棉铃虫质型多角体病毒 A B 两种类型体外复制特性的比较研究

分析比较了棉铃虫质型多角体病毒江苏株Ａ、Ｂ两种类型的离体复制特性。ＨａＣＰＶ－Ａ型（ＣＰＶ１４型）病毒可在多种昆虫细胞系中复制，而Ｂ型病毒只能在同源细胞系中增殖；Ａ型病毒的感染率和细胞内游离病毒粒子的滴度均高于Ｂ型病毒；感染细胞持续传代表明，ＨａＣＰＶ－Ａ型病毒感染的ＨＡ－８３１细胞在连续传代７次后，感染率从最初的１０．６％上升到８０％以上，反之，Ｂ型病毒感染的细胞，传代９次后已不能形成典型的多角体。同时，我们还率先成功地建立了ＣＰＶ的空斑测定技术，并初步尝试了混合型ＨａＣＰＶ的分离纯化。

棉铃虫质型多角体病毒在寄主细胞中的复制

棉铃虫质型多角体病毒在寄主细胞中的复制郝宏京（中国农科院原子能研究所，北京１０００９４）应用电镜技术探讨棉铃虫质型多角体病毒（ＣＰＶ）在寄主细胞内的复制过程。采用健康棉铃虫饲毒后不同时间取材、超薄切片，电镜观察，直观地看到了棉铃虫ＣＰＶ复制的整个过程...

中红侧沟茧蜂对棉铃虫核型多角体病毒的传播作用

中红侧沟茧蜂Microplitis mediator与核型多角体病毒(nucleopolyhedrovirus, NPV)是棉铃虫Helicoverpa armigera的两种重要生物防治因子。中红侧沟茧蜂传播NPV对于利用二者协同防治棉铃虫具有重要意义。本研究探讨了给中红侧沟茧蜂饲喂含病毒蜂蜜水、体表喷洒病毒液、中红侧沟茧蜂在染毒宿主体内产卵、从染毒宿主体内发育、蜂茧浸泡病毒5种带毒方式的传播病毒效率,以及饲喂带病毒蜂蜜水方式下的传播机制。结果表明,饲喂带病毒蜂蜜水和体表喷洒病毒时中红侧沟茧蜂传毒率较高,在连续传毒的3 d内传毒效率分别为15.1%、9.1%~9.3%、2.4%~4%,其他3种方式传毒效率较低。在田间防治时可以利用中红侧沟茧蜂的传毒作用采用病毒与寄生峰的协同防控策略。

利用棉铃虫为宿主增殖松毛虫质型多角体病毒

应用细胞质多角体病毒JDS-CPV在日本防治赤松毛虫(Dendrolimus spectabilis)以及在我国台湾省防治马尾松毛虫(D.punctatus)均取得较好的效果。自1983年以来,利用JDS-CPV在我国广东、云南、浙江、安徽等省防治松毛虫,也都具有很好的效果。JDS-CPV的复制,过去主要是利用林间的松毛虫。如何使之成为周期性的连续生产。

棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶的原核表达及其协同增效作用

【目的】在大肠杆菌中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒(HearNPV)几丁质酶(Chi A),利用表达产物进行病毒增效作用研究,以明确杆状病毒Chi A对HearNPV的协同增效作用。【方法】用PCR方法扩增出不含N端信号肽编码序列的Chi A基因片段,分别克隆至原核表达载体pMAL-p2x和pET-32a中,构建重组表达载体,并分别在大肠杆菌TB1和BL21(DE3)中进行融合表达,测定融合蛋白对HearNPV的增效作用。【结果】克隆的基因片段经过测序后连接表达载体,成功构建了重组表达载体pMAL-p2x-Chi A和pET-32a-Chi A。重组载体转化相应菌株并进行诱导表达,发现pMAL-p2x-Chi A在大肠杆菌TB1中的表达量占细菌总蛋白的15.8%,其中20.0%为可溶性表达;pET-32a-Chi A在BL21(DE3)中的表达量占细菌总蛋白的26.8%,其中30.2%为可溶性表达。选用pET-32a-Chi A在BL21(DE3)中的表达产物作为增效蛋白,当表达的可溶性HearNPV Chi A的添加水平为1.0μg/mL时,其能够显著提高病毒毒力,棉铃虫的死亡率较对照提高36.6%。【结论】利用大肠杆菌表达的可溶性HearNPV Chi A,对HearNPV具有明显的增效作用。

