利用酵母双杂交筛选与弓形虫棒状体蛋白9相互作用的宿主蛋白

【目的】扩增弓形虫(Toxoplasma gondii)RH虫株速殖子的棒状体蛋白9(ROP9)基因,构建诱饵载体,转化Y2H Gold酵母感受态细胞,进行自激活活性检测,运用酵母双杂交系统筛选与ROP9存在相互作用的人脑组织蛋白质。【方法】运用RT-PCR扩增弓形虫RH虫株速殖子ROP9基因,构建诱饵载体pGBKT7-ROP9,转化Y2H Gold酵母感受态细胞,进行自激活活性检测,以转化诱饵载体pGBKT7-ROP9的Y2H Gold酵母菌株与人脑cDNA文库转化的Y187菌株双杂交筛选与ROP9相互作用的宿主蛋白,对阳性克隆进行测序,并用BLAST分析,筛选出与ROP9存在相互作用的人脑组织蛋白质。【结果】运用酵母双杂交系统,筛选出5个与ROP9相互作用的捕获蛋白质:内质网凝集素蛋白1(ERLEC1)、细胞色素c氧化酶铜分子伴侣(COX11)、驱动蛋白结合蛋白(KIAA1279)、GRCh38、膜联蛋白A11(ANXA11)。【结论】首次运用酵母双杂交技术筛选出与弓形虫ROP9相互作用的宿主蛋白质,为进一步研究ROP9与宿主细胞相互作用和机理奠定基础。