梓醇对H_(2)O_(2)诱导成骨细胞损伤的影响及机制

目的探究梓醇对H_(2)O_(2)诱导成骨细胞损伤的影响及机制。方法将小鼠成骨细胞MC3T3-E1分为对照组、模型组、空载组(转染空载质粒)、梓醇组(100μmol/L)、梓醇+叉头框蛋白O3(FoxO3)过表达组(100μmol/L梓醇+转染FoxO3过表达质粒),经梓醇和转染处理后,除对照组细胞不作处理外,其余各组细胞以H_(2)O_(2)诱导建立成骨细胞氧化应激模型。检测各组细胞活力、凋亡率、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙结节光密度(OD)值、活性氧(ROS)的平均荧光强度(MFI)、抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性、炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、IL-1β]水平、FoxO3/Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组细胞活力、ALP活性、钙结节OD值、抗氧化酶活性和Wnt、β-catenin蛋白表达水平均显著降低,凋亡率、ROS的MFI、炎症因子水平和FoxO3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,空载组细胞上述指标均无明显变化(P>0.05),梓醇组细胞上述指标均显著逆转(P<0.05);与梓醇组比较,梓醇+FoxO3过表达组细胞上述指标的逆转效果均被显著削弱(P<0.05)。结论梓醇可通过下调FoxO3激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制H_(2)O_(2)诱导的MC3T3-E1细胞氧化应激和炎症反应,提高细胞活力与成骨分化能力,抑制细胞凋亡。

梓醇调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路对口腔鳞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究梓醇调节Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1/核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Keap1/Nrf2/HO-1)信号通路对口腔鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。方法体外培养口腔鳞癌细胞Tac8113;CCK-8法筛选梓醇最佳作用水平;将Tac8113细胞分为对照组、梓醇组(24μg/mL)、sh-NC组(转染sh-NC慢病毒质粒)、sh-Keap1组(转染sh-Keap1慢病毒质粒)、梓醇+sh-NC组(转染sh-NC+24μg/mL梓醇)、梓醇+sh-Keap1组(转染sh-Keap1+24μg/mL梓醇);CCK-8法检测细胞增殖;划痕试验检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞凋亡;2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平;采用试剂盒分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;Western Blot分别检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路及凋亡相关蛋白表达水平。结果与0μg/mL组比较,随着梓醇剂量增加Tac8113细胞存活率显著降低(P<0.05),因此,选择24μg/mL梓醇作为后续实验的干预条件;与对照组比较,梓醇组Tac8113细胞OD450值、划痕愈合率、ROS水平、MDA水平及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Nrf2、HO-1表达显著降低,细胞凋亡率、SOD水平及Keap1、胱天蛋白酶3(caspase3)表达显著升高(P<0.05);Keap1低表达后Tac8113细胞恶性生物学行为程度加重,且逆转了梓醇对Tac8113细胞恶性生物学行为的影响。结论梓醇抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡发挥抑癌作用,可能与上调Keap1表达,下调Nrf2和HO-1表达有关。

梓醇对2型糖尿病大鼠心肌纤维化及心肌细胞形态学的影响

目的:探讨梓醇对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠心肌纤维化及形态学的影响。方法:采用随机数字表法将90只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组10只和实验组80只。实验组大鼠高脂高糖饲料喂养8周后,腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液15 mg/kg制备T2DM模型。将成模大鼠根据空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、体质量随机分为模型组、二甲双胍组与梓醇低、中、高剂量组。二甲双胍组灌胃二甲双胍混悬液90 mg/kg,梓醇低、中、高剂量组分别灌胃梓醇2.5、5、10 mg/kg,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,均灌胃12周。末次给药后,测定各组大鼠FPG;免疫组化法检测心肌组织转化生长因子β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1))表达;HE染色观察心肌组织结构情况。结果:与模型组比较,梓醇高、中、低剂量组大鼠FPG及心肌TGF-β_(1)降低(P<0.05);梓醇高剂量组与正常组比较,心肌纤维、胞质、胶原纤维、细胞核均无显著差异。模型组与梓醇低剂量组心肌纤维排列紊乱或不规整,部分溶解、断裂,甚至呈小片状分布,胞质染色不均匀,中度或轻度肿胀;部分细胞核变形,固缩,甚至碎裂消失;心肌间隙显著增宽,可见大量或少量炎性细胞或成纤维细胞。二甲双胍组与梓醇中剂量组心肌纤维排列略规整,心肌细胞核极少部分变形;心肌间隙略增宽,炎性细胞较少。结论:梓醇可降低T2DM大鼠FPG与心肌纤维化水平,可能为保护T2DM大鼠心肌细胞的有效手段。

