桦褐孔菌石油醚提取物的抗肿瘤作用研究

目的探讨桦褐孔菌石油醚提取物(Inonotus Obliquus Petroleum ether Extracts,IOPE)抗肿瘤作用。方法体外实验采用MTT法测定了IOPE对Hela肿瘤细胞的抑制率。体内实验,将接种S180肿瘤细胞后的小鼠随机分为5组,每组10只,给予IOPE 10d,停药后24 h处死动物,称体重,摘出肿瘤,测定肿瘤抑制率、脾指数、胸腺指数、淋巴细胞转化率、NK细胞活性。结果在体外,IOPE对Hela肿瘤细胞具有毒性作用;体内实验表明中大剂量IOPE对荷瘤小鼠肿瘤生长具有抑制作用,可增加脾指数及胸腺指数,对体外淋巴细胞转化功能和NK细胞活性亦有增强作用。结论桦褐孔菌石油醚提取物具有明显的抗肿瘤活性。

桦褐孔菌提取物对黄曲霉素B_(1)暴露小鼠肝损伤的缓解作用

[目的]探究桦褐孔菌提取物(IOE)对黄曲霉毒素B1(AFB_(1))暴露小鼠肝损伤的保护作用及机制。[方法]选取30只6周龄、体重相近的SPF级雄性C57BL/6小鼠,随机分为5组,对照组连续灌胃蒸馏水10 d;AFB_(1)组第1~7天连续灌胃蒸馏水,第8~10天连续灌胃2 mg/kg AFB_(1);不同浓度IOE组第1~7天分别连续灌胃25、50和100 mg/kg IOE,第8~10天各组均连续灌胃2 mg/kg AFB_(1),灌胃剂量均为0.2 mL,每天1次。试验结束后对小鼠称重并采集血液、肝脏组织,统计肝脏指数;通过苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理变化;利用流式细胞仪分析肝脏细胞凋亡情况。通过细胞毒性试验,筛选AFB_(1)诱导AML12细胞损伤最适条件,并以此建立肝损伤模型,给予不同浓度IOE进行干预,利用CCK-8法测定细胞活力,确定IOE防治AFB_(1)诱导AML12细胞损伤的剂量范围。使用ELISA法检测血清和细胞中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测肝脏和AML12细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达量;采用Western blotting检测肝脏和AML12细胞中NLRP3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。[结果]与对照组相比,AFB_(1)组肝细胞排列紊乱、细胞肿胀,细胞凋亡率极显著升高(P<0.01);血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均极显著升高(P<0.01);肝脏中TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因表达量均极显著升高,Bcl-2基因表达量极显著降低(P<0.01);NLRP3和Bax蛋白水平极显著升高,Bcl-2蛋白水平极显著降低(P<0.01)。与AFB_(1)组相比,不同浓度IOE组小鼠炎性细胞浸润减少,细胞排列整齐,细胞凋亡率极显著降低(P<0.01);血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量极显著降低(P<0.01);肝脏TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3和Bax基因mRNA表达量极显著降低,Bcl-2基因表达量极显著升高(P<0.01);NLRP3和Bax蛋白水平均极显著降低,Bcl-2蛋白水平极显著升高(P<0.01)。细胞毒性试验结果显示,AFB_(1)诱导AML12细胞损伤最适条件为10μg/mL AFB_(1)作用24 h, IOE防治AFB_(1)诱导AML12细胞损伤的浓度梯度为1.5、3、6μg/mL。体外试验结果显示,AML12细胞中各炎性因子分泌、凋亡相关基因及蛋白表达量变化趋势与体内试验结果均一致。[结论]IOE可通过调节NLRP3、Bax和Bcl-2表达抑制炎性因子分泌,降低细胞凋亡,进而缓解AFB_(1)暴露引起的小鼠肝脏损伤。

