丙型肝炎病毒抗体快速检测试剂国家参考品的研制

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)为单股正链RNA病毒,主要通过血源性传播,呈全球性流行趋势,不同性别、种族及年龄对HCV均易感[1]。有数据显示,目前全球患有丙型肝炎的人数为1.85亿,我国人群的感染率为3.2%[2]。丙型肝炎发病隐匿,慢性化程度高,可导致肝硬化甚至肝癌[3-4]。

乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品的研制

目的建立乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对24份病原体培养物的复核、确证,全基因组测序及基因分型,组成乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室的协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品由10份阴性、14份阳性、1份最低检出限和1份精密度样品组成。质量标准为10份阴性参考品应均检出阴性;14份阳性参考品应至少检出13份阳性;精密度考品重复检测10次,要求均为乙型脑炎病毒阳性,且其检测值的CV应不大于5.0%;最低检出限参考品要求1∶102倍稀释及以上浓度时应为乙型脑炎病毒阳性。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论该参考品可用作乙型脑炎病毒核酸检测试剂的质量控制及评价。

生物检测试剂保藏技术研究进展

生物检测试剂的扩增性能,尤其是酶试剂的生物活性对荧光定量PCR等的检测结果起决定性作用。采用不同的保藏技术对维持检测试剂的生物活性,实现生物检测试剂室温条件下长时间稳定保藏与非冷链运输,保证检测结果的稳定性、准确性、特异性和灵敏度等至关重要。针对低温保藏技术、真空冷冻干燥技术、喷雾干燥技术以及玻璃化冷冻技术4种不同保藏技术的研究进展进行了综述,在应用中总结优缺点,以期对后续相关工作的开展提供一定的科学依据。

肿瘤标志物定量检测试剂监管现状及技术审评关注点介绍

肿瘤标志物定量检测试剂是目前临床应用极为广泛的一类试剂。该类试剂种类多,已上市、正在申报中以及处于开发阶段的全新产品数量也极为丰富。本文旨在系统性地对该类产品的监管现状进行阐述;同时,在参照当前相关法规及适用技术文件的基础上,结合相关审评经验,详细介绍该类试剂注册申报资料中常见的审评关注点,为相关人员提供参考。

布鲁菌IgM/IgG抗体检测试剂性能评估技术审评关注点

从技术审评的角度,简述布鲁菌IgM/IgG抗体检测试剂注册申报资料中产品风险管理、原材料的研究、企业参考品的设置、生产工艺及反应体系的研究、分析性能评估及阳性判断值确定等章节的关注点,包括研究方法及质量控制要求等,以便提高产品研发效率,推动行业发展。

体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性分析

目的探讨体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性。方法采用6周龄BALB/c小鼠进行抗原免疫,构建杂交瘤细胞并克隆。采用动物体内诱导单克隆抗体的方法大量制备单克隆抗体,分别采用G柱亲和层析、蓝胶+Q柱离子交换层析两种方法进行纯化,核酸蛋白检测仪记录波长280 nm下的光密度(optical density,OD),紫外分光光度计测量成品浓度。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测该阻断剂(CN302)对假阳性样本的阻断能力。结果G柱亲和层析法提取阻断剂的收率(3个批次分别为6.49、6.12、6.27 g/L)高于蓝胶+Q柱离子交换层析法(3个批次分别为1.78、1.68、1.61 g/L)。两种纯化方法的纯度均高达95%以上。G柱亲和层析法、蓝胶+Q柱离子交换层析法所得阻断剂的活性分别为106.54%、92.45%;与空白组相比,两种纯化方式所得阻断剂CN302对假阳性样本的检出率均降低,其OD值均小于0.2,与基准阻断剂大致相同。G柱亲和层析法所得阻断剂CN302未冻融的活性为99.86%,冻融5次后活性为99.83%。无阻断剂存在时,对假阳性样本检测的OD值约为2.5,最高可达到4.0;加入阻断剂后,OD值明显降低;阻断剂CN302对假阳性样本检测的OD值低于其他阻断剂。结论本研究所得阻断剂能显著消除样本内源性干扰,且活性几乎全部保留。G柱亲和层析法提取抗体的收率和阻断能力均高于蓝胶+Q柱离子交换层析法。

草莓农药残留快速检测试剂盒的农药敏感性及检测准确度

为草莓中常见农药残留的快速筛查提供技术支撑,比较5种有机磷和氨基甲酸酯类快检试剂盒产品对草莓样品中的敌敌畏、马拉硫磷、克百威、灭多威4种农药的敏感性及其检测结果准确度。结果表明:5种有机磷和氨基甲酸酯类快检产品的一般性指标均满足要求,其中,试剂盒A(贵州国芯生物技术有限公司)为5种试剂盒中最优产品,检出限能满足《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》的要求,在检出限下,可检出克百威、灭多威、敌敌畏3种农药,且5种试剂盒对敌敌畏检出的准确度较高,未出现假阳性现象。但目前试剂盒速检法仅限于检测有机磷类、氨基甲酸酯类两种农药,检测范围较小,还需进一步探索农药残留快速检测技术。

