一株引起普通棉耳狨猴死亡病毒的分离与鉴定

1999年6月,天津医科大学动物中心饲养的珍贵灵长类实验动物——普通棉耳狨猴群体中暴发急性呼吸道传染病,病死率高达33％。在排除细菌感染的基础上,通过死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK细胞的分离培养,分离出一株具有高血凝效价的病毒株。经双份血清试验及动物接种试验,确认该病毒是本次疾病流行的病原体。又进一步通过与常见呼吸道病毒标准毒株及血清进行交叉血凝抑制试验、电镜观察、RT-PCR技术并结合生物信息学方法对该毒株进行鉴定,确认本次疾病流行的病原体是副流感1型病毒中的仙台病毒。

普通棉耳狨猴MHC Ⅰ类基因A和B基因座多态性分析

目的主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex class I molecule,MHCⅠ)与细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)作用相关,它的复杂性和多态性使得个体间的免疫应答有所不同。普通棉耳狨猴(common marmosets)是1种小型非人灵长类动物,曾用于甲肝病毒及疫苗等研究。目前,科学家正试图将狨猴用于丙型肝炎病毒感染模型。然而,狨猴MHCⅠ的多态性,及其与特异性细胞免疫反应的相关性仍不清楚,限制了对保护性免疫反应机制的认识。本研究通过对狨猴MHCⅠ类基因A和B基因座序列多态性及特征进行分析,为HCV狨猴感染动物模型提供遗传背景资料。

普通棉耳狨猴副粘病毒自然感染的研究

对一个狨猴实验室中暴发急性呼吸道疾病进行了病因调查。通过动物剖检、病毒分离、电子显微镜检查和血凝及血凝抑制试验和动物感染实验 ,确定其病原是副流感病毒 型(仙台病毒 )。从而确定动物死亡原因是病毒引起肺炎感染造成。

普通棉耳狨猴腹泻、消瘦的病例分析及处理

目的 分析引起此次普通棉耳狨猴腹泻、消瘦的原因,制定切实可行的预防控制措施,为规模化狨猴养殖提供值得借鉴的经验.方法 对腹泻、消瘦的狨猴进行病因分析,包括病症、饮食状况、饲喂状况、病理剖检、组织切片、肛门拭子采集检测等.结果 通过实验室诊断、饲养管理改善等进行病因分析,确定了引起狨猴腹泻、消瘦并最终导致2例死亡的原因,是由于饲养环境内部分应激因素（如温度）改变、饲养动物处于空调送风口位置、人员进出频繁等,导致机体内条件致病菌（肺炎克雷伯氏菌）引起动物发病.采取改变饲养管理方式、调整饮食等措施后,逐步控制了病情.结论 科学的饲养管理方式以及良好的兽医护理对防止普通棉耳狨猴腹泻、消瘦疾病的发生具有重要作用.

生物遥测技术监测清醒状态下普通棉耳狨猴的心电生理特性

目的采用生物遥测法监测清醒状态下狨猴心率、体温、血压及心电图各项指标。方法在普通棉耳狨猴体内埋置生物传感器，恢复两周后，采用DataquestA．R．T．4．3系统连续监测24h的心率、体温、血压和心电图指标，并于第二周、第三周各重复一次。结果在整个实验过程中，该方法所监测指标基本维持正常水平，心率为（148．12±15．94）～（256．85±25．67）次／min，体温为（35．60±0．23）～（38．67±0．75）℃，平均动脉压为（67．45±8．96）～（94．95±11．62）mmHg，白天的各项心电指标高于夜间，且三次实验及平均值间比较无显著差异（P〉0．05）。结论成功建立了生物遥测方法，可以准确监测清醒状态下普通棉耳狨猴的心电生理指标。

