内蒙古地区传统发酵酸马奶不同发酵时期乳清蛋白SDS-PAGE分析

[目的]探究内蒙古地区传统酸马奶发酵过程中乳清蛋白的变化情况。[方法]以从内蒙古锡林郭勒盟镶黄旗采集的马奶为原料制备传统发酵酸马奶,发酵温度为(22±2)℃,人工捣拌频率5次/d,每次300下;每隔12 h采集1次发酵0~96 h的酸马奶样品;离心提取酸马奶乳清蛋白样品,利用条件优化后的SDS-PAGE电泳技术分析酸马奶乳清蛋白在发酵过程中变化情况。[结果]优化后的SDS-PAGE电泳分析条件为:分离胶浓度12%,浓缩胶浓度5%,分离胶电泳电压180 V、电泳时间300 min,上样浓度0.5μg/μL,上样体积16μL,改良考马斯亮蓝法染色、脱色各12 h。在发酵0~12 h内,酸马奶乳清蛋白含量增加,在12 h时达到最高值(5.12μg/μL),之后随发酵时间延长呈下降趋势,发酵96 h时降低至3.92μg/μL。SDS-PAGE电泳图谱分析显示,在分子量10~70 kDa区间内共获得乳清蛋白有效条带13个。在发酵过程中,β-乳球蛋白、溶酶菌C和α-乳白蛋白3种蛋白质含量呈现不同程度的波动,发酵72 h时三者含量之和最高,占乳清蛋白总含量的85.73%,并且在发酵过程中始终保持较高水平,是传统发酵酸马奶发酵96 h内乳清蛋白的主要组分,其中,β-乳球蛋白含量最高,平均占乳清蛋白总含量的38.92%。分子量在20~40 kDa的酪蛋白含量在发酵24 h之后开始下降,至60 h时条带消失。分子量为10.33 kDa的蛋白质在发酵12 h内被消耗,60 h时再次出现且含量随发酵时间延长逐渐增加,在84 h时达到峰值,占乳清蛋白总含量的9.84%。分子量为49.80 kDa的蛋白质在发酵72 h之后开始出现,含量在96 h时达到乳清蛋白总含量的4.11%。与其他乳清蛋白组分相比,β-乳球蛋白和免疫球蛋白含量在发酵过程中变化较小。[结论]内蒙古地区传统发酵酸马奶在发酵96 h内,分子量为10~70 kDa的乳清蛋白含量表现出有规律的消长,主要被消化分解的蛋白质是酪蛋白。不同发酵阶段酸马奶乳清蛋白组成及含量存在一定差异,但原有主要组分β-乳球蛋白、溶酶菌C和α-乳白蛋白始终保持较高水平。自发酵中期开始,酸马奶乳清蛋白中相对分子质量较小的肽(10.33 kDa)所占比例逐渐升高,由此可见,传统发酵酸马奶中不仅保留马奶中乳清蛋白原有的营养价值,而且通过发酵还增添了易吸收的小分子量蛋白质。

SDS-PAGE凝胶电泳对驴皮胶及常见伪品胶中的蛋白分析研究

目的:研究驴皮胶及常见伪品胶马皮胶和牛皮胶的蛋白凝胶电泳行为。方法:自制3种皮胶,计算出胶率,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白含量,计算上样量,使上样量为20~30μg。垂直电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳,采用考马斯亮蓝及银染法显色。结果:3种皮胶的凝胶电泳行为相似,蛋白成分主要集中在分子量大于25 kDa段上,银染法灵敏度更高,可显示较多条带。结论:3种皮胶分子量分布宽泛,具有共同的条带,进一步可用多肽蛋白质谱鉴定技术对各混合物组分进行更深入分析。

不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对双向电泳中蛋白分离的影响

目的:探讨双向电泳中不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对肠道菌蛋白分离效果的影响。方法:制备弗氏2a志贺菌2457T野生株37℃晚期全菌蛋白质样品,进行不同浓度及梯度的SDS-PAGE,研究分离肠道菌蛋白最适宜的SDS-PAGE胶浓度。结果:获得了3个不同浓度(10%、12.5%和15%)的均一胶电泳图谱和3个不同梯度(4%～15%、10%～20%和12%～14%)的电泳图谱,并比较了这些图谱的分离效果;同时,为了分析肠道菌天然表达蛋白的相对分子质量范围,鉴定了8个极端相对分子质量蛋白。结论:对于肠道菌蛋白质的分离来说,12.5%的均一胶或12%～14%的梯度胶较为适宜。

