梨状皮层注射红藻氨酸建立癫痫小鼠模型

目的:建立和评价梨状皮层微量注射红藻氨酸(kainic acid,KA)激发的癫痫小鼠模型。方法:利用即刻早期基因(c-fos)免疫荧光染色技术、原位末端转移酶标记染色(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)技术在急性癫痫小鼠模型中确定癫痫相关脑区梨状皮层。在梨状皮层脑立体定位注射KA后,观察小鼠癫痫发作程度(Racine评分)和癫痫发作潜伏期,行为学实验包括水迷宫检测小鼠学习记忆能力和新物体识别实验检测小鼠探索能力,癫痫发作结果和行为学实验结果均与海马立体定位注射KA的癫痫模型作对比。利用电生理技术检测新模型小鼠神经元电活动。结果:c-fos免疫荧光和TUNEL染色结果显示,在急性癫痫小鼠模型中除海马外,梨状皮层脑区神经元也被大量激活,且发生凋亡;在梨状皮层注射KA后成功激发癫痫,与海马注射KA的癫痫模型相比,癫痫发作评分没有显著性差异且发作潜伏期更短;行为学结果显示,梨状皮层注射KA的癫痫模型小鼠空间记忆能力降低,新物体探索能力降低,该结果与海马注射KA的癫痫模型相比无显著性差异;膜片钳实验显示梨状皮层注射KA的癫痫模型神经元放电频率增加、幅值降低、静息膜电位上升。结论:在梨状皮层微量注射KA后成功激发癫痫,这为癫痫发病机制的研究提供了一种新的动物模型。

癫痫发作敏感大鼠前深梨状皮层T区神经病理观察

目的和方法 :采用颞叶癫痫红藻氨酸 (kainicacid ,KA)模型 ,制备癫痫发作敏感大鼠 ,并分别以硫瑾染色和GFAP(神经胶质原纤维酸性蛋白 ,glialfibrilaryacidicprotein)免疫组化方法检测前深梨状皮层T区 (areatempestas,AT)内神经元损伤及星形胶质细胞增生情况 ,并与经蝎毒 (scorpionvenom ,SV)处理后癫痫发作敏感性明显降低的大鼠进行比较。结果 :与对照组比较 ,癫痫敏感动物前深梨状皮层T区锥体细胞数目明显减少 ,GFAP免疫反应阳性星形胶质细胞数目明显增加 ,染色强度明显增强 ,(P <0 .0 5 )以剂量为 10 0mg kg 日的蝎毒给予动物连续灌胃三周 ,可明显降低其癫痫发作敏感性 (P <0 .0 5 ) ,而脑内梨状皮层T区锥体细胞脱失减轻 ,GPAP免疫反应活性未见明显增强。结论 :推测梨状皮层T区硬化 (神经元脱失 ,星形胶质细胞增生肥大 )

丙泊酚对发育期小鼠大脑梨状皮层神经前体细胞增殖的影响

目的探讨丙泊酚对新生小鼠大脑梨状皮层神经前体细胞增殖的影响。方法选取健康同窝、日龄为7 d(P7)的C57小鼠15只,按照随机数字表法分为3组:对照组,丙泊酚低剂量(30 mg/kg)组,丙泊酚高剂量(60 mg/kg)组,所有小鼠从P7开始接受药物处理。高、低剂量组分别腹腔注射丙泊酚60、30 mg/kg,对照组腹腔注射相同体积10%脂肪乳。药物处理后24 h(P8)腹腔注射Brd U 50 mg/kg,2 h后取材,采用免疫组织化学法检测梨状皮层细胞增殖标记物Brd U、Sox2及神经干细胞纤维突起标记物Nestin的表达。结果与对照组(42.67±2.41)比较,丙泊酚低剂量组(33.84±1.33)及高剂量组(25.17±1.73)新生小鼠大脑梨状皮层中Brd U+细胞数量明显减少;与低剂量组比较,高剂量组Brd U+细胞数量减少更明显(P<0.05);免疫组化结果显示:丙泊酚低剂量组Sox2标记的神经祖细胞数(558.94±29.85)较对照组(618.67±24.01)差异无统计学意义(P>0.05),但丙泊酚高剂量组(430.83±29.23)较对照组、丙泊酚低剂量组均减少(P<0.01,P<0.05)。丙泊酚低剂量组(24.73±0.69)与对照组(34.81±2.56)比较,Brd U-Sox2双标阳性细胞数量差异无统计学意义(P>0.05);但丙泊酚高剂量组(12.48±0.80)较对照组及丙泊酚低剂量组均减少(P<0.01,P<0.05)。免疫荧光染色结果显示:与对照组(1.00±0.00)比较,丙泊酚低剂量组(0.65±0.07)及高剂量组(0.60±0.08)Nestin标记的神经干细胞纤维突起灰度值降低,纤维分布稀疏且排列紊乱(P<0.01)。结论丙泊酚可抑制新生小鼠大脑梨状皮层神经前体细胞增殖,并呈一定剂量相关性。

