梅花鹿γ干扰素双单抗夹心ELISA方法的初步建立

为利用抗牛γ干扰素(BoIFN-γ)特异性单克隆抗体(MAb)建立检测梅花鹿γ干扰素(CerIFN-γ)的双抗体夹心ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法从双阳型梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA中扩增出CerIFN-γcDNA,通过原核表达系统表达重组CerIFN-γ蛋白(rHis-CerIFN-γ);通过间接ELISA方法评价其与抗BoIFN-γMAb的反应性,筛选出与之反应最佳的两株MAb建立双抗体夹心ELISA检测方法。基因序列比对显示CerIFN-γ(JQ408441)与BoIFN-γ的同源性为95.6%,氨基酸序列的同源性为91.6%;SDS-PAGE检测结果显示CerIFN-γ在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效可溶性表达,大小为23 ku;间接ELISA结果显示42株MAb中有15株与rHis-CerIFN-γ反应性较好,其中1C12和5E11两株抗体结合活性最高;采用MAb 1C12为捕获抗体,以生物素标记的MAb 5E11为检测抗体建立的用于检测CerIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法可检出3.05 ng/100μL的rHis-CerIFN-γ。本研究所建立的检测CerIFN-γ双抗体夹心ELISA方法,为进一步研究CerIFN-γ及相关疾病提供了实验手段。