梓醇调节cGAS-STING信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨梓醇(Catalpol)通过调节GMP-AMP合酶/干扰素基因刺激物(cGAS-STING)信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:培养肺癌细胞A-427,使用1μmol/L~20μmol/L的梓醇处理细胞,选择最佳药物浓度。将细胞分为对照组(Control组)、梓醇低浓度组(Catalpol-L组,5μmol/L Catalpol)、梓醇中浓度组(Catalpol-M组,10μmol/L Catalpol)、梓醇高浓度组(Catalpol-H组,15μmol/L Catalpol)、梓醇高浓度+cGAS通路抑制剂RU.521组(Catalpol-H+RU.521组,15μmol/L Catalpol+1μmol/L RU.521)。MTT法检测细胞存活率;Edu法检测细胞增殖;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期;蛋白免疫印迹检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、cGAS和STING蛋白表达;将CD8^(+)T细胞与各组处理的细胞共培养,台盼蓝染色检测CD8+T细胞存活率;ELISA试剂盒检测IFN-γ、IL-4、IL-10、TGF-β和PD-L1水平。结果:1~20μmol/L的梓醇处理A-427细胞,细胞存活率降低(P<0.05),选择5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L的梓醇浓度进行实验。与Control组相比,Catalpol-L组、Catalpol-M组和Catalpol-H组Edu阳性率、细胞克隆形成数、S期细胞占比、IL-4、IL-10、TGF-β和PD-L1水平及Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期和G_(2)/M期细胞占比、CD8^(+)T细胞存活率、IFN-γ水平及Bax、Cleaved-caspase-3、cGAS和STING蛋白水平显著增加(P<0.05),且呈浓度依赖性;与Catalpol-H组相比,Catalpol-H+RU.521组Edu阳性率、细胞克隆形成数、S期细胞占比、IL-4、IL-10、TGF-β和PD-L1水平及Bcl-2蛋白水平显著增加(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期和G_(2)/M期细胞占比、CD8^(+)T细胞存活率、IFN-γ水平及Bax、Cleaved-caspase-3、cGAS和STING蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:梓醇可能通过激活cGAS-STING信号通路抑制肺癌细胞的增殖和免疫逃逸,促进细胞凋亡。

梓醇抗氧化作用机制的研究进展

梓醇作为天然抗氧化剂,其抗氧化作用对生物体发挥重要保护作用,尤其在治疗糖尿病、肿瘤、神经损伤等疾病有明显作用且已被研究证实。通过搜索中国知网(CNKI)、万方数据库、Pubmed、Web of Science等中英文数据库,整理近年国内外对梓醇的抗氧化机制研究成果,总结梓醇抗氧化作用的研究现状。研究发现,梓醇可以直接捕捉和中和自由基,阻止其对细胞和组织的氧化损伤。其次,梓醇还通过激活抗氧化酶系统,增强细胞内的抗氧化能力。此外,梓醇能调节氧化应激相关的信号通路,抑制氧化应激引发的炎症反应,从而减少氧化损伤的发生。这些机制共同作用使得梓醇成为一种具有潜力的抗氧化剂,并且在预防癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等发挥重要作用。因此梓醇在医药业的开发和利用有待评估和深入挖掘。