基于蛋白质组学技术探讨桦褐孔菌提取物治疗克罗恩病的作用机制

目的采用蛋白质组学技术研究桦褐孔菌提取物治疗克罗恩病的作用机制。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导建立克罗恩病(Crohn’s disease,CD)模型。48只SD雄性大鼠,随机分为对照组、模型组、桦褐孔菌提取物低(200 mg/kg)、中(400 mg/kg)、高(800 mg/kg)剂量组和阳性对照组(美沙拉嗪,225 mg/kg)。药物干预1周后,进行疾病活动指数(DAI)评分和结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;ELISA检测大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子水平。取对照组、模型组及桦褐孔菌提取物高剂量组的结肠组织,采用非标记蛋白质组学分析鉴定各组大鼠结肠组织中的蛋白,并对其进行生物信息学分析。最后采用Western blot和RT-qPCR对关键蛋白进行验证。结果与模型组相比,桦褐孔菌提取物中、高剂量组的DAI、CMDI及HE染色评分显著降低(P<0.05或P<0.01),其血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量也显著降低(P<0.05或P<0.01)。蛋白质组学显示,桦褐孔菌提取物高剂量组与模型组间有199个差异蛋白(DEPs),其中63个DEPs与CD相关,生物信息学结果显示63个DEPs要涉及NOD样受体信号通路、钙信号通路和坏死性凋亡等多条通路。Western blot和RT-qPCR检测各组大鼠结肠组织中Vdac1和Trpv2的蛋白和mRNA水平,与蛋白质组学结果一致。结论桦褐孔菌提取物可能通过干预Vdac1、Trpv2的表达,调节NOD样受体信号通路、钙信号通路和坏死性凋亡,从而达到治疗CD的效果。

桦褐孔菌提取物介导LXRs信号通路调控肝纤维化

目的探究桦褐孔菌提取物(Inonotus obliquus extract,IOE)介导肝X受体(liver X receptors,LXRs)信号通路调控肝纤维化。方法采用腹腔注射硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)建立小鼠肝纤维化模型。同时,通过口服灌胃给予不同浓度IOE及水飞蓟素连续干预4周。末次给药后,小鼠安乐死收集肝脏和血清。检测不同浓度IOE对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)存活率的影响。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)10μg·L^(-1)刺激HSCs 2 h,给予IOE(0、5、10、25μmol·L^(-1))处理6 h。测定小鼠血清谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,观察肝脏组织病理学改变,并通过Western blot和RT-PCR法检测小鼠肝脏和活化HSCs中α-SMA、collagenⅠ、炎症因子以及LXRα/β的蛋白和mRNA表达。结果IOE可以明显降低TAA诱导的肝纤维化小鼠血清转氨酶水平,改善肝脏组织病理学变化。IOE能够减少小鼠肝组织和活化HSCs中ECM和胶原沉积,抑制IL-6、Caspase-1的表达,并明显上调LXRα/β的蛋白表达。结论IOE能够介导激活LXRs信号通路,调控细胞外基质和炎症因子的产生,有效逆转肝纤维化的发生和发展。

桦褐孔菌乙醇提取物对植物病原真菌的抑制

为探讨桦褐孔菌乙醇提取物对植物病原真菌的抑制作用,采用醇提法获得桦褐孔菌乙醇提取物,通过观察稻瘟病的稻梨孢菌孢子萌发和菌丝形态结构及小麦根腐平脐孺孢和番茄灰霉灰葡萄球菌的平板对峙实验结果,研究桦褐孔菌乙醇提取物抗病原真菌活性。结果表明,用醇提法获得的桦褐孔菌乙醇提取物得率为7.35%;乙醇提取物浓度为3.125 mg·m L-1时,对稻瘟病菌孢子萌发的抑制率为94%,浓度高于6.25 mg·m L-1时,抑制率均为100%;在乙醇提取物的作用下,稻瘟病菌菌丝出现粗细不均、结构松散、细胞壁加厚等现象;小麦根腐平脐孺孢和番茄灰霉灰葡萄球菌的平板对峙实验均出现较大的抑菌圈。本研究为深入探讨桦褐孔菌乙醇提取物抗真菌病害的机制及其应用奠定了基础。

桦褐孔菌提取物对人肝癌HePG_2细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨桦褐孔菌提取物在体外对人肝癌HePG2细胞株增殖和凋亡的影响。方法:桦褐孔菌提取物10、20、40、60、80μg/ml在24、48、72h处理人肝癌HePG2细胞后,采用MTT法检测细胞生长的抑制率,计算各时间点IC50;0、10、40μg/ml桦褐孔菌提取物作用HePG2细胞24h后,Hoechst 33528染色法观察细胞核的形态学变化;0、20、60μg/ml桦褐孔菌提取物处理HePG2细胞24h后,流式细胞仪检测桦褐孔菌提取物对人肝癌HePG2细胞周期的影响,Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡的作用。结果:桦褐孔菌提取物能时间和浓度依赖性的抑制人肝癌HePG2细胞的增殖,与阴性对照组比较,抑制率有显著差异;桦褐孔菌干预后的HePG2细胞染色后观察到核质浓缩,核碎裂,凋亡小体形成,呈典型的凋亡变化,且呈浓度依赖性;G2/M期细胞数量增加,而G0/G1期细胞数明显减少,有凋亡峰形成,与0μmol/L组相比,有显著差异,且呈浓度依赖性。双染法检测发现与0μmol/L组相比,细胞凋亡率明显增加,并呈浓度依赖性。结论桦褐孔菌提取物可能是通过使肝癌细胞滞留在G2/M期及诱导细胞凋亡等机制,从而抑制肝癌细胞的增殖。

