棉花GhAO3基因的克隆、功能序列分析及原核表达

通过RT-PCR方法从处于快速伸长发育时期(开花后15 d)的棉花纤维组织中克隆得到棉花抗坏血酸氧化酶3(Ascorbate oxidase 3,GhAO3)基因的全长开放读码框,该基因全长读码框为1 758 bp,编码包含585个氨基酸的蛋白质。通过序列功能分析和同源序列比对,GhAO3蛋白具有较高的保守性,包括3个多铜氧化酶结构域以及跨膜信号序列,进化树比对结果显示GhAO3与大豆GmAO的亲缘关系较近。将GhAO3基因与原核表达载体pET32a相连构建重组载体pET32a-GhAO3,把重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导重组菌,经SDS-PAGE电泳分析,获得分子量约为64 kD的重组GhAO3蛋白。