梓醇干预PKM2/LDHA表达调控Th17细胞分化的机制研究

目的研究梓醇通过干预丙酮酸激酶M2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)表达进而影响辅助性T细胞17(Th17)分化的机制。方法从C57BL/6小鼠脾脏中分选出naive CD4^(+)T细胞,通过加入定向分化刺激剂诱导72 h使naive CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化。在诱导分化的同时,分别用0(定向对照)、20、40、80μg/mL梓醇对细胞进行处理。采用流式细胞术检测细胞中Th17细胞分化比例,采用比色法检测细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平,采用实时荧光定量-逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)、PKM2、LDHA mRNA表达情况,采用Western blot法检测细胞中PKM2、LDHA、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达情况。结果与定向对照组比较,经20、40、80μg/mL梓醇作用72 h后,细胞中Th17细胞分化比例分别降低了6.74%、8.41%、9.24%;细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平,细胞中PKM2、LDHA、RORγt mRNA表达水平以及细胞中PKM2、LDHA蛋白表达水平和STAT3磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。结论梓醇可通过下调PKM2、LDHA表达来降低糖酵解水平,进而抑制Th17细胞分化。

梓醇在神经退行性疾病中的神经保护作用研究进展

神经退行性疾病(如阿尔茨海默病和帕金森病),其病理特征是神经元进行性丧失。神经退行性疾病常见于老年人,且发病率逐年上升,给社会及家庭带来沉重负担。梓醇是一种中草药内提取的活性成分,大量的体内外实验研究已证实,梓醇具有抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡、促血管生成及神经保护等多种功能,对神经退行性疾病有显著的防治作用,梓醇可能成为一种较理想的神经退行性疾病治疗药物。因此,该文在此基础上就梓醇在神经退行性疾病的作用机制进行综述。

梓醇对肝肺综合征大鼠肝肺损伤的保护作用研究

目的 探索梓醇通过增强TGR5表达和降低肝胆汁酸水平对胆总管结扎术(CBDL)大鼠肺损伤的保护作用。方法 将大鼠随机分为三组[Sham组、CBDL组和梓醇(Catalpol)组],评估生存率、动脉血氧分压(PO2)和肺泡-动脉血氧分压差P(A-a)O2、肝功能、肝肺组织病理变化差异;进一步分析胆汁酸表达水平和TGR5的关系以及相关机制。结果 梓醇治疗改善CBDL导致的肝功能损伤,提高CBDL的生存率和改善了低氧血症;减少了肝、肺血管新生。同时,梓醇通过增强TGR5和降低FXR的表达,减轻BAs水平过高引起肺损伤。结论 梓醇通过上调TGR5和降低FXR的表达,改善BAs水平过高引起的肺损伤,发挥对CBDL大鼠的肝肺保护作用。

梓醇通过NLRP3/Caspase-1通路对糖尿病心肌病大鼠心脏的保护作用及机制

目的 探讨梓醇通过NLRP3/Caspase-1通路对糖尿病心肌病大鼠心脏的保护作用及其机制。方法 从80只健康SD大鼠中随机选取70只,给予高脂高糖饲料,同时通过腹腔注射的方式,注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)建立糖尿病大鼠模型,余下10只作为对照组正常饲料喂养。将造模成功的60只大鼠(10只大鼠未达模型标准被淘汰)随机分成模型组、梓醇低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各15只,按照100、300、900 mg/kg的量每日灌胃1次,连续干预8 w,期间保持高脂高糖喂养;对照组和模型组灌胃生理盐水。最后一次灌胃结束后,超声检测大鼠心功能,HE染色观察大鼠心肌形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达量,大鼠血清中白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量经酶联免疫吸附法(ELISA)检测。结果 与对照组相比,模型组大鼠左心室缩短率(fractional shortening, FS)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)均显著降低(P<0.05),HE染色结果可见心肌纤维肿胀、排列紊乱、纤维束间隔增宽,大鼠心肌组织NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白表达量和血清中IL-1β、IL-18水平均显著增高(P<0.05)。梓醇低、中、高剂量组LVEF、FS与模型组比较均明显改善(P<0.05),大鼠心肌组织病理学损伤明显改善,同时心肌组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达及血清IL-1β、IL-18含量均明显降低(P<0.05),仅梓醇低剂量组Caspase-1蛋白表达无差异。结论 梓醇保护DCM大鼠心肌组织可能是通过调控NLRP3/Caspase-1信号通路,抑制DCM大鼠心肌细胞焦亡。

