白血病NPM1基因突变快速检测与分型方法的研究

目的:建立一种通过荧光探针熔解曲线分析技术对急性髓系白血病(AML)中NPM1突变基因快速检测和分型的方法。方法:设计Nucleoplasmin(NPM1)第12号外显子突变基因mut A、mut B、mut D和野生型的一对共用引物和一条荧光单链探针(分子信标),依据PCR产物与探针的熔解曲线峰值对A、B、D型基因突变进行检测与分型。结果:本方法可对NPM1的A、B、D型基因突变和野生型进行有效分型,灵敏度为1%。通过对62份AML临床样本进行检测,本方法的检出率、分型结果与临床样本测序信息一致。结论:本研究建立的NPM检测方法,PCR体系简单稳定,操作便捷,结果易于判读,可以与测序法互为补充作为AML早期诊断或伴随诊断的NPM1突变快速检测分型方法。

PCR相关的分子生物学技术在军团菌检测与分型中的应用

军团菌广泛存在于自然淡水和人工水体中,容易形成气溶胶,引起人类呼吸道急性感染,形成军团菌病。军团菌病是一种隐性感染率和病死率较高的传染病,对人们健康构成严重威胁,快速准确地确定病原是确诊和控制军团菌病的关键。相对于传统细菌培养分离法,PCR等分子生物检测技术更快速,敏感性和特异性更高,本文就目前在聚合酶链反应基础上开展的军团菌检测、鉴定及分型的方法的研究和应用作简要综述。

CRISPR在食源性致病菌进化分析、检测分型及毒力耐药调控中的应用进展

规律成簇间隔的短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)与其相关蛋白基因系统可通过限制基因的水平转移而有效防御噬菌体等外源基因元件的入侵,不同细菌之间的CRISPR结构有所差异。基于CRISPR系统的差异性,文中对近几年CRISPR在食源性致病菌进化分析、检测与分型、毒力与耐药中的应用研究进行概述,并对基于CRISPR序列特点开发的细菌检测分型方法以及CRISPR与食源性致病菌的毒力、耐药性之间的相关性进行重点总结分析。此外,文中探讨了CRISPR在进化分析、检测与分型、毒力与耐药应用中的不足,提出将CRISPR分型方法标准化、完善与扩充致病菌CRISPR数据库、进一步探究噬菌体与细菌之间的共进化关系等建议,为进一步探索CRISPR功能提供参考。

MALDI-TOF MS技术在传染病诊断中的应用进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)作为新兴的检测手段已被广泛应用于临床微生物实验室.相比传统基于表型的检测方法,如形态学、血清学及生化检测,MALDI-TOF MS可在短时间内对待测微生物进行物种鉴定及耐药表型分析,简化了操作流程.多项研究表明,MALDI-TOF MS在病原生物学领域具备较大的应用潜能,通过分析分子或离子的质荷比以识别或量化待测物,适用于多种类别分子的检测.依据检测靶标的不同,本文将从蛋白质与核酸两方面系统综述该技术在传染病诊断中的应用进展.