人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒国家监督抽检质量分析

目的:评价国内不同使用环节的人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的质量现状。方法:依据企业产品技术要求,对准确性、特异性、检测限、精密度4个项目进行检验。同时,以国家参考品和细胞质控品为样品,进行探索性研究。结果:本次国家监督抽检共抽检15批次产品,其中13批次的准确性、特异性、检测限和精密度检测结果均符合要求,2批次结果因质量控制不符合要求判定为不合格,抽检合格率为87%。探索性研究结果显示,以国家参考品为样品进行评价,6批次试剂盒未能满足检测限要求;以9种不同型别的高、低浓度细胞质控品为样品进行评价,各试剂检测高浓度样品符合率较高,检测低浓度样品符合率较低。结论:企业需进一步规范和完善产品技术要求,改进和完善企业参考品和产品的设计,建议采用国家参考品优化检测限标准。

白喉棒杆菌核酸检测试剂用国家参考品的研制

目的:研制白喉棒杆菌核酸检测试剂用国家参考品。方法:将6株白喉棒杆菌和10株非白喉棒杆菌代表性菌株在各自适宜的环境下培养,经菌株鉴定后,制备灭活菌液,对候选参考品进行均匀性和稳定性的评估以及准确性、特异性、重复性和最低检出限的验证研究,并组织3家实验室进行协作标定。结果:研制出白喉棒杆菌核酸检测试剂用候选参考品,由6个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品组成。证实该候选参考品均匀性及稳定性良好,准确性、特异性及重复性好,最低检出限可达1.0×10~3~1.0×10~4个菌·m L^(-1)。协作标定结果也进一步表明阳性、阴性、重复性和最低检出限候选参考品均符合国家参考品的各项要求。结论:研制出的白喉棒杆菌核酸检测试剂参考品,可用于相关试剂盒的质量控制和评价。

伦理关怀视角下的核酸检测试剂盒改良设计

目的在疫情常态化背景下,为避免核酸检测试剂盒在使用与回收周期中,对传染源处理不当造成二次污染,因此进行试剂盒改良设计,以构建良好的伦理关怀关系。方法首先分析了当下核酸检测产品所存在的弊端,获取功能需求,确定了所属设计类型,运用AD理论对功能需求进行分解,然后对初步设计方案进行耦合判断,运用TRIZ进行解耦,最终得到设计方案。结果采用集成AD和TRIZ的设计方法,从伦理关怀的视角下,对核酸检测试剂盒的安全消毒模块进行设计,将核酸检测试剂盒改良为一体化结构,并增添消毒灭菌模块,最终设计方案可有效解决二次污染问题并实现伦理关怀。结论方案通过集成AD和TRIZ的设计方法,从功能结构上对核酸检测试剂盒进行改良设计,解决了现有产品存在的诸多问题。在设计中注重产品使用感受,帮助人们在使用产品时舒缓紧张感并构建信任,同时为产品新功能模块的创新设计提供思路和参考。

乙型肝炎病毒RNA检测试剂国家参考品的研制

目的:研制乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)RNA检测试剂国家参考品并制定其质量标准。方法:收集并筛选HBV RNA阳性和阴性血浆样本,制备HBV RNA候选参考品。采用不同企业的试剂进行协作标定,根据协作标定结果确定参考品的组成及制定质量标准,并考察其均匀性和稳定性。结果:HBV RNA检测试剂国家参考品由10份阳性参考品,10份阴性参考品,1份精密度参考品和1份灵敏度参考品组成。其质量标准:阳性参考品符合率为10/10;阴性参考品符合率为10/10;精密度参考品稀释10倍后重复检测10次,要求CV≤5%;最低检测限不高于2.1×10^(3)U·mL^(-1)。该参考品均匀性符合要求,室温(25℃)放置3 d、反复冻融3次均未影响参考品的稳定性。结论:研制了首批HBV RNA检测试剂国家参考品并制定了质量标准,为相关试剂的质量控制和评价提供依据。