响应面法优化千金黄连丸中小檗碱和梓醇的超声提取工艺

目的 优化千金黄连丸中小檗碱和梓醇的超声提取工艺。方法 采用单因素实验,考察超声时间、超声温度、超声功率、料液比对千金黄连丸中小檗碱和梓醇含量的影响。在单因素实验的基础上,以通过熵权法计算的小檗碱含量、梓醇含量的综合评分为评价指标,采用响应面法优化千金黄连丸中小檗碱和梓醇的超声提取工艺。结果 最佳工艺参数为料液比1:30(g:mL),超声时间50min,超声温度27℃,超声功率67%(167.5W,最大功率250W),此条件下,小檗碱含量为4.15,梓醇含量为0.593,综合评分为2.34。结论 响应面法操作方便、省时、重复性好,结果可靠,为千金黄连丸的进一步开发利用提供了证据。

梓醇对MPTP诱导帕金森病模型小鼠的神经保护作用及其机制

目的探究梓醇对甲基苯骈三氮唑(MPTP)诱导帕金森病模型小鼠的神经保护作用,并探索其作用机制。方法利用MPTP构建帕金森病模型小鼠模型,根据实验目的将实验小鼠分成空白对照组,MPTP模型组和MPTP+梓醇组。利用开放场实验(OFT)、爬杆实验和Rota-rod实验检测小鼠行为学,处死小鼠后收集其脑组织,检测小鼠脑组织中活性氧(ROS)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot法检测凋亡相关分子的表达量,免疫组织化学检测小鼠脑黑质和纹状体中酪氨酸羟化酶(HT)的表达。结果3组小鼠的OFT总距离,爬杆试验结果和Rota-rod时间差异均无统计学意义(均P>0.05),但MPTP+梓醇组小鼠的区域中心距离和进入竞技场中心的次数均优于MPTP组(均P<0.05)。MPTP组小鼠脑组织中ROS含量高于空白对照组(P<0.05),而SOD活性低于空白对照组(P<0.05);MPTP+梓醇组小鼠脑组织中ROS含量低于MPTP组(P<0.05),而SOD活性高于MPTP组(P<0.05)。MPTP模型组小鼠Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3的相对表达量均高于空白对照组(均P<0.05);MPTP+梓醇组小鼠的Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3的相对表达量均低于MPTP组(均P<0.05)。MPTP+梓醇组小鼠的p-MKK4/MKK4、p-JNK/JNK和p-cjun/jun的相对表达量均低于MPTP组(均P<0.05)。MPTP模型组小鼠黑质和纹状体中HT的含量均低于空白对照组(均P<0.05),而MPTP+梓醇组小鼠黑质和纹状体中HT的含量均高于MPTP模型组(均P<0.05)。结论梓醇不仅可以抑制氧化反应,还可以调高HT的表达,进而发挥抗帕金森的作用,而MKK4/JNK/c-jun信号通路可能是MPTP氧化应激传导的信号通路。

生地中活性成分梓醇对秀丽隐杆线虫衰老的影响

目的探讨梓醇延长秀丽隐杆线虫寿命的作用及其机制。方法以野生型秀丽隐杆线虫(N2)、突变体线虫Daf-2(CF1041)、Daf-16(CF1038)为衰老模型,设置空白组、梓醇低、中、高剂量组(0.025、0.050、0.100 mg/ml梓醇),观察梓醇对线虫寿命的调控作用。通过检测梓醇对N2线虫生殖能力、运动能力、抗急性应激及荧光定量RT-聚合酶链反应(PCR)检测Daf-2、Daf-16、Sod-3及Ctl-1基因表达量,探究梓醇抗衰老作用及机制。结果与空白组比较,梓醇高、中剂量组N2线虫寿命显著延长(P<0.01,P<0.05),突变体Daf-2、Daf-16寿命差异无统计学意义(P>0.05),N2线虫紫外辐射应激、高温热应激、胡桃醌氧化应激及过氧化氢应激条件下生存时长显著延长(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,梓醇高剂量组N2线虫Daf-2 mRNA表达显著下调,Daf-16、Sod-3及Ctl-1 mRNA表达显著上调(P<0.01,P<0.05)。结论梓醇延长了N2线虫正常状态和氧化应激状态下的寿命,没有延长突变体Daf-2和Daf-16线虫寿命,其作用机制可能是通过胰岛素/胰岛素样生长因子(IGF)-1信号通路,促进Daf-16下游相关抗氧化基因表达,提高线虫抗氧化应激能力,从而延长线虫寿命。