桦褐孔菌提取物对胃癌MGC-803细胞株的抗增殖与诱导凋亡作用

探讨了桦褐孔菌提取物对胃癌MGC - 80 3细胞株的抗增殖、诱导凋亡作用及对凋亡相关基因表达的影响。MTT比色法结果显示 ,桦褐孔菌提取物在 0 .5～ 16 0 μg/mL范围内 (其IC50 为 4 μg/mL)对胃癌MGC- 80 3细胞株均有抑制作用 ,并表现出浓度依赖性关系 ;凋亡形态学观察结果 ,药物浓度 2 μg/mL ,作用时间 12～ 2 4h后 ,细胞核染色质固缩并凝结成块 ,聚集在核膜周边 ,凋亡小体形成 ;TUNEL法检测结果 ,不同浓度药物均诱导胃癌MGC - 80 3细胞株凋亡 ,细胞凋亡率随药物浓度增加而上升 ,显示明显的量效关系。Ki- 6 7抗原检测结果 ,不同浓度药物均抑制胃癌MGC - 80 3细胞株增殖 ,表现出浓度、时间依赖性关系 ;2μg/mL桦褐孔菌提取物作用胃癌MGC - 80 3细胞株 4 8h之后 ,明显下调Bcl - 2基因蛋白表达。因此 ,通过此项研究可得出 ,桦褐孔菌提取物对胃癌MGC - 80 3细胞株有抗增殖作用和诱导凋亡作用 ,其凋亡的分子生物学机制可能与下调凋亡抑制基因Bcl 2表达有一定关系。

桦褐孔菌的不同提取物对胃癌BGC-823细胞株生长抑制作用的体外观察

目的研究桦褐孔菌不同提取物对人胃癌BGC-823细胞株生长的抑制作用。方法制备桦褐孔菌水提取物、石油醚提取物(醚提物)、乙酸乙酯提取物(酯提物)后,采用MTT法,测定3种提取物作用下的胃癌BGC-823细胞株生长的抑制作用。结果桦褐孔菌水提取物、醚提取物、酯提取物对胃癌BGC-823细胞株的生长均有抑制作用,终浓度在80 g/ml、48 h,体外最大抑制率分别达到51%、60%、62%。结论桦褐孔菌的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物对人胃癌BGC-823细胞株生长抑制作用高于水提取物。

不同浓度乙醇对桦褐孔菌提取物抗氧化活性的影响

以样品的总还原力、抗氧化能力、DPPH自由基清除能力为评价指标,研究了不同浓度的乙醇对桦褐孔菌提取物抗氧化活性的影响。结果表明:当乙醇浓度为65%时,桦褐孔菌提取物的抗氧化活性较强,其多酚含量和总还原力分别为(12.04±0.53)mg/g、(124.56±2.81)mg/g(维生素C相当量),FRAP值为(1.42±0.04)mmol/g(FeSO4.7 H2O相当量)。提取物浓度为400μg/mL时,DPPH自由基清除率为(78.05±3.41)%。

桦褐孔菌提取物对糖尿病大鼠生化指标的影响

探讨桦褐孔菌提取物对实验性糖尿病大鼠糖脂代谢和氧化应激水平的影响及作用机制。结果表明,桦褐孔菌提取物对STZ诱导的糖尿病大鼠具有降血糖、调脂、抗氧化应激、清除自由基以及改善受损肝功能的作用,其作用机制可能与多糖的降血糖作用和单宁酸的抗氧化清除自由基作用有关。