不同SDS-PAGE分离胶浓度条件下大豆贮藏蛋白亚基的分辨效果

采用SDS-PAGE浓缩胶浓度为5%,分离胶浓度分别为9%、10%、11%、12%、13%的凝胶系统,探讨不同分离胶浓度条件下大豆籽粒主要贮藏蛋白(7S和11S组分)亚基的分辨效果。结果表明,分离胶浓度大小对大豆贮藏蛋白(7S和11S组分)亚基电泳图谱分辨率的影响非常明显。分离胶浓度为9%和10%时,7S组分亚基(α′、α和β)分辨效果较好;分离胶浓度为13%时,11S组分各亚基(A3、A4A2、A1aA1b、A5、B3、B1aB1bB2和B4)分辨效果较好。如需获得较好的7S和11组分亚基综合分辨效果,以分离胶浓度为12%的凝胶系统为佳。

木本植物蛋白提取和SDS-PAGE分析方法的比较和优化

在几种木本植物上对４种常用蛋白提取方法、４种凝胶染色和脱色方法及影响蛋白定量和ＳＤＳＰＡＧＥ电泳的因素进行了比较研究，发现：利用改良丙酮沉降法提取蛋白，不仅提取效率高，而且杂质干扰少，得到的电泳结果，蛋白条带清晰，数量多；将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为甲醇可大大改善染色和脱色效果，获得了没有背景或背景很浅的电泳结果。通过研究确定了一套优化的适用于木本植物的蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色、脱色以及干胶制备的方法。利用这一优化方法对胡杨细胞盐胁迫蛋白进行了研究，发现了与高水平盐胁迫有关的６６ｋＤ蛋白和与盐胁迫和干旱胁迫均有关的２８ｋＤ蛋白，获得了满意的蛋白ＳＤＳＰＡＧＥ分析结果。

适于SDS-PAGE分析的苹果叶片蛋白质提取方法

为探索苹果叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl法、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法及Tris-HCl法等5种蛋白质的提取方法。制备的样品经SDS-PAGE分离采用银染显色。结果表明,改良的Tris-HCl法在加大PVPP用量和蛋白质提取缓冲液的基础上,将丙酮沉淀蛋白质的时间由30 min增加到1 h,使蛋白质的得率最高为3.243μg/μL,上样量5μL得到的蛋白质条带数量最多,条带最清晰为41条。利用这一改良方法对苹果实生树不同节位蛋白质的动态变化进行了研究,共发现6条蛋白质差异带,分子量分别为71.9,60.5,52.6,41.1,35.3,18.5 kDa,条带清楚,背景清晰。因此,改良的Tris-HCl法适用于苹果叶片的SDS-PAGE分析。

燕麦麸蛋白质的Osboren分类及SDS-PAGE电泳分析

根据微量凯氏定氮法测定了燕麦麸中蛋白质含量,40～60目之间的燕麦麸蛋白质含量最高,平均为19.42%;并对其进行Osboren蛋白质分类以及分类后各类蛋白质组分含量的测定,结果表明,燕麦麸中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白占蛋白质总量依次为63.40%、15.18%、8.18%、13.24%。SDS-PAGE电泳分析各类蛋白的组成结果表明,燕麦麸中清蛋白含量最高且蛋白质亚基分布广泛。清蛋白必需氨基酸含量高,溶解性好,易于消化吸收,为优质的营养蛋白。

苹果实生树阶段转变特异蛋白质的SDS-PAGE分析

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（SDS—PAGE）分析了6株苹果实生树（‘红玉’ב金冠’）叶片中蛋白质随节位升高的动态变化。结果表明，随节位升高蛋白质带发生变化，共发现了3条阶段转变特异蛋白质带，分子量分别为55kD、19kD和17kD。其中55kD蛋白质表现为定性变化，有5株实生树在36～75节出现，到101～126节消失；19kD蛋白质在实生树低节位含量高，在86—100节之后含量突然降低；17kD蛋白质在实生树低节位含量低，随着植株的发育蛋白质在36—50节含量突然增加并保持稳定，到91～105节后含量突然下降。认为这3种蛋白质是苹果实生树阶段转变的特异蛋白质。