梓醇-川芎嗪方对AD模型小鼠学习记忆行为及炎性因子的影响

目的探讨梓醇-川芎嗪方对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆行为及相关炎性因子的影响。方法将50只SPF级APPswe/PS1ΔE9双转基因雄性小鼠随机分为模型组、安理申组及梓醇-川芎嗪方低、中、高剂量组,每组10只;选取同月龄C57BL/6J野生型雄性小鼠10只作为正常组。梓醇-川芎嗪方低、中、高剂量组分别给予25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg梓醇-川芎嗪方灌胃,安理申组给予安理申溶液5 mg/kg灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,均每天1次,连续灌胃8周。Morris水迷宫实验检测记录第1~5天小鼠逃避潜伏期和第6天的穿越原平台次数,新物体识别测试小鼠1 h、24 h对新物体的偏好指数,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血清和脑组织海马区神经相关蛋白[β淀粉样蛋白(Aβ)、Tau蛋白、磷酸化Tau蛋白(p-Tau)]含量和炎性因子[白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平。结果第3~5天,梓醇-川芎嗪方各组和安理申组小鼠的逃避潜伏期均明显短于模型组(P均<0.05);梓醇-川芎嗪方高剂量组第4天、第5天的逃避潜伏期均明显短于川芎嗪方中剂量组和安理申组(P均<0.05);梓醇-川芎嗪方各组和安理申组小鼠穿越原平台次数均明显多于模型组(P均<0.05),且梓醇-川芎嗪方高剂量组明显多于梓醇-川芎嗪方低、中剂量组及安理申组(P均<0.05)。梓醇-川芎嗪方各组和安理申组1 h、24 h对新物体的偏好指数均明显高于模型组(P均<0.05),且梓醇-川芎嗪方高剂量组明显高于梓醇-川芎嗪方低、中剂量组及安理申组(P均<0.05),梓醇-川芎嗪方中剂量组及安理申组均明显高于梓醇-川芎嗪方低剂量组(P均<0.05)。梓醇-川芎嗪方各组和安理申组小鼠血清和脑组织海马区Aβ、Tau、p-Tau蛋白含量和IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α水平均明显低于模型组(P均<0.05),且梓醇-川芎嗪方高剂量组明显低于梓醇-川芎嗪方低、中剂量组及安理申组(P均<0.05),梓醇-川芎嗪方中剂量组及安理申组均明显低于梓醇-川芎嗪方低剂量组(P均<0.05)。结论梓醇-川芎嗪方可以改善APPswe/PS1ΔE9小鼠的学习记忆行为,且其作用与剂量呈正相关,机制可能与其可以降低血清和脑组织海马区Aβ、Tau、p-Tau蛋白含量和炎性因子IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α水平有关。

