牛多杀性巴氏杆菌病疫苗效力检验用攻毒菌的研究

为提高我国牛多杀性巴氏杆菌病疫苗效力评价方法的稳定性、可靠性及检验效率,研究制备了活菌数定量的攻毒用牛多杀性巴氏杆菌C45-2株的冻干菌。对其性状、纯粹、真空度、剩余水分、均一性、活菌数稳定性及毒力稳定性进行了检验和评价。冻干攻毒菌在疫苗效力检验中进行应用,并与-70℃冻存的攻毒菌液进行了比较研究。结果表明,定量冻干菌的性状、纯粹、真空度和剩余水分均符合冻干制品的要求;均一性检查变异系数与低温冻存菌液变异系数均小于6%,均一性良好;保存15个月活菌数稳定性良好,较冻存菌液有明显的优势;保存12个月内毒力略有下降,但不影响疫苗的效力检验,可有效评价疫苗质量。试验表明冻干菌株能满足牛多杀性巴氏杆菌效力检验使用,且简化了细菌培养步骤,提高了检验结果的稳定性和工作效率。

羊败血性链球菌病灭活疫苗效力检验小鼠免疫攻毒法研究

为解决羊败血性链球菌病灭活疫苗现行规程中效力检验采用靶动物免疫攻毒法所存在的动物筛选困难、动物质量不稳定、经济花费高等问题,开展了实验动物免疫攻毒替代方法研究。以靶动物免疫攻毒法为基础,确定该疫苗的最小保护剂量和不保护临界剂量,并在确认小鼠品系后开展平行关系研究,从而筛选出在小鼠模型上能够体现疫苗差异的最佳攻毒剂量。结果显示:合格疫苗1/2稀释度为最小免疫剂量,1/4稀释度为不符合规定的临界剂量;KM小鼠为替代方法最合适的小鼠品系;最佳攻毒剂量为使用2 MLD混合菌液,对免疫组和对照组进行攻毒,对照小鼠全部死亡,免疫小鼠至少保护70%。本研究建立了羊败血性链球菌病灭活疫苗效力检验实验动物免疫攻毒替代方法,这将有助于提升该类疫苗效力检验的稳定性和可靠性,为羊败血性链球菌病防控提供有力支撑。

猪链球菌2型疫苗效力检验的动物模型研究进展

猪链球菌病是一种重要的人兽共患病,近年该病在亚洲重新暴发。CpG寡脱氧核苷酸等佐剂以及逆向疫苗学方法、标签式突变法等一系列方法的相继出现,有利于猪链球菌特别是猪链球菌2型疫苗的研究,但因缺乏理想的动物模型来评价疫苗效力,给该病的防治增加了难度。2007年-2010年,针对猪链球菌2型对小鼠、斑马鱼、猪等模型动物的致病性,以及这些动物易感性等方面做了大量研究。论文对近年来与猪链球菌2型疫苗效力检验动物模型有关的研究进行了综述。

兽用狂犬病灭活疫苗效力检验参考疫苗的研制

将试制的狂犬病灭活疫苗效力检验参考疫苗分别采用NIH和ELISA方法进行了标定,并组织人员进行了协作标定,确定参考疫苗的效价为5.44IU。对标定后的参考疫苗进行了均一性和稳定性试验,结果参考疫苗的均一性好,在-20℃放置15个月和4℃放置2个月效价稳定,在37℃放置2个月效价大于2.00IU,符合我国和WHO对动物用狂犬灭活疫苗效力的要求。本课题为进一步自主研发检验用标准品提供了试验依据,同时也响应了WHO狂犬病委员会敦促各国研制和标定参考品的要求,填补了我国兽用狂犬病灭活疫苗效力检验标准品的空白。

猪瘟活疫苗效力检验替代方法的研究

目前，我国猪瘟活疫苗效力检验最常用的方法是测定猪瘟疫苗中病毒的兔体感染量（ RID），但是用该方法易受到检验兔品种、个体和饲养环境的影响。为了探索一种不依赖动物的疫苗效力检验新方法，本研究将待检猪瘟活疫苗系列稀释后分别接种易感细胞，使用抗原捕获ELISA、RT－nestPCR和RT－PCR三种方法检测不同稀释度疫苗中活病毒在感染细胞后增殖的子代病毒，计算疫苗病毒的最高细胞感染剂量，建立了猪瘟疫苗病毒的细胞感染量（ CID）的效力检验方法。结果显示：疫苗中活病毒粒子越多，CID就越高；对不同类型猪瘟疫苗的检测结果表明，该方法适用于传代细胞源和细胞源猪瘟活疫苗的效力效检。使用CID和RID两种检测方法同时对12批猪睾丸传代细胞源（传代细胞源）和3批牛睾丸原代细胞源（细胞源）猪瘟活疫苗进行了比对效检，结果表明，用CID测定方法检验，12批猪瘟活疫苗（传代细胞源）每头份均含10^5 CID，3批猪瘟活疫苗（细胞源）每头份含量均为10^4 CID；用兔子感染体温测定法，12批猪瘟活疫苗（传代细胞源）每头份含量在2．6×10^4～3．0×10^4 RID之间，3批猪瘟活疫苗（细胞源）每头份含7．0×10^3～8．0×10^3 RID。试验证明：本实验室建立的CID检测结果与现有质量标准RID的结果存在良好的相关性，能够较好反映疫苗中活病毒的含量，有望成为RID的替代方法。