5种桦褐孔菌提取物对人肝癌细胞HePG2及SMMC7721增殖的影响

目的:探讨5种桦褐孔菌提取物对人肝癌细胞HePG2和SMMC7721细胞生长的抑制作用。方法:用桦褐孔菌水提醇沉物(HH1),石油醚萃取物(HH2)、乙酸乙酯萃取物(HH3)、正丁醇萃取物(HH4)及萃取后的水层物(HH5)的不同浓度10、20、40、60、80μg/mL在48h处理HePG2及SMMC7721细胞后,采用MTT法检测细胞生长的抑制率,计算各组IC50。结果:5种桦褐孔菌提取物均能浓度依赖性的抑制人肝癌HePG2及SMMC7721细胞生长。水提醇沉提取物与其他4种提取物作用于HePG2及SMMC7721的抑制率比较均有显著性差异(P<0.05;P<0.01),对于HePG2细胞,正丁醇萃取物的IC50大于80μg/mL,水提醇沉提取物与石油醚提取物的IC50比较无显著性差异,与其他2种提取物比较有显著性差异(P<0.01);对于SMMC7721细胞,正丁醇萃取物、乙酸乙酯萃取物及萃取后的水层物的IC50均大于80μg/mL,水提醇沉提取物与石油醚提取物的IC50比较无显著性差异。结论:水提醇沉提取物对人肝癌HePG2及SMMC7721的增值抑制作用略优于石油醚提取物,而显著优于其他3种提取物。

桦褐孔菌提取物对食用油脂的抗氧化效应研究

研究桦褐孔菌提取物(Inonotus obliquus extracts,IOE)对食用油脂(猪油和大豆油)氧化的抑制作用;此外,还将IOE与人工合成抗氧化剂对食用油脂的抗氧化能力进行比较。结果表明:IOE能够抑制食用油脂氧化,延长诱导期,增强抗氧化能力,并与其添加量成正比。IOE与人工合成抗氧化剂的抗氧化能力强弱顺序为0.04%IOE>0.02%TBHQ>0.02%IOE>0.02%PG>0.02%PA。因此,IOE可作为一种理想的天然抗氧化剂应用到食用油脂中。

1桦褐孔菌乙醇提取物抗肿瘤活性的实验研究

目的:研究桦褐孔菌乙醇提取物的肿瘤抑制作用。方法:取雄性昆明种小鼠40只,按体重随机分为提取物组(空白对照组、大、中、小剂量组),每组各为10只,空白对照组给予蒸馏水,其他组按剂量灌胃给药10d,停药后24h处死动物,称重量,摘出肿瘤,测定肿瘤抑制率、脾指数、胸腺指数。结果:实验表明,桦褐孔菌乙醇提取物对小鼠S180肉瘤的生长具有显著的抑制效果,其大、中、小剂量组的抑制率分别为67.36%,74.84%,41.66%。结论:桦褐孔菌乙醇提取物对小鼠S180肉瘤的生长具有明显的抑制作用。

辐照桦褐孔菌提取物抗氧化作用的研究

为了研究辐照对桦褐孔菌的抗氧化作用的影响,使用不同辐照剂量,即0 kGy、5 kGy、10 kGy、20 kGy和30 kGy的60Co-γ射线进行辐照处理,通过测定辐照桦褐孔菌提取物的总抗氧化能力、DPPH?清除能力、?OH清除能力和总还原力来研究辐照桦褐孔菌提取物的抗氧化作用。结果表明,不同辐照剂量的桦褐孔菌的总抗氧化能力之间存在一定的差异,20 kGy辐照处理的桦褐孔菌提取物的总抗氧化能力最高,但是,它显著低于维生素C的总抗氧化能力;在相同浓度下,不同辐照剂量的桦褐孔菌提取物的DPPH?和?OH清除能力存在显著差异;对于相同辐照剂量的样品,DPPH?清除能力和?OH清除能力随着样品的增加而显著增加,但均显著低于维生素C清除能力(p < 0.05);不同辐照剂量的桦褐孔菌提取物的总还原力存在波动,但均显著低于维生素C的总还原力。

桦褐孔菌抗氧化提取物体内抗氧化作用研究

研究桦褐孔菌抗氧化提取物(AEIO)的体内抗氧化作用,为桦褐孔菌资源及保健品的开发提供理论基础。将50只Balb/c种小鼠随机分为5组:正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。通过后颈背部皮下注射D-gal建立亚急性衰老模型,以灌胃方式注入AEIO,连续处理6周后检测各组小鼠血清、肝、脑组织中MDA含量、SOD、GSH-Px酶活性及TAOC。结果表明:AEIO可显著提高血清、肝及脑组织中的SOD、GSH-Px酶活性及TAOC值(P<0.05),显著降低血清、肝及脑组织中的MDA含量(P<0.05)。TAOC/MDA比值显示各剂量组均显著高于模型组。