基于Raf-MEK-ERK信号通路探究梓醇对蛛网膜下腔出血大鼠脑组织损伤的影响

[目的]通过考察梓醇对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑组织丝/苏氨酸蛋白激酶(Raf)-丝裂原活化蛋白激酶(MEK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响,探讨其抗SAH脑损伤的作用机制。[方法]将大鼠随机分为假手术组、SAH组、梓醇组、梓醇+U0126组(梓醇+Raf-MEK-ERK信号通路抑制剂U0126)。采用血管内穿孔法构建大鼠SAH模型,评估大鼠神经功能和SAH分级,伊文思蓝(EB)检测血脑屏障通透性,苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理变化,免疫荧光染色检测神经元细胞凋亡及微管连接蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p-ERK阳性细胞表达,蛋白免疫印迹(Western blot)检测脑组织Raf、MEK、磷酸化(p)-MEK、ERK1/2、p-ERK1/2、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、自噬基因Beclin-1、LC3-Ⅱ表达。[结果]与假手术组相比,SAH组神经元细胞排列松散,数目减少,SAH分级、脑组织含水量、EB渗出量、原位末端标(TUNEL)阳性细胞数显著增加,凋亡率、LC3-Ⅱ、p-ERK阳性表达、Bax、Beclin-1、LC3-Ⅱ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2表达显著升高,神经功能评分减少,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与SAH组相比,梓醇组神经元损伤明显减轻,细胞死亡较少,SAH分级、脑组织含水量、EB渗出量、TUNEL阳性细胞数显著减少,凋亡率、Bax显著降低,神经功能评分、Bcl-2表达升高,LC3-Ⅱ、p-ERK阳性表达及Beclin-1、LC3-Ⅱ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2表达进一步升高(P<0.05);Raf-MEK-ERK通路抑制剂U0126可逆转梓醇对脑组织损伤的改善作用(P<0.05)。[结论]梓醇可能通过激活Raf-MEK-ERK信号通路,促进神经细胞自噬,改善SAH大鼠脑损伤。

梓醇对IL-1β诱导软骨细胞损伤的保护机制研究

目的探讨梓醇对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法分离培养人膝关节软骨细胞,分为对照(Con)组、IL-1β组(用10μg/L IL-1β处理48 h),IL-1β+梓醇-低组、IL-1β+梓醇-中组、IL-1β+梓醇-高组(分别用10、20及50 ng/L的梓醇处理软骨细胞后,用10μg/L IL-1β处理24 h),IL-1β+miR-NC组、IL-1β+miR-140-5p组(分别转染miR-NC和miR-140-5p mimics后,用10μg/L IL-1β处理24 h),IL-1β+梓醇+anti-miR-NC组、IL-1β+梓醇+anti-miR-140-5p组(分别转染anti-miR-NC和anti-miR-140-5p后,用50 ng/L梓醇和10μg/L IL-1β处理24 h)。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的水平;流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时荧光定量PCR检测miR-140-5p的表达水平;Western blot检测活化的胱天蛋白酶3(Cleaved-caspase 3)、Cleaved-caspase 9蛋白表达。结果与IL-1β组比较,IL-1β+梓醇-低组、IL-1β+梓醇-中组、IL-1β+梓醇-高组IL-6、TNF-α、IFN-γ水平,细胞凋亡率和Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞活力和miR-140-5p表达水平升高(P<0.05);与IL-1β+miR-NC组比较,IL-1β+miR-140-5p组IL-6、TNF-α、IFN-γ水平,细胞凋亡率和Cleavedcaspase 3、Cleaved-caspase 9蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞活力和miR-140-5p表达水平升高(P<0.05);与IL-1β+梓醇+anti-miR-NC组比较,IL-1β+梓醇+anti-miR-140-5p组IL-6、TNF-α、IFN-γ水平,细胞凋亡率和Cleavedcaspase 3、Cleaved-caspase 9蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞活力和miR-140-5p表达水平降低(P<0.05)。结论梓醇可能通过上调miR-140-5p表达,抑制细胞炎性因子释放及细胞凋亡,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。

