目的探讨小干扰核糖核酸(siRNA)沉默Chk1基因表达对肺腺癌A549细胞顺铂敏感性的影响。方法分组培养肺腺癌A549细胞,采用Chk1 siRNA沉默细胞中Chk1表达,Western Blot法检测肺腺癌A549细胞中Chk1蛋白表达,流式细胞术分析沉默Chk1基因对肺...目的探讨小干扰核糖核酸(siRNA)沉默Chk1基因表达对肺腺癌A549细胞顺铂敏感性的影响。方法分组培养肺腺癌A549细胞,采用Chk1 siRNA沉默细胞中Chk1表达,Western Blot法检测肺腺癌A549细胞中Chk1蛋白表达,流式细胞术分析沉默Chk1基因对肺腺癌A549细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果Chk1蛋白在肺腺癌A549细胞中高表达,转染siRNA后Chk1蛋白表达水平明显降低。与对照组比较,顺铂组Chk1蛋白表达减少,但差异无统计学意义( P >0.05);Chk1 siRNA组和联合组Chk1蛋白表达明显降低( P 均<0.05);联合组Chk1蛋白表达明显低于顺铂组( P <0.05)。正常培养的肺腺癌A549细胞以G 0/G 1期为主,顺铂组和联合组肺腺癌A549细胞出现明显的G 2/M期阻滞,S期、G 2/M期细胞比例较对照组和Chk1 siRNA组明显增多( P 均<0.05),而联合组S期、G 2/M期细胞比例又低于顺铂组( P 均<0.05)。联合组、Chk1 siRNA组及顺铂组早期凋亡细胞数和晚期凋亡细胞数均高于对照组( P 均<0.05);联合组与Chk1 siRNA组及顺铂组比较,早期凋亡细胞数和晚期凋亡细胞数增多( P 均<0.05)。结论SiRNA沉默Chk1基因可明显消除顺铂引起的肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡,增强肺腺癌对顺铂化疗的敏感性。展开更多
目的观察ATM蛋白激酶-检测点激酶2(ATM-Chk2)通路在氟抑制大鼠曲细精管上皮支持细胞增殖中的作用。方法将18日龄SPF级雄性SD大鼠曲细精管上皮支持细胞分别暴露于含0(对照)、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠的血清培养基。分...目的观察ATM蛋白激酶-检测点激酶2(ATM-Chk2)通路在氟抑制大鼠曲细精管上皮支持细胞增殖中的作用。方法将18日龄SPF级雄性SD大鼠曲细精管上皮支持细胞分别暴露于含0(对照)、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠的血清培养基。分别于染毒24、48、72 h,采用MTT法测定支持细胞的增殖情况;于染毒24 h,采用实时荧光定量PCR技术检测支持细胞内ATM、Chk2 m RNA的表达水平。结果与对照组比较,染毒24、48、72 h时,4.00 mmol/L氟化钠染毒组大鼠曲细精管上皮支持细胞的抑制率均较高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氟化钠染毒剂量的升高和染毒时间的延长,氟对曲细精管上皮支持细胞的抑制率均呈上升趋势。与对照组比较,1、2 mmol/L氟化钠染毒组曲细精管上皮支持细胞ATM和Chk2 m RNA的表达水平均升高,而4 mmol/L氟化钠染毒组ATM和Chk2 m RNA的表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氟化钠染毒剂量的升高,曲细精管上皮支持细胞ATM、Chk2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。结论不同剂量氟抑制生殖细胞增殖可能是通过干扰曲细精管上皮支持细胞中DNA损伤检验点ATM、Chk2的表达而实现的。展开更多
文摘目的探讨小干扰核糖核酸(siRNA)沉默Chk1基因表达对肺腺癌A549细胞顺铂敏感性的影响。方法分组培养肺腺癌A549细胞,采用Chk1 siRNA沉默细胞中Chk1表达,Western Blot法检测肺腺癌A549细胞中Chk1蛋白表达,流式细胞术分析沉默Chk1基因对肺腺癌A549细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果Chk1蛋白在肺腺癌A549细胞中高表达,转染siRNA后Chk1蛋白表达水平明显降低。与对照组比较,顺铂组Chk1蛋白表达减少,但差异无统计学意义( P >0.05);Chk1 siRNA组和联合组Chk1蛋白表达明显降低( P 均<0.05);联合组Chk1蛋白表达明显低于顺铂组( P <0.05)。正常培养的肺腺癌A549细胞以G 0/G 1期为主,顺铂组和联合组肺腺癌A549细胞出现明显的G 2/M期阻滞,S期、G 2/M期细胞比例较对照组和Chk1 siRNA组明显增多( P 均<0.05),而联合组S期、G 2/M期细胞比例又低于顺铂组( P 均<0.05)。联合组、Chk1 siRNA组及顺铂组早期凋亡细胞数和晚期凋亡细胞数均高于对照组( P 均<0.05);联合组与Chk1 siRNA组及顺铂组比较,早期凋亡细胞数和晚期凋亡细胞数增多( P 均<0.05)。结论SiRNA沉默Chk1基因可明显消除顺铂引起的肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡,增强肺腺癌对顺铂化疗的敏感性。
文摘目的观察ATM蛋白激酶-检测点激酶2(ATM-Chk2)通路在氟抑制大鼠曲细精管上皮支持细胞增殖中的作用。方法将18日龄SPF级雄性SD大鼠曲细精管上皮支持细胞分别暴露于含0(对照)、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠的血清培养基。分别于染毒24、48、72 h,采用MTT法测定支持细胞的增殖情况;于染毒24 h,采用实时荧光定量PCR技术检测支持细胞内ATM、Chk2 m RNA的表达水平。结果与对照组比较,染毒24、48、72 h时,4.00 mmol/L氟化钠染毒组大鼠曲细精管上皮支持细胞的抑制率均较高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氟化钠染毒剂量的升高和染毒时间的延长,氟对曲细精管上皮支持细胞的抑制率均呈上升趋势。与对照组比较,1、2 mmol/L氟化钠染毒组曲细精管上皮支持细胞ATM和Chk2 m RNA的表达水平均升高,而4 mmol/L氟化钠染毒组ATM和Chk2 m RNA的表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氟化钠染毒剂量的升高,曲细精管上皮支持细胞ATM、Chk2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。结论不同剂量氟抑制生殖细胞增殖可能是通过干扰曲细精管上皮支持细胞中DNA损伤检验点ATM、Chk2的表达而实现的。
