中心组合设计优化梅岭霉素发酵培养基

应用中心组合设计对梅岭霉素发酵培养基进行优化。通过部分因子实验对发酵培养基进行评估 ,确认玉米粉、淀粉和酵母粉是影响梅岭霉素发酵水平的关键因子 ,通过快速登高法搜索关键组分的适宜浓度范围。在此基础上 ,采用中心组合设计方法 ,基关键因子的数学模型 ,确定关键组分的最佳浓度与优化后的培养基并进行实验验证。经上述优化过程 ,梅岭霉素发酵单位从 5 1 3μg/ml提高至 2 31 8μg/ml。

通过获得链霉素抗性基因(str)突变株筛选梅岭霉素高产菌株

本文通过链霉素对梅岭霉素 (meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 41 80菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS四种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选到梅岭霉素高产菌株 80 5 .11 2 2 1,在摇瓶条件下 ,只产梅岭霉素不产南昌霉素 ,梅岭霉素活性效价达 15 0 0 μg/ml,比出发菌株NS 41 80的摇瓶发酵效价 85 5 μg/ml提高了 77.9%,该菌株连续传代六代进行摇瓶发酵 ,其F2 代和F3 代梅岭霉素发酵效价稳定 ,F4代至F6代随着传代数增加 ,其梅岭霉素发酵效价急速下降。通过EMS诱变剂量分别与抗药性突变率和链霉素抗性基因突变株产梅岭霉素产量的产势统计分析表明 ,菌株抗药性突变与产抗生素突变密切相关 ,产抗生素突变的EMS诱变剂量高于链霉素抗性基因突变诱变剂量。在 0 .0 3mol/L的EMS剂量作用下 ,菌株致死率为 99.43 %,而抗药性突变率为 0 .0 44 0 %,建立了梅岭霉素产生菌链霉素抗性基因突变筛选方法 ,为南昌链霉菌高产菌种选育研究作了有益的尝试 。

梅岭霉素生物学活性及其产生菌特性的研究Ⅱ梅岭霉素对畜禽消化道线虫驱虫活性的研究

为了探讨梅岭霉素对畜禽消化道线虫的驱虫活性，采用质量分数０．１％梅岭霉素散剂，按照０．３～０．８ｇ／ｋｇ（有效成份０．３～０．８ｍｇ／ｋｇ）体重的剂量一次性混饲，对猪、水牛、绵羊、警犬和鸡进行驱虫试验。试验结果证明梅岭霉素对畜禽消化道线虫有一分显著的驱虫作用。

铵离子对梅岭霉素生物合成的调控效应

通过考察不同浓度的硫酸铵对梅岭霉素生物合成的影响,证实在低浓度下,硫酸铵可以促进梅岭霉素的生物合成,当其浓度大于5mmol L时,菌丝生长和产物合成均受到抑制,而耗糖速率却随着铵离子的浓度增大而增大。在此基础上,进一步测定了与梅岭霉素生物合成和糖代谢过程密切相关的6种酶的活性变化,结果表明较高浓度的铵离子对6_磷酸葡萄糖脱氢酶、柠檬酸合成酶、琥珀酸脱氢酶以及脂肪酸合成酶的活性均表现出一定的促进作用,而对缬氨酸脱氢酶和甲基丙二酰CoA羧基转移酶的活性进行抑制,由此产生的结果一方面是HMP途径和TCA循环得到了加强,促进了菌体的初级代谢,另一方面则是梅岭霉素生物合成所需前体的来源受到限制。

梅岭霉素高产菌株链霉素抗性基因突变株筛选

通过链霉素对梅岭霉素 (Meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 41 80菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 4种不同剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,然后涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。并进一步筛选到梅岭霉素高产菌株 80 5 1 1 2 2 1 ,在摇瓶条件下 ,只产梅岭霉素不产南昌霉素 ,梅岭霉素活性单位达 1 ,52 1 μg/mL,比NS 41 80的摇瓶发酵单位 855μg/mL提高了 77 9% ,该菌株连续传 6代进行摇瓶发酵 ,其F2 代和F3 代发酵单位稳定 ,F4代至F6 代随着代数增加 ,梅岭霉素发酵单位急速下降。通过EMS诱变剂量分别与抗药性突变率和str突变株产梅岭霉素产量的产势统计分析表明 ,菌株抗药性突变与产量突变密切相关。产量突变的EMS剂量高于str突变剂量 ,从而建立了梅岭霉素产生菌链霉素抗性基因突变筛选方法。

