由棕榈疫霉引起的木薯根腐病防控药剂的筛选

采用菌丝生长速率法对由棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)引起的木薯(Manihot esculenta)根腐病进行了15种药剂的筛选。结果表明,杀毒矾(56%代森锰锌.8%恶霜灵WP)、氟吗.乙铝(5%氟吗啉.45%三乙膦酸铝WP)和甲霜.霜霉威(15%甲霜灵.10%霜霉威盐酸盐)的EC50最小,抑菌效果最好;霜霉威盐酸盐(72.2%霜霉威盐酸盐EC)的EC50最大,抑菌效果最差。建议生产上使用杀毒矾、氟吗.乙铝和甲霜.霜霉威来防治木薯根腐病。

进口泰国榴莲上棕榈疫霉的分离和鉴定

从泰国进口的榴莲上分离到一种引起榴莲果实腐烂的病原真菌。通过形态鉴定和核糖体ITS区DNA序列测定以及分子生物学检测结果综合分析,鉴定为榴莲根茎褐腐病菌(棕榈疫霉Phytophthora palmivora(Butl.)Butler)。

木薯根腐病棕榈疫霉病菌的分子检测

由棕榈疫霉引起的根腐病是木薯生产中的重要病害之一。通过比对分析棕榈疫霉与其它疫霉菌ITS序列差异,设计1对特异引物PF1/PR1。结果表明:在优化的反应体系和扩增条件下,利用该引物可从棕榈疫霉菌基因组DNA中特异扩增到1条约540 bp片段,序列测定验证了其准确性,检测灵敏度达到pg级。该对引物可有效用于植物组织和土壤中木薯根腐病棕榈疫霉病菌的特异性检测。此结果将对木薯根腐病的早期快速准确诊断和检测具有重要意义。

等温扩增技术快速检测棕榈疫霉

【目的】棕榈疫霉是农林业生产上的一种危害严重的病原菌,建立棕榈疫霉的快速分子检测技术对于预测疫病发生情况、及时采取有效的防治方法控制疫病的传播和流行、减少经济损失具有重要意义。【方法】采用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了以基因间隔区(intergenic spacer,IGS)为靶标的快速、简单、特异和灵敏的棕榈疫霉菌的检测方法。以IGS基因为靶序列,利用环介导等温核酸扩增技术,设计了多组LAMP引物,同时建立并优化了LAMP反应体系与条件,最终筛选出1组扩增反应结果较好的LAMP引物,采用该组引物进行特异性、灵敏度和实际应用的验证。在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化判定反应结果。【结果】整个检测过程在等温64℃条件下仅需80 min即可通过肉眼直接目测试验结果。在特异性试验中,通过HNB显色只有在棕榈疫霉菌株中能观察到天蓝色的阳性反应,而在其他疫霉、腐霉和真菌的供试菌株仍为紫色的阴性反应;在灵敏度试验中,PpIGS-LAMP技术检测灵敏度达到10fg.μL^(-1)目标菌纯DNA;在实际应用中,PpIGS-LAMP技术能够快速检测出采自田间的木薯根部土壤中目标菌和人工接种发病木薯组织样品的目标菌。【结论】本研究在国内外首次采用环介导等温扩增技术检测棕榈疫霉,建立了1种快速、高灵敏度、高特异性、可视化的棕榈疫霉的LAMP检测方法。建立的棕榈疫霉菌的LAMP检测方法在80 min内可完成待检样品的检测过程,显著缩短检测时间,降低基层部门的检测成本,为棕榈疫霉引起疫病的检疫和所致病害的快速诊断提供了新的检测技术。