中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因的定位与克隆

以α３２ＰｄＡＴＰ标记含ＣｆＭＮＰＶ几丁质酶基因的重组质粒为探针，在６８℃条件下对棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，将ＨａＳＮＰＶ的几丁质酶基因分别定位在ＢａｍＨＩＥ、ＢｇｌⅡＥ、ＥｃｏＲＩＧ、ＨｉｎｄⅢＦ、ＸｂａＩＨ、ＢａｍＨＩ＋ＨｉｎｄＩＩＭ和ＢａｍＨＩ＋ＸｂａＩＨ，并以ｐＴＺ１９Ｒ为载体获得了ＸｂａＩＨ片段克隆。

影响棉铃虫增殖马尾松毛虫质型多角体病毒的条件因子的初步探讨

棉铃虫为马尾松毛虫多角体病毒 (DPCPV)理想的替代寄主。试验结果表明 ,不同接毒方法、接种浓度、接种温度及接种虫龄对棉铃虫增殖病毒有影响 ,以病毒涂在人工饲料表面的接毒方法、2 0～ 2 3℃温度及 3龄虫为最佳组合条件。由于利用棉铃虫生产出的病毒 (Ha DPCPV)容易诱发棉铃虫本身的多角体病毒 (NPV) ,尤其对那些带有NPV源的虫种 ,Ha DPCPV不宜作毒种 ,因此为慎重起见 ,最好用马尾松毛虫复制出的病毒作为生产毒种。

中国棉铃虫多粒包埋型核多角体病毒几丁质酶基因的研究

中国棉铃虫多粒包埋型核多角体病毒VHA273毒株的几丁质酶基因的开放阅读框大小为1713bp,编码570个氨基酸残基,分子量约60kDa.氨基酸序列分析显示,杆状病毒与原核生物特别是细菌的几丁质酶具高度同源性,暗示杆状病毒的几丁质酶基因与细菌的几丁质酶基因有更为接近的进化关系,可能源于共同的祖先.

棉铃虫核型多角体和质型多角体在宿主昆虫继代后的毒力分析与比较

以３龄健康棉铃虫幼虫为供试昆虫，测定棉铃虫核型多角体和质型多角体在幼虫体内分别连续继代后的毒力变化。就质型多角体而言，不论是病毒的致死剂量（ＬＤ）还是致死时间（ＬＴ）均随着继代次数的增加而升高，继代１０次后的病毒致死活性平均丧失５９．３％，与未经继代的病毒相比．ＬＤ＿（５０）增加１０３倍，ＬＴ＿（５０）平均延长４．４３５ｄ；而核型多角体在继代过程中的毒力未见显著变化，提示核型多角体与质型多角体在宿主昆虫内连续继代的遗传学行为有可能不同。

马尾松毛虫质型多角体病毒对棉铃虫生长发育的影响

为了弄清马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV)对棉铃虫生长发育的影响,利用带毒饲料饲喂棉铃虫幼虫的方法进行了试验观察,结果表明:马尾松毛虫质型多角体病毒对棉铃虫幼虫具有一定的侵染性;棉铃虫幼虫的死亡率随病毒浓度的升高而增大;蛹重和羽化率随病毒浓度的升高而减小;幼虫历期受到的影响不显著。利用马尾松毛虫质型多角体病毒防治棉铃虫具有较好的开发运用前景。

棉铃虫核型多角体病毒多角体蛋白基因的克隆和核苷酸序列分析

棉铃虫核型多角体病毒多角体蛋白基因的克隆和核苷酸序列分析王根张传溪贡成良金伟吴祥甫（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词棉铃虫，核型多角体病毒，多角体蛋白基因，核苷酸序列，同源性棉铃虫Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ（Ｈｅｌｉｏｔｈｉ...