基于高通量测序技术测定普通棉耳狨猴粪便微生物多样性

目的应用高通量测序技术分析普通棉耳狨猴粪便菌群的结构与组成,为进一步开发利用新型实验动物奠定基础。方法采集4只成年雄性普通棉耳狨猴粪便,用细菌16SrRNA通用引物扩增V3~V4区,采用IlluminaMiSeq测序平台对普通棉耳狨猴粪便微生物进行研究。结果共测序获得315511条有效序列与596个OTU。普通棉耳狨猴粪便中的细菌共鉴定出9个门、14个纲、26个目、50个科、82个属和64个种和226个OTU。其中,1)优势门是拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes),平均含量分别为54.52%和25.39%2)丰度最高的纲为拟杆菌纲(Bacteroidia)和厌氧菌纲(Negativicutes),平均含量为54.5%和17%。3)乳杆菌目(Lactobacillales)和拟杆菌目(Bacteroidales)的丰度最高,为50.01%和20.52%。4)普雷沃菌科(Prevotellaceae)和双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)所占丰度最高,平均含量分别为43.14%和11.33%。5)双歧杆菌属(Bifidobacterium)和拟杆菌属(Bacteroides)的丰度较高,平均含量分别为11.33%11.12%。6)有益菌群双歧杆菌属丰度较高,但在所检测样本中都含有。7)丰度最高的前10个种,归类为7个科、5个纲。这10个种占到33.16%,其他53种总和仅占到0.74%,其他未鉴定出菌种,且相对丰度还较高,需要进一步研究。8)PICRUSt功能预测分析:氨基酸转运等代谢功能和蛋白质翻译、折叠遗传信息处理功能丰度较高。结论应用高通量测序技术,较全面的检测了普通棉耳狨猴粪便菌群,普通棉耳狨猴粪便细菌组成具有丰富的多样性,其中还有许多未被分类鉴定且相对丰度较高的细菌,需要进一步研究。

普通棉耳狨猴饲养管理与繁育技术

介绍了普通棉耳狨猴饲养管理和繁育技术,具体包括笼舍的环境设施建设、日粮结构与饲喂方法、繁育管理、疾病防治和标准化管理等方面内容,以期为普通棉耳狨猴的饲养和繁育提供科学参考。

新进棉耳狨猴的饲养管理

普通棉耳狨猴是狨猴种属中应用最广泛的试验动物之一,因此制订一套合理有效的饲养管理方案,使它们更好地服务于科研显得格外重要。尤其是加强检疫、饲养管理、饲料营养、疾病防治等方面的管理,能大大提高普通棉耳狨猴养殖的成功率。笔者从普通棉耳狨猴的引种、生活习性、饲养管理、卫生防疫等几个方面进行研究,提出了在饲养普通棉耳狨猴过程中需要注意的问题,供普通棉耳狨猴养殖者和科研人员参考。

狨猴血清中重组人5型腺病毒中和抗体滴度的测定

目的构建表达荧光素酶与绿色荧光蛋白报告基因的重组人5型腺病毒r Ad5/Luc/GFP,检测血清中和抗体最佳实验方法,分析小型灵长类动物普通棉耳狨猴体内腺病毒5型中和抗体水平,为评价腺病毒载体疫苗提供实验动物基础数据。方法利用ADMax包装系统,首先构建穿梭质粒p DC315-Luc-GFP,将所得的穿梭质粒和骨架质粒p BHGloxΔE1,3Cre共转染293A细胞,进行重组人5型腺病毒(r Ad5/Luc/GFP)的包装。通过3次空斑形成实验筛选出单克隆重组腺病毒,并在大量扩增单克隆腺病毒后用Cs Cl密度梯度离心法进行浓缩纯化。采用TCID50法测定纯化后病毒滴度,并挑选进行中和实验的最优病毒滴度。将合适病毒滴度的r Ad5/Luc/GFP与狨猴血清混合预孵育后感染293A细胞,分别采用化学发光法及流式细胞术,对14只普通棉耳狨猴血清中腺病毒5型中和抗体进行检测。结果 PCR、酶切和测序结果均表明穿梭质粒p DC315-Luc-GFP构建成功;GFP检测结果证明重组人5型腺病毒r Ad5/Luc/GFP包装扩增成功,病毒滴度可达6.9×1011.5PFU/m L。两种不同方法检测检测14只狨猴的中和抗体结果一致性较好(P<0.05,Kappa=0.811),化学发光法或流式细胞术检测阳性狨猴比率分别为28.6%(4/14)或21.4%(3/14),化学发光法检测得其中2只狨猴中和抗体滴度为1/16,另2只为1/32,而流式细胞术检测得滴度均为1/16。结论化学发光法是一种快速,准确,适用于多物种的方法,其灵敏度略高于以GFP为报告基因的流式细胞术(7.2%)。普通棉耳狨猴体内Ad5血清阳性率较低,有望应用基于此型或其他型别腺病毒作为载体进行基因治疗和基因疫苗研究。