番木瓜棕榈疫霉菌的生物学特性研究

对番木瓜疫病菌棕榈疫霉的生物学特性研究结果表明,最适宜棕榈疫霉菌落生长的培养基是V8汁和番茄汁,其次是玉米培养基,较差的是PDA培养基。适宜棕榈疫霉的pH值为4.0～9.0、最适pH值为5.5～7.2;适宜生长的温度范围为15～35℃、最适生长温度为20～28℃,致死温度为45℃,棕榈疫霉对光照不敏感。通过替换碳源的试验得知,最适合棕榈疫霉生长的碳源是蔗糖和淀粉,甘油则较差;添加氮源的试验结果表明,最适合棕榈疫霉生长的是蛋白胨,牛肉膏较差,而硫酸铵会抑制棕榈疫霉的生长。

番木瓜棕榈疫霉核糖体DNA-ITS序列分析

采用真菌核糖体转录间隔区通用引物ITS1和ITS4,PCR扩增了2株分离自广州的番木瓜疫霉菌(Phytoph-thorasp.)的核糖体基因ITS序列,并对PCR产物进行了克隆测序.供试菌株C0506071、C0506072分别克隆出814 bp、830 bp的序列,两菌株ITS序列间的相似同源率为99.62%.将供试菌株的ITS序列与GenBank中登陆的20株疫霉菌株的ITS序列进行聚类分析,结果表明,供试菌株与GenBank注册的AF467093、AJ517463聚在同一分枝上,均为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora),其他不同的疫霉种聚在不同的分支上,系统学关系较远.这表明分离自广州的2株番木瓜疫霉菌为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora).

橡胶树割面棕榈疫霉条溃疡防控药剂的筛选

由疫霉菌侵染引起的割面条溃疡病是我国橡胶生产中的重要病害。本研究采用菌丝生长速率法对分离自海南省儋州市的棕榈疫霉病菌HNRPP02进行了14种杀菌剂的室内毒力测定。结果表明:杀毒矾(56%代森锰锌·8%噁霜灵WP)、甲霜灵(35%甲霜灵ZGF)、阿米西达(25%嘧菌酯SC)和安克(50%烯酰吗啉WP)的EC50最小,抑菌效果最好;霜霉威盐酸盐(66.6%霜霉威盐酸盐AS)的EC50最大,抑菌效果最差。建议橡胶树种植中使用56%代森锰锌·8%噁霜灵WP、35%甲霜灵ZGF、25%嘧菌酯SC和50%烯酰吗啉WP来防治割面条溃疡病。

自然诱变对棕榈疫霉性状遗传与变异的影响

人工模拟酸雨、臭氧、激素、重金属这几种不同的自然条件诱变剂对番木瓜棕榈疫霉进行处理,对处理后的棕榈疫霉进行室内毒力测定比较,观察其发生变异的情况。结果表明:除酸雨外,臭氧、重金属盐和激素等化学诱变处理后,棕榈疫霉的第一代在一定程度上产生了变异,经处理的棕榈疫霉菌比未经处理的生长速度稍慢。而且从第二代培养的结果得出,棕榈疫霉所产生的变异在第二代中依然存在,这也证明了由臭氧、重金属盐和激素等化学诱变处理后所产生的变异得到了遗传。