牛初乳、常乳和免疫乳乳清中主要蛋白的SDS-PAGE分析

采集荷斯坦奶牛初乳、常乳和免疫乳，通过SDS—PAGE电泳对其乳清中的主要蛋白进行分析。结果表明：从SDS—PAGE电泳图谱上可见有5个清晰的条带，自上而下分别为乳铁蛋白、牛血清白蛋白、IgG重链、β-乳球蛋白和α-乳白蛋白。其中32d免疫乳和0～3d初乳可见有IgG轻链，其他乳样IgG轻链条带较弱。0-7d初乳乳清蛋白含量随泌乳天数的增加而逐渐下降，0～5d初乳乳清蛋白含量差异显著，并维持较低水平。免疫乳15和32d各乳清蛋白含量均高于常乳。

HMW-GS的SDS-PAGE图谱在小麦品质评价中的应用

采用SDS-PAGE技术对陕西关中地区各时期大面积推广小麦品种、品种资源和新品系的HMW-GS组成进行了分析.在该地区50多年大面积推广的33个品种中,检测出9种HMW亚基 对 及其组成;品种HMW-GS的评分在5～10分之间,平均6.9分;4个时期品种HMW-GS的平均评分有升有降,优质亚基出现的频率普遍偏低;向小麦品种中聚合多种优质HMW-GS将成为陕西关中未来小麦育种的主要目标之一.53种小麦品种资源的亚基或亚基对组合类型比较丰富,具有一批携带优质亚基5+10、1、2*、7+8、14+15或17+18等资源.8个新选品系中,有4个品系携带了多种优质亚基,其中3个品系HMW--GS的评分为10分;Q1043已被审定通过,目前正在陕西关中推广种植.实践证明,采用SDS-PAGE方法对生产上推广品种、品种资源和新选品系的HMW-GS变异研究,有助于在短时间内了解生产上推广小麦品质生产现状、制订育种目标、选配亲本和品系品质性状筛选,是一种非常实用的品质快速检测方法.

利用SDS-PAGE鉴定水稻品种(组合)的真实性和纯度

利用本实验室完善后的SDS-PAGE,分析了8个水稻品种(组合)的贮藏蛋白,结果表明,品种(组合)间贮藏蛋白带谱表现出明显的多态性;并在实际检验工作中,运用水稻品种(组合)贮藏蛋白SDS-PAGE带谱的多态性,进行了种子的真实性或纯度鉴定。

鸭病毒性肠炎病毒的提纯及其结构蛋白SDS-PAGE分析

将鸭病毒性肠炎病毒（DEV）分离株SC-1经鸭胚成纤维细胞培养增殖后，采用差速离心结合蔗糖不连续密度梯度离心法进行提纯，获得多量、纯净的完整病毒粒子。病毒粒子主要位于40％～50％蔗糖层交界处，电镜下可观察到DEV具有典型的疱疹病毒特征，完整病毒粒子由囊膜、衣壳和核芯3个部分组成，直径为170～190nm。将纯化的DEV粒子经SDS—PAGE分析，发现其结构蛋白由11种多肽组成，即VP1（190000）、VP2（136000）、VP3（106000）、VP4（88000）、VP5（75000）、VP6（68000）、VP7（56000）、VP8（48000）、VP9（42000）、VP10（38000）和VP11（32000）．其中VP1、VP2、VP3、VP6、VP8和VP9等6条蛋白区带的相对百分含量较高，约占病毒结构蛋白总量的89．04％，为DEV的主要结构多肽。

肉苁蓉属4种肉苁蓉可溶性蛋白的SDS-PAGE电泳分析

目的对肉苁蓉属4个种进行鉴别。方法采用可溶性蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳。结果肉苁蓉属4个种的SDS-PAGE图谱存在显著差异,其多态性条带为81.82%。结论各个种的电泳图谱可以相互区别,肉苁蓉属可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱可作为种间鉴定的蛋白指纹图谱。