HIV区分抗原抗体检测试剂指导下的HIV确证流程优化

目的探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)区分抗原抗体检测试剂对HIV确证流程的指导意义,并对现有的确证流程进行优化。方法回顾性分析2021年1至12月我院接受HIV区分抗原抗体检测试剂筛查患者数据,分析试剂的检测值和抗原抗体反应模式对HIV感染者和假阳性者的区分能力,探讨基于HIV抗原抗体反应模式优化HIV确证流程的可行性。结果2021年接受HIV区分抗原抗体检测试剂筛查的患者共225094例,其中676例筛查阳性,513例真阳,2例失访,总体阳性预测值达76.11%。区分抗原抗体检测试剂检测值可以区分真阳性者(即HIV感染者)和假阳性者,检测值越高,阳性预测值越高(Z=22.033,P<0.001),受试者工作特征曲线下面积达0.995,最佳阈值为24.90,此时方法灵敏度为96.70%,特异度为98.10%。区分抗原抗体检测试剂反应模式同样可以区分真阳性者和假阳性者,其三种反应模式中,“抗原抗体双阳性(Ag+Ab+)”阳性预测值最高(卡方检验及两两比较均P<0.05),在本研究中高达100%。此外,区分抗原抗体检测试剂反应模式对HIV确证流程具有指导意义,7例反应模式呈抗原单阳性(Ag+Ab-)患者,首次HIV-RNA定量均>5000拷贝/ml,但此时HIV抗体确证试验(免疫印迹试验,WB)均未达到阳性标准,因此这类患者应直接采用HIV-RNA定量进行确证,证实了《全国艾滋病检测技术规范》技术规范中确证流程的价值。在反应模式呈Ag+Ab+的患者中,尽管HIV-RNA定量相对于WB的诊断效能优势并不显著,但可以显著减少诊断时间(V=78,P<0.001),有助于加快患者(尤其是急性HIV感染者)启动治疗,因此我们对技术规范中的确证流程进行优化,推荐Ag+Ab+患者直接采用HIV-RNA定量进行确证。在实践中,对Ag+Ab-和Ag+Ab+患者直接进行HIV-RNA定量显著缩短了急性HIV感染者的确证耗时。结论对HIV区分抗原抗体检测试剂检测值高的患者和反应模式呈Ag+Ab-的患者,应当加强患者的管理和随访;对于反应模式呈Ag+Ab-或Ag+Ab+的患者,可以直接采用HIV-RNA定量进行确证。

甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂国家参考品的建立

目的建立甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂国家参考品,制订其质量标准,用于该类试剂的质量评价。方法通过对200多份单采浆站收集到的血浆进行初筛,筛选出16份备选样本。经多家实验室协助标定,分析标定结果,确定参考品的组成及其质量标准,并对参考品稳定性进行评估。结果本参考品由10份阴性参考品、1份最低检出限参考品和重复性参考品组成。质量标准为10份阴性参考品符合率(-/-)应为10/10,最低检出限参考品要求1:40稀释时检测阳性,重复性参考品要求1:15稀释时连续检测10次,结果应均为阳性,且显色度均一。稀释血浆应均为HCV、HBV和HIV标志物阴性。参考品在4℃放置3、7 d和反复冻融2次条件下相对比较稳定。结论成功建立甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂国家参考品,可用于该类试剂的质量控制及评价。

利用比色卡黄龙病快速检测试剂盒对柑橘黄龙病的田间检测试验结果初报

黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害,由韧皮部限制性细菌Candidatus Liberibacter导致。感染黄龙病的柑橘树的叶片有异常高淀粉积累,因此开发出了基于碘-淀粉显色法的黄龙病快速检测试剂盒。将不同浓度的可溶性淀粉溶液进行碘-淀粉显色反应,制作成快速检测试剂盒配套的比色卡,用来快速确认叶片淀粉值区间。根据不同采样时间的健康树和黄龙病树的叶片淀粉值差异进行统计数据分析,确定了7—10月为黄龙病快速检测试剂盒的适宜采样检测时间。根据显色易辨性和检测准确率将淀粉质量浓度3000 ppm确定为适宜的黄龙病阳性叶片淀粉值界限,即检测叶片淀粉值≥3000 ppm判定为黄龙病阳性。通过田间随机取样发现,快速检测试剂盒与实时荧光定量PCR检测方法的一致性约为80%。该黄龙病快速检测试剂盒对田间黄龙病的快速筛查具有重要意义,可作为实时荧光定量PCR检测方法的前序筛查辅助手段。