高压氧治疗后血管性痴呆大鼠梨状皮层神经发生和血液供应变化

目的探讨血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠高压氧治疗后梨状皮层(piriform cortex,Pir)神经发生及血液供应情况。方法SD雄性成年大鼠分为正常组、血管性痴呆组(VD组)、血管性痴呆高压氧治疗组(HBO组;高压氧治疗10d),每组10只,CT灌注成像技术检测各组大鼠Pir区局部脑血流量(regional cerebral blood flow,rCBF)、局部脑血容量(regional cerebral blood volume,rCBV)和平均通过时间(mean transit time,MTT),穿梭箱系统检测大鼠学习记忆功能,免疫组化技术研究Pir区Nestin及doublecortin(DCX)表达情况。结果VD组较正常组大鼠Pir区CBF下降,CBV增加,MTT延长;HBO组较VD组Pir区CBF上升,局部CBV下降,MTT缩短;HBO组Pir区CBF、CBV、MTT各值与正常组接近;Pir区Nestin阳性细胞主要位于layerⅡ和layerⅢ,阳性表达强度:HBO组>VD组>正常组;Pir区DCX阳性细胞成条带状,主要位于嗅裂(rf)和杏仁裂(af)之间layerⅡ,阳性表达强度:正常组>HBO组>VD组;HBO组穿梭箱AAR比率(49.5±9.3)%较VD组(27.5±7.9)%显著增高(P<0.01);VD组大鼠AAR比率(27.5±7.9)%显著低于正常组(87.5±7.9)%(P<0.01)。结论高压氧治疗能够改善VD大鼠认知功能障碍并促进Pir区神经发生,此可能和高压氧治疗提高VD大鼠Pir区血液供应有关。

梨状皮层或苍白球损毁对大鼠空间认知能力的影响

在Ｍｏｒｒｉｓ迷宫中，梨状皮层或苍白球损毁大鼠的空间认知作业成绩较显著低于控制组，搜索目标以趋向式策略为主，与正常大鼠搜索策略的差异提示：①梨状皮层和苍白球参与了空间认知加工；②在图认知系统中梨状皮层和苍白球居辅助层次。

核因子-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐对毛果芸香碱诱导癫痫大鼠梨状皮层的保护性作用

目的观察核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)对毛果芸香碱诱导癫痫大鼠梨状皮层的保护性作用。方法将26只正常雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组(NS组,n=6)、毛果芸香碱诱导癫痫组(SE组,n=10)和PDTC干预组(PDTC组,n=10)。SE组一次性腹腔注射毛果芸香碱诱导大鼠癫痫发作;PDTC干预组分别于造模前24h、20min、SE发作后24 h腹腔注射PDTC 100mg.kg-1;NS组给予等量生理盐水。于造模成功后48h处死各组大鼠,采用Nissl染色和Fluoro-Jade C(FJC)染色法分别检测并比较各组大鼠梨状皮层存活神经细胞情况和退行性神经元数目。结果 Nissl染色结果显示,SE组大鼠梨状皮层大量神经细胞丢失,胞体结构完整性遭到破坏。FJG染色结果显示,SE组FJC阳性细胞数目明显增多;经PDTC干预后可明显改善梨状皮层神经损伤,FJC阳性细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDTC对毛果芸香碱诱导癫痫大鼠梨状皮层损伤具有明显的保护性作用。