SDS-PAGE电泳技术分析蛋白质的研究

SDS-PAGE是分析蛋白质的一项技术,重点介绍了其原理、凝胶制备及染色方法,并对双向电泳(2-DE)和电泳后蛋白质鉴定方法进行了简单的介绍。

贵重动物类中药材蛋白质SDS-PAGE的图谱研究

目的:为贵重动物类中药材的真伪鉴别提供科学的依据。方法:用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定人工牛黄、鹿蹄筋、蝮蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇及其伪品的主要蛋白质分子量。结果:获得清晰的电泳谱带及相应数据。结论:方法准确、可靠、重复性好,可为蛇类药材、人工牛黄、鹿蹄筋及其制剂的生产、质量控制提供参考。

多倍体麦类作物Wx蛋白检测的SDS-PAGE方法

本文通过对小麦蜡质蛋白的实验和研究 ,详细论述了蜡质蛋白的特性、提取原理、电泳原理和检验原理。对多倍体麦类作物Wx蛋白亚基的检测 ,提出了应用效果良好的电泳系统 ,并就提取方法、凝胶配方和操作步骤进行了描述。本文还列出了部分麦类作物蜡质蛋白亚基基本模式示意图和实验例证 ,具有很好的参考价值。

利用SDS-PAGE法检测火腿肠中大豆蛋白的含量

利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结合凝胶成像来分析测定火腿肠中大豆分离蛋白的含量.试验得出电泳分离肉制品中大豆分离蛋白的优化条件为：浓缩胶为5%、分离胶为12%、上样量为20μL、初始电压为80 V,进入分离胶层后电压100 V.大豆蛋白含量在06%范围内与其酸性A3亚基线性相关,回归方程为Y=2.760 9X-0.383 8,相关系数为0.994 1.

棉叶总蛋白提取及SDS-PAGE电泳的改良

对棉花叶片总蛋白的几种提取方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较,确立了一套适用于棉花蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、脱色以及干胶制备的方法。发现利用25mmol·L1,pH8.0Tris-HCl缓冲液提取的棉花叶片总蛋白,提取效率高,蛋白齐全。采用改良后的棉花SDS-PAGE电泳方法—改良丙酮沉降法,电泳结果显示,条带清晰、数量多、分辨率高。

SDS-PAGE染色-脱色方法的改良

在传统的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）技术的基础上，对制备的凝胶进行快速染色-水洗脱色及提高灵敏度的探讨，建立改良的SDS—PAGE染色一脱色法。与传统的方法比较，快速法在不影响检测灵敏度的情况下，大大缩短了分析所需时间，整个分析过程只需40～60min，并且降低了实验成本，有重要的推广价值。提高灵敏度法可检测到0．1～0．5μg蛋白／条带。

小麦谷蛋白聚合体的MS-SDS-PAGE及其与面包烘烤品质的关系

选用品质 (微量 SDS沉淀值、稳定时间 )优劣不同的 10个“931116 8/ / / 81831- 1/ pernell/ /京 4 11”的 F6 品系 ,探索多层浓缩胶 SDS- PAGE(MS- SDS- PAGE)的实验方法 ,初步探讨可溶性谷蛋白的分子量分布状况和不溶性谷蛋白(GMP)与面包烘烤品质的关系。结果表明 ,通过 SDS-磷酸缓冲液可将谷蛋白聚合体分成两部分 :分子量较小的 SDS-可溶性谷蛋白聚合体和分子量较大的 SDS-不溶性谷蛋白聚合体 (GMP) ;多层浓缩胶 SDS- PAGE可用于分析可溶性谷蛋白的含量及其分子量分布。总蛋白含量相当时 ,随着醇溶蛋白含量的降低 ,谷蛋白含量增加 ,小麦品质 (微量 SDS-沉淀值、稳定时间 )变优。品质优良材料的 GMP、分子量较大的可溶性谷蛋白的比例高于品质差劣的材料。仅靠蛋白质及其组分的含量、 HMW- GS组成进行品质评价是不够全面的 ,结合谷蛋白聚合体的组成和含量进行评价和选择育种 。