梅毒密螺旋体Tp47重组蛋白的表达及其应用

目的 在大肠埃希菌中表达梅毒密螺旋体 (Treponemapallidum ,Tp)Tp47重组蛋白 ,用其建立诊断梅毒的酶联免疫法 (enzymeimmunoassay ,EIA)。 方法 应用聚合酶链反应法 (PCR)从Tp全基因组中扩增目的片段Tp47,并将其克隆到表达载体 pET - 3 0a中 ,构建重组质粒pET - 3 0a -Tp47。在大肠埃希菌中表达重组蛋白Tp47,亲和层析柱纯化 ,建立EIA法 ,检测血清中抗 -Tp抗体。 结果 获得了Tp47基因重组蛋白的高效表达 ,该重组蛋白存在于细菌上清中 ,占全菌体蛋白 12 %左右 ,分子量约 3 9kDa。蛋白印迹法 (westernblot,WB)显示 ,Tp47重组蛋白具有良好的抗原性。用Tp47重组蛋白建立EIA法 ,检测 11份梅毒血凝试验阳性和 2 8份阴性血清 ,灵敏度为 10 0 % (11/ 11) ,特异性为 96 4% (2 7/ 2 8)。

梅毒螺旋体特异抗原TP0684的克隆和表达

目的克隆并表达梅毒螺旋体外膜蛋白TP0684,为研制早期诊断试剂盒提供依据。方法PCR法扩增TP0684编码基因。T-A克隆后构建表达质粒pET-22b(+)-TP0684,经酶切鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定。结果PCR法扩增出了1212bp的目的片段,原核表达质粒pET-22b(+)-TP0684酶切鉴定正确,测序结果与GenBank上公布的该基因的CDS序列完全一致。转化E.coli BL21(DE3)后,IPTG诱导目的蛋白表达率为25%,SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约43000,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TP0684重组蛋白具有良好的免疫反应性,为进一步研究梅毒血清学诊断试剂奠定了基础。

梅毒螺旋体特异性抗原TpN47基因片段的克隆与表达

目的在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体（Tp）TpN47（68-410aa）重组蛋白。方法采用PCR法从Tp全基因组中扩增TpN47（202—1230bp）片段，T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b（＋）-TpN47，经酶切鉴定后转化E coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经Ni^2＋亲和层析柱纯化，Westem blot鉴定其免疫反应性。结果PCR法扩增出约1000bp的目的片段，原核表达质粒pET-22b（＋）-TpN47经酶切鉴定正确，表达的蛋白约占菌体总蛋白的43％，相对分子质量约为39000，以包涵体形式存在。经纯化后蛋白纯度达95％以上，Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TpN47重组蛋白具有良好的免疫反应性，为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒奠定了实验基础。

梅毒螺旋体血凝试剂盒的研制

以超声波处理的梅毒螺旋体为抗原,致敏经醛化、鞣化处理的绵羊红血球,应用血凝试验检测梅毒患者血清中梅毒螺旋体特异性抗体。同时以国际上公认的标准方法——FTA-ABS作为对照试验。共检测1125份血清(其中梅毒血清205份,非梅毒血清920份).两种方法检测结果完全相符,即敏感性皆为100％,血凝试验的特异性为99％。

梅毒螺旋体TpN17抗原全长表达纯化和ELISA检测

目的在大肠埃希菌中重组表达梅毒密螺旋体TpN17抗原,用其建立梅毒诊断血清学方法。方法酶切与PCR联用,合成全长TpN17基因,亚克隆后克隆到pET-HIS质粒并转化到大肠杆菌BL21株中表达。亲和层析纯化。用纯化的rTpN17包被微孔板,ELISA方法检测临床8份梅毒阳性血清和4份梅毒阴性血清。结果获得了重组表达并纯化的TpN17,ELISA检测结果表明重组蛋白能被梅毒患者阳性血清所识别,特异性100%,灵敏度100%。结论该重组蛋白具有良好的免疫反应性,能鉴别梅毒阳性血清,有望进一步应用于梅毒感染的血清学检测。

四种梅毒血清学检测方法的实验室评价

目的 比较四种梅毒血清学实验诊断方法的准确性及在临床的应用价值。 方法 应用甲苯胺红不加热血清试验 (TRUST) ,梅毒密螺旋体血凝试验 (TPHA) ,梅毒酶联免疫吸附试验 (TP～ELISA)及梅毒抗体蛋白印记法(Western -blot)检测 2 5 0例患者血清。 结果 TRUST方法特异性及灵敏度较低 ;Western -blot特异性为 10 0 % ,但敏感性较差 ;TPHA与ELISA两种方法在检测梅毒抗体时灵敏度与特异性都比较好 ,而且相当接近。 结论 ELISA法因其准确性及方法学的优势 。