我国猪瘟疫苗效力检验的替代方法研究与应用进展

我国兽药典中现行的猪瘟疫苗效力检验方法存在试验成本较高、周期较长、操作较繁琐、重复性较差、敏感性较低等缺点,随着分子生物学与免疫学技术的日臻发展与应用,猪瘟疫苗效力检验的新兴替代检验方法不断发展和完善。论文就我国近年来针对猪瘟疫苗毒种、半成品、成品效力检验的新兴分子生物学和免疫学检测方法的研究与应用进展做一简要综述,旨在为提升我国猪瘟疫苗效力检验水平提供合理的科学依据。

猪支原体肺炎疫苗效力检验常见问题与质量控制

为了更规范、标准地评价猪支原体肺炎疫苗,本研究对近年来猪支原体肺炎疫苗检验进行了系统性分析。结果发现,效力检验作为疫苗质量的核心内容,是检验中最易出现问题参数。对效力检验相关方法、常见问题进行分析,有助于研发过程中规避问题,提高疫苗质量继而保障养殖业发展。

猪丹毒疫苗效力检验攻毒冻干培养物的制备与应用研究

为提高猪丹毒疫苗效力检验结果的稳定性、一致性和工作效率。本研究冻干制备了效力检验攻毒用猪丹毒丝菌培养物,对性状、纯粹、真空度、剩余水分、活菌计数、均一性等进行检测,测定在不同温度下短期存放的活菌数,监测在低温下长期保存的活菌数和毒力,并将其应用于猪丹毒活疫苗和灭活疫苗的效力检验。结果显示,该攻毒培养物性状良好,纯粹生长,真空度合格率98.2%,剩余水分小于3.5%,活菌数均值为3.8×10^9 CFU/瓶,瓶间活菌数变异系数(C.V)为10.0%,37℃以下温度存放2.5~3.0 h活菌数稳定,变异系数(C.V)为4.9%,-20℃保存36个月活菌数为3.0×10^9 CFU/瓶,每只小鼠注射6 CFU活菌5/5死亡,应用于猪丹毒灭活疫苗和活疫苗效力检验结果与常规方法一致。结果表明,该猪丹毒丝菌冻干培养物状态良好,活菌数和毒力较为稳定,能够满足猪丹毒疫苗效力检验攻毒使用,且提高了检验结果的一致性和稳定性及工作效率。

兔多杀性巴氏杆菌C51-17株在疫苗效力检验中保存方法的研究

通过将兔多杀性巴氏杆菌C51-17株菌液分装后置-80℃冻存的方法对菌液浓度进行预数,并与传统方法采用的将菌液置4℃保存过夜计算菌存率或通过测定菌液吸光值推算攻毒菌液浓度相比较。结果表明,用-80℃冻存保存方法估算的菌液浓度与实际浓度更接近,采用这种方法进行疫苗的效力检验,能确保对照成立,在兔多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗效力检验中可以采用-80℃冻存的方法进行攻毒菌液的预数。

一种猪瘟兔化弱毒活疫苗效力检验方法的研究

为克服兔体定型热反应法(RID)检验猪瘟活疫苗效力的过程中存在的缺陷,建立了一种快速、准确、稳定检测猪瘟病毒含量及疫苗效力的间接免疫荧光法(IFA).该方法以出现特异性荧光作为检测标准,通过添加促细胞感染剂聚乙二醇10000(PB)增加特异性荧光数量,可以在4 d内检测出猪瘟活疫苗成品或半成品效力.该方法检验周期短、结果准确、重复性好,为猪瘟活疫苗效力检验方法的完善提供了数据支持.

兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验替代方法研究

为了采用血凝抑制(HI)试验方法替代兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验的免疫攻毒方法,试验在制备了HI试验用兔出血症病毒血凝(HA)抗原、阳性血清、阴性血清的基础上,研究了免疫攻毒保护与免疫血清HI效价之间的平行关系,并进行了替代方法的应用。结果表明,当免疫血清HI效价不低于1∶32时,两种方法的检验结果符合率为100%,证明了该替代方法的可行性,也为下一步修订兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验方法提供了数据支持。