桦褐孔菌提取物诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的研究

目的:探讨桦褐孔菌提取物对肿瘤细胞周期的影响及其抗癌的作用机制。方法:将不同浓度(20、40、80mg·L-1)桦褐孔菌提取物作用于人胃癌BGC-823细胞48h,用碘化丙啶染色法检测凋亡细胞和细胞周期分布。采用免疫细胞化学染色法检测药物处理前、后Ki-67抗原的表达。结果:3种浓度桦褐孔菌提取物处理48h后细胞凋亡率分别为11.57%、20.97%、31.22%,阻滞细胞周期于S期,并使Ki-67阳性表达率下降,且具有浓度依赖性。结论:桦褐孔菌提取物可抑制人胃癌BGC-823细胞的生长,细胞主要阻滞于S期,并能诱导部分细胞凋亡。

桦褐孔菌提取物对高尿酸血症大鼠影响的研究

目的:研究桦褐孔菌提取物对高尿酸血症大鼠的影响。方法:通过对雄性Wistar大鼠灌胃15 g/(kg.d)酵母膏,皮下注射200 mg/(kg.d)氧嗪酸钾诱导大鼠血尿酸升高。观察桦褐孔菌醇提物及多糖低、高剂量对大鼠的影响。每周尾静脉采血1次,测定血清中尿酸SUA含量。试验结束时大鼠股动脉取血,分离血清测定与高尿酸血症和肾损伤相关的血液生化指标。脏器称重(肝、肾、脾、心脏),计算脏器指数。结果:桦褐孔菌提取物可在不同程度上降低肾指数和肝指数。桦褐孔菌醇提物高剂量组极显著降低血清尿酸(SUA)值(P<0.01),醇提物低剂量组、多糖低剂量和多糖高剂量血清尿酸值显著降低(P<0.05)。桦褐孔菌醇提物高剂量与多糖高剂量组可显著降低血清黄嘌呤氧化酶(XOD)活力(P<0.05)。桦褐孔菌醇提物高剂量组可极显著降低血清肌酐(Cr)值(P<0.01)。多糖高剂量组可极显著降低血清尿素氮(BUN)值(P<0.01)。结论:桦褐孔菌提取物可降低高尿酸血症模型大鼠血清尿酸水平,减轻尿酸性肾损伤。

桦褐孔菌提取物体外抗肿瘤活性及对细胞周期的影响

目的研究桦褐孔菌提取物的抗肿瘤活性及对人乳腺癌MCF-7细胞周期的影响及其可能机制。方法使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测桦褐孔菌提取物对HepG2、A549、SGC-7901、HeLa和MCF-7细胞增殖的抑制作用并计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);选择抑制效果最好的MCF-7细胞株,观察其作用后细胞的形态学改变、细胞凋亡率和细胞周期的变化;并通过Western Blot实验检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、PCNA和NUSAP1的表达。结果桦褐孔菌提取物可有效抑制HepG2、A549、SGC-7901、HeLa和MCF-7细胞增殖,作用48 h后的IC50分别为2.34、3.71、2.24、2.27、0.59 mg/ml;桦褐孔菌提取物可引起MCF-7细胞显著的形态学改变;可诱导MCF-7细胞凋亡,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);并明显影响MCF-7细胞的细胞周期分布,使细胞阻滞于S期(P<0.01);桦褐孔菌提取物可抑制MCF-7细胞中Cyclin D1、CDK4、PCNA、NUSAP1蛋白的表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论桦褐孔菌提取物可抑制多种组织来源的肿瘤细胞增殖,其中对MCF-7细胞抑制效果最好,可以诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期达到抗肿瘤作用,可能是通过下调Cyclin D1、CDK4、PCNA和NUSAP1的蛋白表达来调控细胞周期,从而抑制肿瘤细胞过度增殖。本实验为桦褐孔菌提取物的药用开发提供新的方法和思路。

木蹄层孔菌子实体提取物对H22荷瘤小鼠体内抗肿瘤活性的影响

研究了木蹄层孔菌子实体的石油醚提取物、氯仿提取物、甲醇提取物对体内抑制肿瘤活性及对免疫功能的影响。建立H22荷瘤小鼠模型,观察木蹄层孔菌不同提取物对荷瘤小鼠的抑瘤效果,通过抑瘤率、免疫器官指数及生存时间的影响来评价不同提取物的活性。结果表明:木蹄层孔菌子实体的石油醚提取物、氯仿提取物、甲醇提取物均有一定的抑制肿瘤作用,其中石油醚提取物下层沉淀的抑制作用最显著,当质量分数为100 mg/kg时抑瘤率高达56.29%,接近阳性药的抑瘤率58.78%,可使小鼠的体质量、脾指数和胸腺指数增加,延长H22荷瘤小鼠的生存时间。木蹄层孔菌石油醚提取物下层沉淀在一定的剂量范围内,能较好地抑制小鼠肿瘤的生长,提高机体的免疫功能。