梓醇抑制Galectin-3和CD146互作改善AGEs致肝窦内皮细胞的损伤作用

【目的】探讨梓醇通过影响半乳糖凝集素-3(Galectin-3)和CD146的相互作用改善晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)导致大鼠肝窦内皮细胞(rat liver sinusoidal endothelial cells,RLSECs)的炎性损伤作用。【方法】用不同浓度(0、0.1、1、10μmol/L)梓醇分别孵育RLSECs 48 h后,采用CCK-8法观察细胞增殖情况。用10μmol/L梓醇孵育RLSECs 0、12、24、48、96 h,同上法观察细胞增殖情况。设Control(空白对照组)、AGEs(AGEs处理)、Cat1(1μmol/L梓醇)、Cat10(10μmol/L梓醇)和阳性对照GB1107组(1μmol/L GB1107),Cat1、Cat10和GB1107组加入相应含量的药物培养基孵育30 min后,除Control组外其他组均在培养基中加入终浓度为200μg/mL的AGEs刺激,观察以上各组的RLSECs形态变化,采用乳酸脱氢酶(lactate hydrogenase,LDH)法检测细胞的损伤程度,采用ELISA法观察各组单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的分泌量。将巨噬细胞RAW264.7种板,同上法分组并给药,48 h后采用Griess法观察各组一氧化氮(nitric oxide,NO)向细胞上清液的释放量。将RAW264.7细胞种于Transwell小室,RLSECs种于孔板底部,设Control、AGEs、Cat10、Cat10+LV-Galectin-3-GFP、Cat10+LV-Galectin-3-shRNA组,后两组先转染慢病毒48 h,再分别给药30 min后,除Control组外在培养基中加入终浓度为200μg/mL的AGEs刺激,48 h后用结晶紫法观察巨噬细胞的透膜细胞数量。将Control、AGEs、Cat10、GB1107组的RLSECs孵育药物48 h后,采用免疫荧光法观察Galectin-3和CD146的共定位情况。将Control、AGEs和Cat10组的蛋白样品通过Western blotting和免疫共沉淀(Co-IP)法检测Galectin-3和CD146的相互作用以及各自的表达量。【结果】与Control组相比,Cat0.1组RLSECs增殖率无显著差异(P>0.05),Cat1和Cat10组RLSECs增殖率显著升高(P<0.05);与孵育0 h组相比,10μmol/L梓醇孵育48 h组RLSECs增殖率显著上升(P<0.05)。因此,后续试验选用10μmol/L梓醇孵育48 h为最适试验条件。与AGEs组相比,Cat1和Cat10组改善AGEs导致的细胞损伤,RLSECs上清液LDH活力及MCP-1、ICAM-1的释放量显著降低(P<0.05)。与AGEs组相比,梓醇组抑制巨噬细胞RAW264.7的激活作用,细胞NO的释放量显著降低(P<0.05)。通过慢病毒载体过表达和敲低RLSECs和RAW264.7的Galectin-3,证明了梓醇通过抑制该分子表达可显著改善巨噬细胞的浸润作用(P<0.05)。与AGEs组相比,Cat10组Galectin-3与CD146的结合被显著抑制(P<0.05),且不影响两种分子的各自表达量(P>0.05)。【结论】梓醇通过促进AGEs致Galectin-3和CD146分子复合物的解偶联作用,改善AGEs致肝窦血管内皮细胞的损伤以及促炎因子的释放,降低巨噬细胞的激活和NO的分泌,发挥肝窦血管内皮的保护作用,通过离体试验初步证明了其发挥改善糖尿病AGEs沉积造成的肝损伤的作用机制。

梓醇-川芎嗪方干预APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠的作用机制研究

目的:探究梓醇-川芎嗪方干预APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠的作用机制。方法:将3月龄C57BL/6J野生型小鼠为对照组(control组),构建阿尔茨海默病模型后,将同月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组(model组)、梓醇-川芎嗪方低剂量组(CT-L组)、梓醇-川芎嗪方中剂量组(CT-M组)、梓醇-川芎嗪方高剂量(CT-H组)、安理申组,对照组及模型组均给予生理盐水灌胃,各用药组以相应药物灌胃,每日灌胃1次,连续8周。对各组小鼠进行行为学观察,检测各组小鼠海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及血清中β淀粉样蛋白42(Aβ42)。结果:行为学观察:与model组比较,CT-M组、CT-H组、Arceipt组长时程学习和参考记忆能力、自主探究能力、情景识别记忆能力、短期工作记忆能力、条件恐惧记忆能力,缓解焦虑、抑郁状态等7项行为学指标均明显好转(P<0.01);与CT-L组比较,CT-M组、CT-H组、Arceipt组7项行为学指标均明显好转(P<0.05或P<0.01);与CT-M组比较,CT-H组7项行为学指标均明显好转(P<0.05);与Arceipt组比较,CT-H组7项行为学指标均明显好转(P<0.05)。生化检测方面:与model组比较,CT-M组、CT-H组、Arceipt组海马组织SOD、GSH-Px水平均升高,AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与CT-L组比较,CT-M组、CT-H组、Arceipt组海马组织SOD、GSH-Px水平均升高,AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与CT-M组比较,CT-H组海马组织SOD、GSH-Px水平均升高(P<0.05),AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低(P<0.05);与Arceipt组比较,CT-H组海马组织SOD、GSH-Px水平均升高(P<0.05),AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低(P<0.05)。结论:梓醇-川芎嗪方可以改善阿尔茨海默病模型小鼠的长时程学习和参考记忆能力、自主探究能力、情景识别记忆能力、短期工作记忆能力、条件恐惧记忆能力,缓解焦虑、抑郁状态,且其效应呈剂量依赖性,高剂量梓醇-川芎嗪方优于安理申。其作用机制可能与提高海马组织SOD、GSH-Px水平,降低AChE活性及iNOS、IL-6、TNF-α、MDA、Aβ42水平有关。