血清梅毒抗体检测方法的临床意义

梅毒的抗体检测主要分为特异性和非特异性梅毒抗体检测。不同抗体检测对于梅毒的诊断和治疗各具有极其重要的价值。本文对当前梅毒抗体的检测方法及其临床应用作一详述。以探讨如何正确地联合使用梅毒抗体检测在梅毒诊断和治疗中的临床应用。

疑似神经梅毒患者脑脊液实验室检查指标分析

目的探讨脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中白细胞计数、蛋白质含量、梅毒血清学检测在神经梅毒诊断中的应用价值。方法选取2015年1月至2019年12月首都医科大学附属北京佑安医院收治的疑似神经梅毒患者629例,按照神经梅毒的诊断标准分为神经梅毒组(101例)和非神经梅毒组(528例),采集CSF进行脑脊液白细胞计数(white blood cell count,CSF-WBC)、脑脊液蛋白质定量(CSF-protein)及脑脊液梅毒血清学检测[快速血浆反应素试验(rapid plasma reagent test,RPR)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination,TPPA)、梅毒荧光密螺旋体抗体吸收试验(fluorescent treponema pallidum antibody absorption test,FTA-ABS)],分析上述指标在神经梅毒诊断中的应用价值。结果629例患者CSF-WBC、CSF-protein、脑脊液RPR、TPPA、FTA-ABS敏感性分别为88.12%、14.85%、87.13%、98.02%、95.05%,特异性分别为87.50%、99.43%、90.91%、42.05%、39.39%。ROC分析,脑脊液RPR、WBC和CSF-protein的AUC分别为0.904、0.931、0.813、CSF-WBC的最佳诊断界值为10.5×106/L,CSF-protein最佳诊断界值为208.36 mg/L。结论CSF-WBC、CSF-protein、脑脊液RPR对神经梅毒的诊断有重要价值,脑脊液TPPA、FTA-ABS阴性结果可排除神经梅毒,降低CSF-protein诊断界值可提高其诊断效能。

妇科老年隐性梅毒患者的护理

梅毒是由苍白密螺旋体（treponema pallidum,TP）引起的性传播疾病,流行非常广泛,年增长率达51.63%。隐性梅毒是梅毒未经治疗或用药剂量不足,无临床症状,血清反应RPR（快速血浆反应素环状卡片试验）、TPHA（梅毒密螺旋体血凝试验）阳性,没有其他可以引起血清反应假阳性的疾病存在,脑脊液正常。近年来,妇科住院老年隐性梅毒老年患者增多;由于老年患者的生理、心理的特殊性,以及隐私权和自我保护意识的提高,在疾病治疗和护理上对我们有了更高的要求。现将护理体会报道如下。

梅毒性婴儿肝炎12例临床分析

婴儿肝炎综合征系指婴儿期以黄疽、肝功能异常、肝肿大或肝脾肿大为主要表现的临床症候群。我们自1998年～2001年6月收治12例由梅毒螺旋体引起的婴儿肝炎综合征,现将结果报告如下。 1

牡丹江市2137例梅毒患病人群特征分析

梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、系统性性传播疾病[1].严重威胁着人们身心健康.为探讨梅毒患病人群的特征,加强梅毒防治工作提供参考依据,本文对牡丹江市1991-2003年各医疗单位确诊的2137例梅毒病例进行人群特征分析.……

酶切与PCR联用合成梅毒抗原TpN17全长DNA及其表达活化和ELISA检测

目的在大肠埃希菌中重组表达梅毒密螺旋体TpN17抗原,用其建立梅毒诊断血清学方法。方法酶切与PCR联用,合成全长TpN17基因,亚克隆后克隆到pET-HIS质粒并转化到大肠杆菌BL21株中表达。亲和层析纯化。纯化rTpN17包被微孔板,ELISA方法检测临床8份梅毒阳性血清和4份阴性血清。结果获得了重组表达并纯化的TpN17,ELISA检测结果表明重组蛋白能被梅毒患者阳性血清所识别,特异性100%,灵敏度100%。结论证明了该重组蛋白具有良好的免疫反应性,可用于梅毒感染的血清学检测。