猪丹毒灭活疫苗效力检验血清学方法建立

建立了猪丹毒丝菌抗体竞争ELISA检测方法,用于猪丹毒疫苗效力检验。用SpaA蛋白(纯度90%)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的SpaA蛋白单克隆抗体,建立猪丹毒丝菌竞争ELISA抗体检测方法,确定检测结果的判定标准,并对该方法的特异性、敏感性、重复性(批间重复性和批内重复性)等进行评价。建立效力检验血清学方法与免疫攻毒法的平行关系,并对两种方法符合率进行评价。结果表明,SpaA的最佳包被浓度为2.0 ng/μL,阴阳性对照血清的最佳稀释倍数为1∶75,HRP标记的单克隆抗体的最佳工作浓度为0.2 ng/μL。ELISA结果判定标准为血清样本抑制率PI≥8.0%时判定为阳性,PI<8.0%判定为阴性。该方法特异性良好,与空白小鼠阴性血清及A型和B型猪多杀性巴氏杆菌阳性血清均不发生交叉反应;敏感性良好,与敏感性血清样品可呈现不同梯度抑制率;重复性良好,批内重复和批间重复性试验结果变异系数均小于10%;与效力检验免疫攻毒法具备平行关系,小鼠血清效价≥1∶100时可抵抗1000 MLD强毒攻击;对用不同冻干代次菌种制备的4批猪丹毒丝菌灭活抗原和来自4家企业的7批猪丹毒灭活疫苗进行检测并与免疫攻毒实验结果比较,总符合率为100%。建立的猪丹毒丝菌抗体竞争ELISA检测方法可以作为猪丹毒疫苗的效力检验方法。

鸡毒支原体灭活疫苗效力检验气囊注射攻毒方法的研究

鸡毒支原体灭活疫苗效力检验采用的喷雾攻毒方法所需菌液量大,结果易受喷雾时间和器械设备影响。为探索一种简便、易行且结果稳定的新方法,研究冻干了一批攻毒用菌株鸡毒支原体R株,对其性状、纯粹、真空度、剩余水分、培养特性、特异性、活菌计数和均一性等进行检定,结果全部符合规定。将其稀释成不同活菌数,采用气囊注射方式攻毒,试验结果与《中国兽药典(2020年版三部)》中的喷雾方法相比更加稳定、准确。使用两种攻毒方法对5批次疫苗进行效力检验,结果无显著差异,可为该类疫苗攻毒方法优化提供新思路。

应用小鼠替代仔猪检验仔猪水肿病灭活疫苗效力研究

用小鼠替代仔猪进行仔猪水肿病灭活疫苗效力检验,结果表明,疫苗免疫小鼠能达9/10保护的最小免疫剂量是0.05 mL/只（4×10^8CFU）,免疫仔猪能达5/5保护的最小免疫剂量是1.5 mL/头（1.20×10^10CFU）。用疫苗0.01 mL免疫小鼠所产生的抵抗致死量强毒菌的免疫力,相当于用疫苗1.0 mL免疫14-18日龄仔猪所产生的抵抗致死量毒素静脉注射的免疫力;用疫苗0.05 mL免疫小鼠所产生的抵抗致死量强毒菌的免疫力,相当于用疫苗1.5 mL免疫14-18日龄仔猪所产生的抵抗致死量毒素静脉注射的免疫力。疫苗0.05 mL免疫小鼠可以替代仔猪作为效力检验的模型。

家兔兔瘟HI抗体水平对猪瘟活疫苗效力检验结果的影响

按照《兽用生物制品规程》方法,应用具有不同兔瘟HI抗体水平的家兔进行猪瘟活疫苗的效力检验。实验结果表明,家兔的兔瘟HI抗体水平对其接种猪瘟活疫苗后诱发的体温反应无干扰作用。

水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)效力检验用实验动物抗体效价的对比研究

为了变更“水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)”质量标准中效力检验用的试验动物,试验采用血凝抑制试验方法,对比检验水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)对水貂和兔产生的抗体效价水平。结果表明:水貂和兔接种疫苗后14~180天的血清HI抗体水平差异不显著(P>0.05),均达到效力检验质量标准要求。用兔替代水貂进行水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)的效力实验的抗体监测科学、方便、可行。

鸡传染性支气管炎双价活疫苗效力检验方法的比较

以血清交叉中和方法进行鸡传染性支气管炎双价活疫苗效力检验 ,结果与攻毒方法效检结果一致。表明可以采用血清交叉中和方法进行双价活疫苗效力检验。

A型产气荚膜梭菌冻干毒素在疫苗效力检验中的应用研究

通过冻干毒素和常规方法制备的毒素对家兔的毒力变化以及在疫苗效力检验中的效果比较,发现冻干毒素在2～8℃保存,毒力稳定,且不影响疫苗检验结果,说明毒素冻干保存是一种可行的方法。

3Rs用于疫苗质量控制中的安全性与效力检验

疫苗是重要的生物制品,在人类与动物传染病的预防中起着重要作用。疫苗的使用不仅显著地降低了传染病的发病率和死亡率,且几乎已经根除了脊髓灰质炎。由于疫苗的特殊性,其使用以安全和有效为准则,因此需要进行广泛的与批次有关的质量控制来保证这些疫苗的安全性和有效性。疫苗的质量控制与实验动物密切相关,每类疫苗都需要使用很大数量的动物。