梅岭霉素产生菌抗药性突变标志诱变筛选模型的初步研究

本文通过梅岭霉素 (Meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 4 1 80菌株孢子对 6种抗生素敏感性测定 ,采用诱变剂EMS四种不同诱变剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含致死浓度链霉素的高氏平板上。然后从抗药性突变标志菌株中进一步筛选梅岭霉素高产菌株。在 150 0多个抗药性突变株中通过初筛获得了比诱变出发菌株的产素能力提高 50 %以上菌株。通过诱变剂量分别与抗药性突变率和突变株产素产量的变势统计分析表明 ,菌株抗药性突变与产素突变密切相关 ,产素突变的EMS诱变剂量高于抗药性突变诱变剂量 ,在 0 .0 3mol/LEMS剂量作用下 ,菌株致死率为 99.4 3% ,抗药性突变率为 0 .0 4 4 0 % ,建立了梅岭霉素产生菌抗药性突变标志诱变推理性筛选模型。为南昌链霉菌高产菌种选育研究作了有益的尝试 ,并有助于其它链霉菌属的抗生素产生菌育种研究。

抗梅岭霉素和阿维菌素二斑叶螨种群生命力和繁殖力的研究

采用营养液培养的棉苗饲养二斑叶螨 Tetranychus urticae Koch,用梅岭霉素、阿维菌素对其逐代进行抗性选育 ,至第 9代 ,测定了两个抗性种群的抗性水平、生命力和繁殖力。结果表明 :梅岭霉素抗性种群的抗性达 7.9倍 ,其雌成螨寿命、产卵量、卵的孵化率和后代若螨成活率分别比对照增加 5 4 .0 8%、39.93%、6 .5 7%和 - 15 .4 4 %。阿维菌素抗性种群的抗性达 5 .8倍 ,其雌成螨寿命、产卵量、卵的孵化率和后代若螨成活率分别比对照增加 15 .88%、10 .87%、5 .86 %和 - 9.32 %。由此发现梅岭霉素和阿维菌素对二斑叶螨的生长发育和繁殖有一定有利作用 ,抗性风险性较大 ,应引起重视。

梅岭霉素发酵过程参数相关分析和优化

对新型微生物农药梅岭霉素的发酵过程进行研究。通过对发酵过程表征细胞代谢和工程特性的特征参数:氧消耗速率、二氧化碳生成速率、呼吸商、氧传递系数等进行实时在线检测,并利用参数相关分析的方法,对原有工艺不断调整,实现了梅岭霉素发酵过程的初步优化,使发酵效价从原来的150u/ml提高到520u/ml。

梅岭霉素生物学活性及其产生菌特性的研究Ⅰ梅岭霉素对十种昆虫螨类的杀虫活性

报道了梅岭霉素对十种昆虫螨类的生物活性，其中对柑桔全爪螨、柑桔锈壁虱、棉红蜘蛛、棉蚜、萝卜蚜具有高的生物活性，杀虫作用方式主要表现为触杀作用，其毒力略高于阿弗麦菌素（Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎｓ）．对这５种螨虫的ＬＣ＿（５０）依次是０．０４６ｍｇ／Ｌ，０．００４ｍｇ／Ｌ，０．０３９ｍｇ／Ｌ，０．１２６ｍｇ／Ｌ和０．１３６ｍｇ／Ｌ，对家蚕具有较强的胃毒作用，ＬＤ＿（５０）为０．０７３ｍｇ／ｋｇ，对葡萄十星叶虫和菜青虫具有一定的胃毒生物活性，但棉红铃虫和二十八星瓢虫接触梅岭霉素表现不敏感。

高效液相色谱法同时检测南昌霉素和梅岭霉素

采用高效液相色谱法同时分离测定聚醚类抗生素南昌霉素和十六元大环内酯类抗生素梅岭霉素。色谱柱为WatersXTerraTM RP18柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm ,5 μm) ,流动相为乙腈水溶液 ,流速为 0 8mL/min ,其梯度洗脱程序为 5 7% (体积分数 ,下同 )乙腈 (30min)→ 70 %乙腈 (2min)→ 80 %乙腈 (2min)→ 90 %乙腈 (16min)。检测波长为 2 34nm ,柱温 2 5℃。该法测定的灵敏度好 ,加标回收率高 ,可用于南昌链霉菌发酵液中南昌霉素和梅岭霉素的定量测定。此法具有灵敏、准确、快速的特点。

梅岭霉素产生菌的微波诱变

以微波对梅岭霉素产生菌进行了微波育种,获得梅岭霉素生产能力高于出发菌株73%的W4-311。该菌株经多次传代,遗传性状保持稳定。

梅岭霉素B开发研究

梅岭霉素Ｂ是江西农业大学“梅岭霉素Ｂ”课题组研制的杀虫抗生素，它的生物学活性和阿佛麦菌素相近似。为评价梅岭霉素Ｂ驱除猪蛔虫的效果及对猪的安全性，采用０．３、０．４、０．５ｇ／ｋｇ体重剂量一次混饲，每组２０头猪。试验证明梅岭霉素Ｂ以０．４～０．５ｇ／ｋｇ体重剂量能有效地驱除猪蛔虫，对猪群无任何不良反应。

