mg/kg环磷酰胺阳性对照组,桦褐孔菌提取物1、2、4g/kg剂量组,每组10只。除空白对照组外,将4T1小鼠乳腺癌细胞接种于小鼠胸部脂肪垫处5d,建立4T1荷瘤小鼠动物模型。阳性对照组和桦褐孔菌提取物干预组每天灌胃给予受试物一次,空白对照组和模型组灌胃等量蒸馏水,连续给药21d。称量小鼠体重、瘤重,计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,免疫组化法检测细胞周期相关蛋白CyclinB1、CyclinD1、CDK4表达情况,并进行瘤体组织病理学观察。结果小鼠在接种乳腺癌细胞第5天,接种部位均可触摸到结节,表明造模成功。与模型组比较,桦褐孔菌提取物低、中(P<0.05)和高(P<0.01)剂量组小鼠瘤重均减轻,抑瘤率为16.0%~34.4%,且抑瘤率随着桦褐孔菌提取物剂量增加而逐渐增加;桦褐孔菌提取物各剂量组脾脏指数明显高于模型组(P<0.05);桦褐孔菌提取物各剂量组小鼠瘤体中细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1、CDK4的表达水平均下调,除低剂量组CDK4蛋白外,差异均有统计学意义(P<0.01),且随着桦褐孔菌提取物剂量的增加,周期蛋白的下调量也逐渐增加。病理分析表明桦褐孔菌提取物可抑制肿瘤细胞增殖,并导致肿瘤细胞发生坏死。结论桦褐孔菌提取物具有一定的抑制肿瘤生长作用,作用机制可能与抑制细胞周期蛋白表达相关。

基于蛋白质组学技术探讨桦褐孔菌提取物治疗克罗恩病的作用机制

目的采用蛋白质组学技术研究桦褐孔菌提取物治疗克罗恩病的作用机制。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导建立克罗恩病(Crohn’s disease,CD)模型。48只SD雄性大鼠,随机分为对照组、模型组、桦褐孔菌提取物低(200 mg/kg)、中(400 mg/kg)、高(800 mg/kg)剂量组和阳性对照组(美沙拉嗪,225 mg/kg)。药物干预1周后,进行疾病活动指数(DAI)评分和结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;ELISA检测大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子水平。取对照组、模型组及桦褐孔菌提取物高剂量组的结肠组织,采用非标记蛋白质组学分析鉴定各组大鼠结肠组织中的蛋白,并对其进行生物信息学分析。最后采用Western blot和RT-qPCR对关键蛋白进行验证。结果与模型组相比,桦褐孔菌提取物中、高剂量组的DAI、CMDI及HE染色评分显著降低(P<0.05或P<0.01),其血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量也显著降低(P<0.05或P<0.01)。蛋白质组学显示,桦褐孔菌提取物高剂量组与模型组间有199个差异蛋白(DEPs),其中63个DEPs与CD相关,生物信息学结果显示63个DEPs要涉及NOD样受体信号通路、钙信号通路和坏死性凋亡等多条通路。Western blot和RT-qPCR检测各组大鼠结肠组织中Vdac1和Trpv2的蛋白和mRNA水平,与蛋白质组学结果一致。结论桦褐孔菌提取物可能通过干预Vdac1、Trpv2的表达,调节NOD样受体信号通路、钙信号通路和坏死性凋亡,从而达到治疗CD的效果。

桦褐孔菌的生药学鉴别研究

目的研究中药材桦褐孔菌的生药鉴别方法及特征。方法从东北原产地采集样品,采用来源、分子生物学、性状、显微等鉴定法和HPLC法对桦褐孔菌药材和其非纯粹菌体、伪品进行研究。结果桦褐孔菌外形为瘤状团块,微观构造为菌丝紧密交联状,药用部位为菌核,而非当前中药材标准所述的“子实体”。桦褐孔菌药材中偶见极少量的菌管组织与菌肉。管孔类圆形,直径130~190μm,破裂;管壁构造特别,由纵向排列的直径为2~5~8μm的小包室构成。非纯粹菌体系被菌丝渗透已腐朽的宿主木质部,所含栓菌酸和麦角甾醇含量显著低于纯粹菌核(P<0.05)。桦褐孔菌与伪品树瘤的显微结构和HPLC指纹图谱区别明显。结论所用方法能对桦褐孔菌药材进行真伪鉴别以及药材品质辨识。

桦褐孔菌菌丝体多糖提取工艺优化及其降血糖能力测定

以桦褐孔菌(Inonotus obliquus)菌丝体为试验材料,多糖提取率为评价指标,采用Box-Behnken响应面法从提取时间、液料比和提取温度3个因素优化桦褐孔菌菌丝体多糖的提取工艺,并研究粗多糖对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的影响。结果表明,桦褐孔菌菌丝体多糖的最佳提取条件为提取温度97℃、液料比51∶1(mL/g)、提取时间1.9 h、提取3次,在此条件下多糖提取率为(8.02±0.45)%。体外酶抑制试验表明,桦褐孔菌菌丝体多糖浓度为10 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率分别为(77.64±1.78)%和(39.20±1.17)%,二者的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为3.07 mg/mL和17.20 mg/mL,对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用明显,表明其具有较好的降血糖能力。