一株草地贪夜蛾核型多角体病毒新分离物的室内毒力测定与基因组分析

草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda是我国重要的入侵农业害虫。草地贪夜蛾核型多角体病毒是专一性感染草地贪夜蛾的病原。本研究于江西省南昌市玉米田分离得到一株多粒包埋型草地贪夜蛾核型多角体病毒分离物,命名为草地贪夜蛾核型多角体病毒江西分离物(SfMNPV_JX),其对本地草地贪夜蛾幼虫毒力高,LC 50达到1.634×105 PIB/mL。全基因组测序表明,SfMNPV_JX基因组全长134241 bp,共包含140个ORF,系统发育分析显示,SfMNPV_JX属于α-杆状病毒GroupⅡ,是SfMNPV的一个分离物,与草地贪夜蛾核型多角体病毒哥伦比亚分离物(SfMNPV_Colombian)最为近似,序列相似性为97.85%。上述研究结果为研发绿色高效的草地贪夜蛾生物杀虫剂提供重要依据。

核型多角体病毒对棉铃虫酯酶和酚氧化酶活性的影响

对感染核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis,NPV)的棉铃虫Helicoverpa armigera(Hubner)幼虫血淋巴进行了酯酶和酚氧化酶电泳分析。结果表明:2种酶带在感染12 h后其活力发生了明显变化;酯酶酶带2 d后发生位移,酚氧化酶酶带5 d发生位移,且各自建立新的酶系统。酚氧化酶比活力分析结果表明:感染NPV后,1 d达到最高点,2～3 d处于最低点,4 d后回升。

PCR法证实棉铃虫核型多角体病毒对棉铃虫经卵和蛹的垂直传播

根据棉铃虫核型多角体病毒的多角体蛋白基因设计 5’引物和 3’引物 ,通过PCR技术成功扩增 389bp的目的片段 ,并对该片段进行了克隆和测序。结果表明 ,扩增片段为棉铃虫核型多角体病毒多角体蛋白基因序列。该检测方法的灵敏度为 1 0fg,应用此技术从带毒的虫卵和蛹的总DNA中也检测到该病毒的存在。

棉铃虫核型多角体病毒与化学杀虫剂和卵磷脂混用的增效作用

棉铃虫核型多角体病毒 (HaNPV)分别与三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、灭净菊酯、灭多威、辛硫磷、甲基对硫磷和乙酰甲胺磷等化学杀虫剂混合饲喂棉铃虫幼虫 ,统计致死中浓度LC50 ,计算增效比 ,测定虫体内与抗性有关的三种重要酶 :多功能氧化酶 (MFO)、羧酸酯酶 (CarE)、乙酰胆碱酯酶 (AChE)的活性。研究大豆卵磷脂对HaNPV致病性的影响。结果表明 :HaNPV与化学杀虫剂混合饲喂抗性棉铃虫 ,生测统计增效比均大于 1 0 ,特别是病毒与甲基对硫磷混用 ,增效比更是达到 3 53,表现出良好的增效作用。混剂感染抗性棉铃虫 ,虫体内MFO的活性比化学杀虫剂单用时降低 3～ 12倍 ,CarE和AChE的活性也比化学杀虫剂单用时低 ,HaNPV明显抑制了化学杀虫剂对MFO和CarE的诱导作用。HaNPV与大豆卵磷脂混用 ,提高了HaNPV对棉铃虫的感染致死率 ,缩短了致死中时间 (LT50 )。

科云牌棉铃虫核型多角体病毒生物农药的规模化生产和应用

昆虫病毒生物农药是纯天然无公害生物农药产品,本文介绍了中国科学院动物研究所同河南省济源白云实业有限公司合作,成功开发并商业化棉铃虫病毒生物农药的基本情况。我们开发的棉铃虫病毒生物农药注册商标"科云牌",包括两个产品:科云牌5 000亿PIB/g棉铃虫病毒原粉和科云牌600亿PIB/g棉铃虫病毒水分散粒剂。原粉产品已出口到欧洲,制剂产品用于棉铃虫防治,2006至2007年在棉田累计推广应用10万hm^2次。