南昌链霉菌生物合成梅岭霉素种子制备优化

以参数相关理论为指导,优化南昌链霉菌生物合成梅岭霉素种子制备工艺。结果表明,培养20～35h后,pH7.30～7.50,总糖<0.35%,pmv>10%,溶磷<100μg/ml,菌丝分化启动有利于提高梅岭霉素的发酵效价。

萃取紫外分光光度法测定梅岭霉素

提出了测定梅岭霉素 (meilingmycin)的萃取紫外分光光度法 ,该法基于酸性条件下环己烷对梅岭霉素与水溶性色素的选择性萃取及梅岭霉素的紫外吸收特性。最大紫外吸收波长 2 38nm ,梅岭霉素在 1～ 2 0mg/L范围内符合比耳定律 ,表观摩尔吸收系数ε =2 .6× 10 6L/mol/cm ,最低检出限为 0 .0 72mg/L ,回收率为 96 .7%。该法可成功的用于梅岭霉素含量的测定 。

侧链前体3,3-二甲基丙烯酸对梅岭霉素生物合成的影响

研究梅岭霉素发酵过程中添加其主要组分M B 1所拥有的侧链前体-3,3-二甲基丙烯酸,使M B 1效价及其在总组分中的比例得到大幅度提高,达到提高产量并控制组分的目的。本文还对侧链前体的添加方式、添加时间以及添加浓度进行了优化。结果显示,0h时添加6mm ol/L的侧链前体其产量最高,M B 1效价比对照高出43%,其在总组分中的比例达到了52.7%。

梅岭霉素生物学活性及其产生菌特性研究──梅岭霉素B驱除猪消化道线虫试验研究

梅岭霉素生物学活性及其产生菌特性研究──梅岭霉素Ｂ驱除猪消化道线虫试验研究余炉善，涂国全，高勇生，欧阳谅（江西农业大学）林振柏，杨旺，涂继刚（江西省朱港农场）猪消化道线虫病是由线形动物门线虫纲所属多种寄生性线虫寄生于猪的消化道所引起。这类病的主要危害...

梅岭霉素生物学活性及其产生菌特性研究──Ⅲ．南昌链霉菌生长、发酵过程中形态学的观察

通过对南昌链霉菌在培养条件下菌丝形态变化及其生活史的连续观察，发现该菌在固体和液体培养条件下均产生一种特异的菌丝形态──菌丝枝端膨大，是辣椒状或茄状。这种枝端膨大在液体深层培养条件下或直接伸长为粗菌丝，或由膨大前端缢缩形成杆状菌体，少数枝端膨大形成液囊，内含有染色不均匀的内含物。

薄层——紫外分光光度法测定梅岭霉素的含量

提出用薄层———紫外分光光度法测定杀虫抗生素———梅岭霉素的含量 ,该法以正己烷———丙酮(v/v 7∶3)作展开剂 ,在HF2 54 硅胶板上点样展层后 ,刮取有效斑点 ,用甲醇溶出 ,置紫外 2 44nm处测定吸光度 ,与标准曲线对照求出其含量 ,工作曲线在 10～ 6 0 μg范围内成直线 ,相关系数r =0 .9996 ,平均回收率在 99.8% ,变异系数小于 0 .6 %。该方法操作较简便 ,快速、准确。

梅岭霉素检测方法的研究

本文通过对梅岭霉素(Meilingmycin)的高效液相色谱法(HPLC)、紫外检测法(UV)和杀蚕生物活性检测法(BA)的研究,分别建立了梅岭霉素HPLC法、UV法和BA检测方法。通过三种检测法之间的相关性回归分析,三种检测方法相互呈直线关系。12个不同发酵单位的梅岭霉素发酵样品,分别采用HPLC法、UV法和BA法进行梅岭霉素发酵单位检测,对结果的进一步分析表明:UV法与HPLC法相比测定误差6.28%;BA法分别与HPLC法和UV法检测结果相比,其误差分别为10.48%和3.95%。

梅岭霉素的研究──梅岭霉素B驱除牛新蛔虫试验研究

梅岭霉素Ｂ是江西农业大学“梅岭霉素Ｂ”课题组研制的广谱高效杀虫抗生素，它的生物学活性和阿佛麦菌素相似。为探讨梅岭霉素Ｂ驱除牛新蛔虫的效果及对牛的安全性，采用０．３、０．４、０．５ｇ／ｋｇ体重剂量一次灌服，每组１０头犊牛。试验证明梅岭霉素Ｂ以０．４～０．５ｇ／ｋｇ体重的剂量能有效地驱除牛新蛔虫，对犊牛无任何不良反应。