鼠疫耶尔森菌F1抗体检测试剂国家参考品的研制

为研制鼠疫耶尔森菌F1抗体检测试剂国家参考品,本研究制备了6份F1抗体阳性参考品、8份F1抗体阴性参考品、1份最低检出限参考品和1份重复性参考品,组成了鼠疫耶尔森菌F1抗体检测试剂国家参考品。对参考品进行均匀性检查及稳定性评估,并组织4家实验室进行协作标定。结果显示,参考品均匀性及稳定性良好。协作标定结果显示,6份阳性参考品阳性率均为100%;8份阴性参考品阴性率均为100%;最低检出限参考品的检出水平介于1~100倍稀释度;重复性参考品检测结果一致(其中酶联免疫法及上转发光法试剂检测结果的变异系数均小于15%)。结果表明,本研究建立的鼠疫耶尔森菌F1抗体检测试剂国家参考品基本符合体外诊断试剂参考品的要求,可用于相关试剂的质量评价。

新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测试剂(胶体金法)的生产工艺特点及风险防控要点

目前新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测试剂(胶体金法)已应用到基层医疗卫生机构就诊,伴有呼吸道、发热等症状且出现症状5天以内的人员;隔离观察人员;有抗原自我检测需求的社区居民。该试剂的广泛应用可有效缩短检测时间,降低检测成本和时间成本,缓解核酸检测压力。文章详述了该新冠抗原检测试剂的结构组成、测试原理、生产工艺以及关键风险点,旨在对生产企业的相关工作规范的制定,组织安全生产和监管部门的核查监督提供参考。

6种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为了比较市场上国产及进口非洲猪瘟病毒(ASFV)ELISA抗体检测试剂盒的产品质量和使用效果,本试验对B、C、D三种进口试剂盒和A、E、F三种国产试剂盒进行敏感性、特异性和重复性比较。结果显示,试剂盒B、D、E、F分析敏感性均为1∶512;试剂盒C分析敏感性为1∶256;试剂盒A分析敏感性为1∶128;诊断敏感性比较结果为试剂盒B>试剂盒D、F>试剂盒E>试剂盒C>试剂盒A;6种试剂盒对7份特异性质控血清的检测结果均为阴性,表明6种试剂盒均具有排除潜在交叉反应的病原抗体的能力;诊断特异性比较结果为试剂盒A、C、D>试剂盒F>试剂盒E>试剂盒B;批内重复性结果显示,6种试剂盒的批内变异系数(CV%)均在15%以内。结果表明,非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测国产试剂盒与进口试剂盒的敏感性、特异性和批内重复性相差无几,国产试剂盒的兴起解决了以往过度依赖昂贵的进口试剂盒的问题,国产化替代进程在不断加速。

基于液相色谱串联质谱法的他克莫司检测试剂盒的研制和评价

目的研制液相色谱串联质谱定量检测他克莫司血药浓度试剂盒并对其性能进行评价。方法全血样本经乙腈沉淀蛋白,以子囊霉素内标。色谱柱:C_(18)柱(4.6 mm×10 mm,5 mm);流动相:1 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液-甲醇,梯度洗脱;流速:1.1 ml·min^(-1);柱温:50℃,进样量:5μl。质谱采用电喷雾离子化源、正离子模式、多重反应监测。考察该试剂盒的专属性、线性关系与定量限、精密度与准确度、基质一致性等。对120例临床样本进行检测,分析不同试剂盒间测定结果的相关性和一致性。结果加标样本的回收率为93.42%~105.7%,变异系数的范围为3.04%~4.79%,试剂盒特异性强、准确度高、灵敏度好。在临床样品测试中,考核试剂与对比试剂相关系数r=0.9951,95%置信区间的样本百分比为95.83%。结论液相色谱串联质谱法他克莫司试剂盒检测结果准确可靠,操作简便,适用于他克莫司血药浓度监测和临床检测。

新型冠状病毒抗原检测试剂注册现状分析

目的:为企业注册新型冠状病毒抗原检测试剂提供参考。方法:汇总2021~2022年我国新型冠状病毒抗原检测试剂注册概况,结合我省在初核中发现的问题和国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心反馈的意见,对新型冠状病毒抗原检测试剂注册过程中常见问题进行分析。结果:全国已有50个新型冠状病毒抗原检测试剂获批,申报资料常见问题主要集中在非临床资料和临床资料。结论:注册申请人应认真研读并严格按照《新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测试剂注册审查指导原则》等相关法规提交申报资料,及时与国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心沟通,利于产品获批。

新型冠状病毒抗原检测试剂盒自动售卖机的研发与应用

全球范围内暴发的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒性肺炎疫情,对世界各国的公共健康和经济发展造成了重大影响。其中,及时检测并隔离新冠病毒感染者是阻断疫情不断传播和蔓延的关键措施。后疫情时代背景下,通过探究新型冠状病毒抗原检测试剂盒自动售卖机的便捷性与经济适用性,进一步满足不同应用场景下人们自行进行便捷高效自测的需求,减缓国家经济和医疗资源压力,同时为日后如何防治以新型冠状病毒性肺炎疫情为例的突发公共卫生事件提供一定思路。