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弓形虫棒状体蛋白15的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
1
作者
蒋鹏
王泽祥
+2 位作者
车亮
王由森
孙晓林
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2023年第2期16-22,共7页
【目的】克隆弓形虫(Toxoplasma gondii)RH虫株速殖子的棒状体蛋白15(ROP15)基因,原核表达、纯化重组蛋白,并制备多克隆抗体。【方法】根据GenBank登录的弓形虫RH株ROP15(DQ096561.1)基因序列设计了1对引物,以提取的弓形虫RH虫株速殖子...
【目的】克隆弓形虫(Toxoplasma gondii)RH虫株速殖子的棒状体蛋白15(ROP15)基因,原核表达、纯化重组蛋白,并制备多克隆抗体。【方法】根据GenBank登录的弓形虫RH株ROP15(DQ096561.1)基因序列设计了1对引物,以提取的弓形虫RH虫株速殖子RNA为模板,通过RT-PCR获得该虫株的ROP15基因,将该基因连接至原核表达载体pGEX-4T-1上,获得重组质粒pGEX-4T-ROP15,测序结果与预期结果一致;转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导获得重组融合蛋白,运用亲和层析法纯化可溶性ROP15重组蛋白,SDS-PAGE对表达和纯化的目的蛋白进行分析。用纯化的ROP15重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,运用Western blot分析特异性。【结果】成功克隆了弓形虫RH虫株速殖子ROP15基因,大小为924 bp;菌液PCR和酶切鉴定表明重组质粒pGEX-4T-ROP15构建成功,获得了约59 ku的可溶性融合蛋白表达产物;以纯化的可溶性ROP15重组表达蛋白为抗原制备兔源性抗血清,Western blot显示该多克隆抗体与ROP15重组蛋白和RH虫株速殖子总蛋白反应性良好。【结论】克隆出弓形虫RH虫株速殖子的棒状体蛋白15(ROP15)基因,利用原核表达系统获得了重组表达产物,纯化获得纯度较高的重组ROP15蛋白,制备的多克隆抗体与ROP15重组蛋白和RH虫株速殖子总蛋白反应性良好。
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关键词
弓形虫
棒
状
体
棒状体蛋白15
原核表达
纯化
多克隆抗
体
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题名
弓形虫棒状体蛋白15的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
1
作者
蒋鹏
王泽祥
车亮
王由森
孙晓林
机构
甘肃农业大学动物医学院
出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2023年第2期16-22,共7页
基金
甘肃省自然科学基金项目(21JR7RA823)
家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金项目(SKLVEB2019KFKT005)。
文摘
【目的】克隆弓形虫(Toxoplasma gondii)RH虫株速殖子的棒状体蛋白15(ROP15)基因,原核表达、纯化重组蛋白,并制备多克隆抗体。【方法】根据GenBank登录的弓形虫RH株ROP15(DQ096561.1)基因序列设计了1对引物,以提取的弓形虫RH虫株速殖子RNA为模板,通过RT-PCR获得该虫株的ROP15基因,将该基因连接至原核表达载体pGEX-4T-1上,获得重组质粒pGEX-4T-ROP15,测序结果与预期结果一致;转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导获得重组融合蛋白,运用亲和层析法纯化可溶性ROP15重组蛋白,SDS-PAGE对表达和纯化的目的蛋白进行分析。用纯化的ROP15重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,运用Western blot分析特异性。【结果】成功克隆了弓形虫RH虫株速殖子ROP15基因,大小为924 bp;菌液PCR和酶切鉴定表明重组质粒pGEX-4T-ROP15构建成功,获得了约59 ku的可溶性融合蛋白表达产物;以纯化的可溶性ROP15重组表达蛋白为抗原制备兔源性抗血清,Western blot显示该多克隆抗体与ROP15重组蛋白和RH虫株速殖子总蛋白反应性良好。【结论】克隆出弓形虫RH虫株速殖子的棒状体蛋白15(ROP15)基因,利用原核表达系统获得了重组表达产物,纯化获得纯度较高的重组ROP15蛋白,制备的多克隆抗体与ROP15重组蛋白和RH虫株速殖子总蛋白反应性良好。
关键词
弓形虫
棒
状
体
棒状体蛋白15
原核表达
纯化
多克隆抗
体
Keywords
Toxoplasma gondii
rhoptry
ROP
15
prokaryotic expression
purification
polyclonal antibodies
分类号
S855.9 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弓形虫棒状体蛋白15的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
蒋鹏
王泽祥
车亮
王由森
孙晓林
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2023
0
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已选择
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参考文献
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