棉铃虫核型多角体病毒多角体蛋白聚集体特性及与其它包涵体蛋白的血清学关系

纯化的多角体碱解释放多角体蛋白 ,经等电点沉淀和柱层析对多角体蛋白进行分离纯化 ,结合SDS PAGE、免疫双向扩散、免疫电镜等方法 ,证明棉铃虫核型多角体病毒 (HaNPV)的多角体蛋白以聚集体形式存在。用ELISA法检测包涵体蛋白之间的血清学关系 ,结果表明 ,与黄地老虎颗粒体病毒 (AsGV)和粘虫颗粒体病毒 (PsGV)颗粒体蛋白相比较 ,HaN PV多角体蛋白与葡萄天蛾核型多角体病毒 (ArNPV)和黄地老虎核型多角体病毒 (AsNPV)

中国棉铃虫核型多角体病毒不同基因型的虫体克隆

首次利用虫体克隆技术，对野生型中国棉铃虫核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶＷ）的不同基因型进行了分离纯化。以较低浓度的ＨａＳＮＰＶＷ感染三龄初中国棉铃虫幼虫，病毒致死幼虫单虫收集，分别提取相应的病毒核酸，进行限制性内切酶分析，得到了ＨａＳＮＰＶ的七个不同基因型（ＨａＳＮＰＶＧ１至Ｇ７），其ＥｃｏＲＩ酶切图谱均不相同。用ＢａｍＨＩ酶切分析，七个基因型的酶切图谱只在一个片段上有显著区别：Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４ＤＮＡ的ＢａｍＨＩｈ片段大小是３．３０ｋｂ，Ｇ５、Ｇ６的这一片段的大小为３．５ｋｂ，而Ｇ７的这一片段为２．７ｋｂ。结果表明，野生型ＨａＳＮＰＶ至少包含七个不同的基因型。

中国棉铃虫核型多角体病毒DNA聚合酶基因的克隆和序列分析

应用谷实夜蛾核型多角体病毒（ＨｚＳＮＰＶ）ＤＮＡ聚合酶基因ＨｉｎｄⅢ／ＰｓｔⅠ３５９６ｂｐ片段作探针，经Ｓｏｕｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交，克隆了中国棉铃虫核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）完整的ＤＮＡ聚合酶基因，大小约为３．４ｋｂ。限制性内切酶分析表明，ＨａＳＮＰＶＤＮＡ聚合酶基因限制性内切酶图谱与ＨｚＳＮＰＶ相似。用双脱氧链终止法测定该基因部分核苷酸序列（８０５ｂｐ），推导出编码区２０６ａ。序列同源性比较显示，ＨａＳＮＰＶＤＮＡ聚合酶与ＨｚＳＮＰＶ之间具有高度的同源性；与ＬｄＭＮＰＶ、ＡｃＭＮＰＶ、ＢｍＳＮＰＶ。

棉铃虫（Heliothisspp）核型多角体病毒四个分离株的比较研究

本文从形态结构、生物活性、结构多肽、核酸限制性内切酶图谱和核酸同源性等方面对棉铃虫核型多角体病毒四个分离株（两个ＳＮＰＶ分离株：ＨａＳ、ＨｚＳ，和两个ＭＮＰＶ分离株：ＨａＭ１、ＨａＭ２）进行了比较研究。它们对中国棉铃虫二龄末三龄初幼虫的ＬＤ５０佰依次为３６１、３８７、２６３３、３５６０ＰＩＢｓ／克饲料，当感染剂过为５×ｌ０３ＰＩＢｓ／克饲料时，其ＬＴ５０值依次为４．６、４．９、６．４和６．６天。两个ＳＮＰＶ分离株的生物活性显著高于两个ＭＮＰＶ分离株。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，四个分离株多角体蛋白均为一条带，两个ＭＮＰＶ分离株结构多肽均具有相同的迁移率，两个ＳＮＰＶ分离株的结构多肽图谱也颇相似，但ＳＮＰＶ与ＭＮＰＶ分离株之间带型相差较大。各分离株基出组经ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ和ＸｂａＩ消化后，得到的内切酶图谱表现为两个ＮＭＰＶ分离株一致，两个ＳＮＰＶ分离株也很相似，而ＳＮＰＶ与ＭＮＰＶ分离株之间相差很大。严格条件杂交结果表明：两个ＳＮＰＶ分离株的基因组有较高的同源性，而ＳＮＰＶ与ＭＮＰＶ基因组之间的同源性极低。