饥饿促进嗅觉探索与梨状皮层神经细胞反应

目的:对嗅觉的处理和整合是形成嗅觉记忆的关键,本研究观察了饥饿状态下大鼠嗅觉探索行为变化和梨状皮层神经细胞活化的关系。方法:大鼠禁食48 h,嗅球注射荧光金,通过食物埋藏,检测大鼠嗅觉探索行为的变化。利用连续冠状切片,检测梨状皮层前部FG阳性细胞的数量,利用c-fos免疫荧光检测梨状皮层神经细胞活动状态。结果:饥饿促进了大鼠的嗅觉探索效能,梨状皮层FG阳性细胞及c-fos阳性细胞的数量明显高于对照组。结论:饥饿促进嗅觉探索行为和梨状皮层神经细胞活动及嗅球到梨状皮层投射增强有关。

丰富环境干预对小鼠梨状皮层锥体神经元兴奋性的影响

目的探讨丰富环境干预下的小鼠梨状皮层锥体神经元兴奋性的变化特点。方法选用15日龄的C57BL/6小鼠30只,随机分为丰富环境组(EE组)15只和常规环境组(SE组)15只,EE组采用丰富环境刺激饲养3周,SE组则在正常实验室环境下饲养3周。全细胞电流钳模式下记录小鼠梨状皮层锥体神经元的各电生理指标,锥体神经元的兴奋性指标包括动作电位间距(ISI)、能障(Vts-Vr)和绝对不应期(ARP)。结果与常规环境组比较,丰富环境干预下的小鼠梨状皮层神经元的ISI减小(P<0.05),Vts-Vr降低(P<0.05),ARP缩短(P<0.05)。结论丰富环境干预可提高梨状皮层锥体神经元的兴奋性,提示丰富环境可能有助于梨状皮层锥体神经元的发育成熟。

AD和MCI患者梨状皮层功能连接破坏——初步分析

目的:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)和轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)均存在嗅觉障碍,此点已经由病理学研究结果所证实。探索AD和MCI患者的嗅觉网络改变,并假设与正常人对比,患者的网络连接减低。方法:我们搜集21例MCI和15例AD患者作为研究对象,全体被试均完成嗅觉功能磁共振成像(fMRI)及梨状皮层功能连接(functional connectivity,FC)分析。结果:与对照组相比,所有患者在双侧梨状皮层与其他嗅觉相关脑区的连接均减低(ANOVA,P<0.001)。结论:嗅觉网络与情感处理相关,嗅觉网络的连接中断,是造成AD和MCI患者左侧偏侧化功能障碍的潜在原因。本研究结果提示嗅觉系统可作为AD诊断性生物标志物,并为其常见并发症(包括冷漠和快感缺失)提供证据。

梨状皮层功能的研究进展

梨状皮层(PC)是初级嗅觉皮层中最大的组成部分,并与许多大脑区域相连接。PC参与嗅觉、癫痫、学习与记忆、睡眠等功能,其具体机制虽有了一定的研究,但仍不能清楚的阐明。本文结合梨状皮层结构及其中枢神经功能进行综述,为进一步研究PC的中枢神经功能提供参考。

APC^(Glu)-IL通路在全身麻醉致意识消失与恢复中的作用

目的采用病毒显微注射、光遗传、麻醉行为学以及脑电记录等技术从神经环路的角度出发,阐明APC(前梨状皮层,anterior piriform cortex)-IL(侧前额叶下边缘皮层,infralimbic cortex)谷氨酸能通路对全身麻醉的调节作用,并初步探讨其作用机制。方法本研究使用健康雄性C57小鼠,其中6只使用1.4%异氟烷混合氧气(1.5 L/min)麻醉,构建顺行性示踪模型,建模成功后寻找其投射点位。健康C57小鼠16只,在APC处注射光遗传病毒并在IL处埋置光纤,安置脑电电极,建立光遗传学模型,建模成功后记录异氟烷与丙泊酚麻醉的行为学与脑电特征。结果APC处的谷氨酸神经元可以投射到IL处;激活APC^(Glu)-IL通路可延长异氟烷麻醉的诱导时间,减少麻醉特征脑电delta波的比例;但对于丙泊酚麻醉时间与脑电无影响。结论APC^(Glu)-IL通路可以延长异氟烷麻醉的诱导时间,但对丙泊酚麻醉时间无影响。