澳洲石斛疫病病原菌的鉴定及其杀菌剂毒力测定

澳洲石斛(Dendrobium kingianum)属于兰科石斛属植物,在我国作为观赏植物被广泛种植。近年来,广东省澳洲石斛生产上发生一种疫病,该病害为害茎杆和叶片,引起受害部位变褐腐烂,植株死亡,对生产造成严重的影响。从发病的澳洲石斛上分离获得一种真菌,通过致病性测定显示,该菌可以侵染健康的澳洲石斛盆栽植株引起发病,表现出的症状与大田症状相似。从接种发病的植株上再次分离得到的菌株与接种菌的形态特征一致,说明原分离菌为引起澳洲石斛疫病的病原菌。通过形态学特征观察和β-微管蛋白基因(β-tubulin,tub)序列分析对分离菌株进行了鉴定。该菌株的形态学特征与棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)基本一致。BLAST比对分析发现,本研究中的2个菌株(SHL918和SHL921)的tub基因序列与棕榈疫霉的相似性均为99%。在基于tub基因构建的系统发育树上,研究菌株与棕榈疫霉聚在同一分支上,支持率为100%。因此,结合形态学特征和系统发育分析将引起澳洲石斛疫病的病原菌鉴定为棕榈疫霉(P.palmivora)。棕榈疫霉侵染澳洲石斛引起疫病为首次报道。进一步采用菌丝生长速率法测定10种杀菌剂对澳洲石斛疫病病原菌的毒力作用,结果显示,双炔酰菌胺、烯酰吗啉、甲霜灵和精甲霜灵·代森锰锌4种杀菌剂对该病原菌的毒力较强,EC50分别为0.00003、0.0628、0.2381、0.5457μg/mL;其次是百菌清、嘧菌酯和代森锰锌,EC50均小于10μg/mL;而霜霉威盐酸盐和三乙膦酸铝的抑制效果差,EC50均大于100μg/mL;多菌灵对该病原菌基本无抑制作用,EC50大于1000μg/mL。本研究结果可为澳洲石斛疫病的田间防治提供理论依据。

泰国榴莲上棕榈疫霉的分离和鉴定

在对来自泰国的榴莲检验中分离到1株引起榴莲果皮和果肉变色、软腐的病原真菌。通过形态鉴定和核糖体ITS区DNA序列测定以及系统发育分析,最终将该病菌鉴定为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)。

大豆疫霉根腐病抗性研究进展

大豆疫霉根腐病由卵菌大豆疫霉菌（Phytophthora sojae）侵染引起,是一种大豆生产上危害非常严重的病害。大豆对疫霉菌的抗性表现有2种,一种是由单位点显性基因Rps控制的完全抗性,对大豆疫霉菌小种具有特异性,另一种为多基因控制的部分抗性,由数量性状位点控制,对所有大豆疫霉菌小种具有广谱抗性。迄今已定位、鉴定了26个单位点Rps基因,分别分布在第2（1个）、3（12个）、10（1个）、13（4个）、16（2个）、17（1个）、18（4个）及19（1个）条染色体上。其中,Rps1k提供了最稳定的PRR抗性。尽管在Rps2等位点区域检测到了抗病基因簇,但至今仅从Rps1k位点分离出了功能基因Rps1k-1和Rps1k-2,二者均为CC-NBS-LRR类型基因,且在细胞内可重组形成Rps1k-3。单位点基因的PRR抗性一般能维持8～15年左右,QTL控制的PRR抗性则较稳定、持久。有待不断发现新的PRR抗性资源和鉴定新的抗性基因,以及阐明大豆抗PRR的遗传与分子机制以长期、有效地防治大豆PRR。本文主要针对大豆的PRR抗性研究,尤其是近年在多个新Rps基因的鉴定、相关基因组学（转录组学）、小RNA及蛋白质组学上的研究,以及影响大豆PRR抗性的基因功能鉴定等方面所取得的进展进行了综述。

32份木薯种质对疫霉根腐病的抗性评价和农艺性状分析

通过田间自然发病和室内离体接种方法对32份木薯种质进行了棕榈疫霉根腐病抗病性评价,结果表明,供试的32份木薯种质中,高抗种质7份,抗病种质7份,中感种质8份,感病种质7份,高感种质3份。其中高抗种质为‘H360’、‘华南11号’、‘华南8号’、‘H588’、‘桂热3号’、‘H873’和‘H971’;抗病种质为:‘F556’、‘H502’、‘GR911’、‘C-4’、‘F10’、‘南植188’和‘H47’。对其中14份抗棕榈疫霉根腐病木薯种质的农艺性状进行了鉴定和评价,结果表明‘华南8号’、‘GR911’、‘F556’、‘C-4’、‘H360’可以进一步加以利用。

甘肃白兰瓜、西瓜疫霉种的鉴定研究

从甘肃白兰瓜、西瓜上分离出15株疫霉,鉴定出两个种:掘氏疫霉Phytophthoradrechsleri Tuckcr,辣椒疫霉P.capsici Lconian。分离物经过配对培养,均可产生性器官,10株掘氏疫霉为A_1交配型,5株辣椒疫霉为A_2交配型。