梓醇对神经血管单元保护作用机制研究进展

梓醇是中药地黄的主要有效成分,对中枢神经系统疾病的防治有着广泛应用价值。作者搜集了近年来关于梓醇对神经血管单元保护作用的相关文献,并对其进行综述。该文主要从神经元、脑微血管和胶质细胞3个方面分别论述梓醇的不同作用机制,证明梓醇作为脑保护剂的巨大潜力。希望能够为中枢神经系统疾病的防治和中药地黄的开发提供一些思路和理论依据。

梓醇对缺血性心脏病保护机制的研究进展

缺血性心脏病现已成为心血管疾病的主要死因。中药地黄具有清热养血、养阴生津等功效,梓醇是从地黄中提取出来的一种活性成分,近年来梓醇在治疗缺血性心脏病方面显示出了潜在的治疗作用。文章从抗氧化应激、抗炎、抑制细胞凋亡、促进自噬等方面,对梓醇保护缺血性心脏病的机制进行综述。以期为梓醇的临床应用和新药研发提供依据。

梓醇对T2DM大鼠大血管病变的保护作用及与oxLDL/LDL和NF-κB信号通路的关系

目的探讨梓醇对2型糖尿病(T2DM)大鼠大血管病变的保护作用与氧化低密度脂蛋白(oxLDL)/低密度脂蛋白(LDL)和核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的关系。方法用高糖高脂饲料喂养和腹腔注射STZ复合因素对大鼠进行T2DM造模,将大鼠分为模型组、二甲双胍组(134 mg·kg^(-1)·d^(-1))、梓醇组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),另设对照组,每组10只,模型组和对照组给予相同体积的0.9%氯化钠溶液,干预4周。结束后,自动生化分析仪检测大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FBG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平;酶联免疫吸附法测定人巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、oxLDL含量;RT-PCR法检测主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1 mRNA表达;Western blot检测主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1蛋白表达;透射电镜观察大鼠主动脉内皮细胞结构。结果对照组大鼠主动脉内皮细胞形态正常,模型组细胞显著肿胀,连续性中断、见空泡,部分内皮细胞有显著脱落,细胞核褶皱变形,线粒体、内质网中度肿胀,嵴肿胀紊乱或溶解,见脂滴、糖原颗粒;二甲双胍组和梓醇组内皮细胞形态结构轻微肿胀,线粒体、内质网结构正常,细胞核轻微变形,部分内皮细胞有轻微脱落,损伤程度显著轻于模型组。与对照组比较,模型组血清FBG、TC、TG、LDL水平,MCP-1和oxLDL水平,主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1 mRNA及蛋白表达量显著性升高(P<0.05);与模型组比较,二甲双胍组和梓醇组血清FBG、TC、TG、LDL水平,MCP-1和oxLDL水平,主动脉壁LOX-1、NF-κB p65、MCP-1 mRNA及蛋白表达量显著性降低(P<0.05)。结论梓醇可能通过oxLDL/LDL和NF-κB信号通路减轻T2DM大鼠大血管病变。