棒状类细菌电击转化中多种条件对转化效率的影响

以质粒ＰＸＺ１０１４５电击转化不同棒状类细菌菌株，研究了影响电击转化效率的诸个因素，在含４％甘氨酸的培养基中生长至对数前期的菌体最适用于电击转化，当以同源ＤＮＡ进行电击转化时，１ｕｇＤＮＡ中转化效率最高可达到８×１０＾６转化子，但用异源ＤＮＡ时，转化效率要比前者低１０＾２￣１０＾３倍。

棒杆菌质粒pXZ10145复制功能区定位

将棒杆菌质粒pXZ10145或pNAT65的不同酶切片段装入大肠杆菌质粒pACYCl77中构建了pTSK系列重组质粒。转化棒状类细菌的实验结果确定了质粒pXZ10145上复制必需区的位置。质粒pXZ10145复制最小必需区定位在NaeI-NruI的1.2kb片段上,在这个片段上只有一个约940碱基的阅读框架。它编码一个质粒复制因子,以对位作用方式协助那些不能自我复制但复制起始区仍保持完整的pTSK质粒在棒状类细菌中复制。质粒pXZ10145复制起始区在一个NaeI-SalI的0.3kb片段上,位于已确定的复制因子编码框架中。