芽孢杆菌1205和烟草疫霉处理后对烟苗防御酶的测定

分别将烟苗接种芽孢杆菌(Bacillus subtilis)1205和烟草黑胫病菌病原菌烟草疫霉(Phytophthora parasitica Gzufp-9)在接种后1、3、5、7、9、11 d测定烟苗过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)3种与植物抗病密切相关的酶活性变化。结果表明,接种芽孢杆菌1 205后,PAL、PPO活性在5 d时达到最高值,明显高于对照和接种烟草疫霉,POD活性在接种1 d时即达到最高值。而接种烟草疫霉后PAL、PPO活性均在3 d时达到最高值,POD活性在接种1 d时达到最高值。

烟草疫霉分离及生长培养基的选择

采用不同的基本培养基添加抗生素组合对烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)进行分离培养。结果表明,以V8培养基(100 mL/L V8汁+0.02 g/L CaCO3+2 g/L洋菜)为基本培养基附加10 mg/mL氨苄青霉素+5 mg/mL制霉素+5 mg/mL多菌灵的选择培养基分离烟草疫霉的效果较好,分离成功率达100%,菌丝的生长状态也较好。菌丝分离后在V8基本培养基中培养,菌丝紧密、浓白、粗壮,菌落大、长势旺。

广东柑橘疫霉研究

从广东省柑橘栽培老区的苗圃和果园采集的罹病柑橘组织样本中分离获得36个疫霉菌株,鉴定出6个种,其中柑橘褐腐疫霉Phytophthoracitrophthora11株,烟草疫霉P.nicotianae9株,棕榈疫霉P.palmivora7株,辣椒疫霉P.capsici和掘氏疫霉P.drechsleri各4株,柑橘生疫霉P.citricola1株.

四川省无花果疫霉病病原鉴定

为明确四川省无花果爆发的疫霉病病原菌种类,对四川省无花果种植区的无花果疫霉病的发生进行调查,并采集发病果实。采用组织分离法对无花果疫霉病的病原菌进行分离培养,并通过形态与分子鉴定相结合对该病原菌进行鉴定。结果表明,病原菌菌丝为白色;卵孢子球形;孢子囊椭圆形或卵形,顶端有乳突。分子生物学鉴定结果显示:四川省无花果疫霉病病原菌与棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)序列同源性高达99%。根据形态学和分子鉴定,将四川省无花果疫霉病病原菌鉴定为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)。

菠萝心腐病原疫霉种的鉴定

1997～2000年,从广州及其周边地区的菠萝心腐植株上分离得到疫霉菌8株,鉴定出3个种,即柑桔褐腐疫霉(Phytophthoracitrophthora)1株,烟草疫霉(P.nicotianae)5株和棕榈疫霉(P.palmivora)2株。

文山三七疫病病原菌的分离与鉴定

对发生于文山地区的三七疫病发病部位进行观察和症状描述,并对文山县的追栗街、小街腰店、老回龙,马关县的八寨、雾路者、马白镇下寨、浪桥乡等不同海拔地区的三七疫病病样进行病菌分离、病菌的形态学特征观察以及病原菌的致病性测定,明确了病菌在文山地区不但能侵染三七植株的地上部位,还能引起地下部分的种腐和根腐,是目前三七生产中一个重要病害,病原菌为恶疫霉Phytophthora cactorum(Leb.etCohn)Schr et。

辣椒疫病发生及防治

辣椒疫病(Phytophthora capsiciLeonian)菜农称为死秧病,是由藻菌纲,霜霉目,疫霉属真菌寄生所引起的一种重要病害。1989年江西南昌杨子洲发病面积占辣椒栽培面积的90%以上,严重者绝收。我们于1989年5月份开始对杨子洲辣椒疫病的发生和防治情况进行了调查。