癫痫发作敏感大鼠T区Bcl-2蛋白表达变化

为探讨前深梨状皮层T区中Bcl- 2蛋白的表达变化在红藻氨酸诱导的癫痫发作敏感性长期增强中的作用,本研究以免疫组化方法检测癫痫发作敏感大鼠前深梨状皮层T区Bcl- 2蛋白表达变化,以硫堇染色观察神经元脱失情况,并与经蝎毒处理后癫痫发作敏感性明显降低的大鼠进行比较。结果显示:与对照组比较,癫痫发作敏感大鼠前深梨状皮层T区Bcl 2蛋白免疫反应阳性细胞数目明显减少,染色强度明显降低(P<0. 05),神经元数量明显减少;以剂量为100mg/ (kg·d)的蝎毒给予动物连续灌胃4周,可明显降低其癫痫发作敏感性(P<0. 05),脑内前深梨状皮层神经元脱失程度减轻,Bcl- 2蛋白免疫反应产物与对照组相比无明显变化。以上结果提示,前深梨状皮层T区Bcl- 2蛋白表达减少可能是癫痫发作敏感性长期增强的重要原因之一。

癫痫发作敏感大鼠T区κ型阿片受体和NR_(2B)表达变化

为探讨前深梨状皮层T区(AT)κ型阿片受体与N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚型(NR2B)表达在红藻氨酸(KA)诱导的癫痫发作敏感性长期增强中的作用。本研究采用颗叶癫痫(KA)模型,制备癫痫发作敏感大鼠,以免疫组化方法检测前深梨状皮层T区κ型阿片受体与NR2B表达变化,并结合行为学观察,与经蝎毒处理后癫痫发作敏感性明显降低的大鼠进行比较。结果显示,与对照组比较,癫痫发作敏感动物前深梨状皮层T区κ型阿片受体与NR2B免疫反应阳性细胞数目均明显减少,染色强度明显降低(P<0.05),以剂量为100 mg／(kg·d)的蝎毒(SV)给予动物连续灌胃4周,可明显降低其癫痫发作敏感性(P<0.05),丽脑内前深梨状皮层T区κ型阿片受体与NR2B免疫反应活性未见明显变化。以上结果提示:前深梨状皮层T区κ型受体免疫反应活性长期降低很可能是癫痫发作敏感性长期增强的重要原因之一,而NR2B免疫反应活性长期降低可能是一种对脑内神经元过度兴奋的代偿性内源性保护机制。

离心调控对嗅觉系统β振荡同步性的影响

通过戊巴比妥钠麻醉和Go/No-go气味辨别训练改变清醒小鼠的脑状态,探讨离心调控对同侧的嗅球和前梨状皮层之间β振荡同步性的影响.研究结果表明:相对于清醒状态,麻醉和训练后自发β振荡的同步性分别有所下降和上升;此外,麻醉后气味诱发β振荡的同步性有所下降,而训练后气味诱发β振荡的同步性受到气味意义的影响.结果提示,离心纤维投射可以动态地调控嗅球和前梨状皮层之间β振荡的同步性,这对进一步认识大脑的功能活动有一定的帮助.

肥胖型2型糖尿病模型嗅觉功能影响及其病理变化研究

目的探究肥胖型2型糖尿病模型小鼠嗅觉系统PV神经元的病理变化及对嗅觉功能的影响。方法应用嗅觉行为学实验检测6只不同年龄段乩/dh小鼠(实验组)及W T小鼠(对照组)的嗅觉感知能力;用免疫印迹观察梨状皮层及嗅球PV神经元PV蛋白的表达情况。结果成功找到食物的时间对照组和实验组第8w差异无统计学意义(P>0.05),第9-11w实验组显著长于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。11周龄时,梨状皮层PV蛋白表达实验组显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.0l),嗅球PV蛋白表达实验组显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论dh/db小鼠在发病早期(9周龄)已出现嗅觉障碍;肥胖型2型糖尿病梨状皮层PV蛋白和嗅球PV蛋白表达存在不同的病理变化。

嗅觉脑功能成像检测嗅觉功能损害在阿尔茨海默病早期诊断中的作用

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)目前是一种较为常见、预后较差的慢性老年病,其临床表现为进行性的智能损害。全球约有3390万AD患者[1],65岁以上的AD患病率约为5%,年龄每增长5岁患病率增加约1.85倍,随着人口老龄化问题的加剧,在50年后AD的发病率可能提高3倍,患者可达1亿人,