七鳃鳗棕榈酰蛋白硫酯酶1的基因克隆、系统进化及组织特异性表达分析

棕榈酰蛋白硫酯酶1(palmitoyl protein thioesterase 1,PPT1)能够催化棕榈酰蛋白的去棕榈酰化修饰,通过调节蛋白的棕榈酰化修饰参与多种细胞生物学进程.从日本七鳃鳗(Lampetra japonica)白细胞cDNA文库的表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)中获取PPT1基因片段,经RT-PCR扩增获得七鳃鳗PPT1蛋白的全序列cDNA.基因全长为972bp,编码323个氨基酸组成的蛋白质,理论分子量为36.6kDa,等电点为5.91,并含有1个信号肽.通过同源序列比对分析结果显示,日本七鳃鳗PPT1与其他物种PPT具有很高的同源性.利用实时荧光定量PCR法检测到PPT1基因在七鳃鳗的各组织中广泛表达,其中在白细胞、心脏、肠、鳃中表达量较高,在肝脏中表达量最低.本研究为探讨七鳃鳗PPT1功能研究奠定了理论基础.

circRNA CPT1A调控PTEN在糖尿病视网膜病变患者神经组织病变中的作用

目的 研究circRNA肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)在糖尿病视网膜病变(DR)患者中的表达情况,并探讨其对神经组织病变的作用。方法 选取我院2019年1月至2022年1月收治的2型糖尿病患者80例(102眼),其中无DR(NDR)患者22例(28眼)为NDR组,非增生型DR(NPDR)患者38例(48眼)为NPDR组,增生型DR(PDR)患者20例26眼为PDR组。采用OCTA检查患者视盘周围视网膜神经纤维层(pRNFL)厚度、黄斑神经节细胞复合体(GCC)厚度,采用Western blot检测患者外周血磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN),采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测患者外周血circRNA CPT1A。比较3组患者外周血circRNA CPT1A、PTEN以及pRNFL、GCC厚度,并采用Pearson相关分析患者circRNA CPT1A与PTEN、pRNFL厚度、GCC厚度的相关性。结果 PDR组患者外周血circRNA CPT1A均高于NDR组、NPDR组,而PDR组患者外周血PTEN均低于NDR组、NPDR组(均为P<0.05);NDR组与NPDR组患者外周血circ RNA CPT1A、PTEN差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Pearson相关性分析结果显示,患者外周血circRNA CPT1A与PTEN呈负相关性(P<0.05)。随着疾病严重程度的增加,pRNFL以及GCC厚度均呈降低趋势,NDR组患者的整体、上半部分、下半部分pRNFL厚度以及GCC厚度均高于NPDR组(均为P<0.05),NPDR组患者以上指标均高于PDR组(均为P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,患者外周血circRNA CPT1A分别与受检眼的整体、上半部分、下半部分pRNFL厚度以及GCC厚度均呈负相关性(均为P<0.05)。结论 随着DR严重程度的增加,DR患者外周血circRNA CPT1A呈增加趋势,且与外周血PTEN、pRNFL厚度以及GCC厚度呈负相关性,其作用机制可能为circRNA CPT1A负性调控PTEN的表达,从而参与DR的发生、发展。

溶酶体酶PPT1介导的细胞稳态调控及疾病发生的研究进展

棕榈酰蛋白质硫酯酶1(palmitoyl protein thioesterase 1,PPT1)是一种溶酶体酶,具有对蛋白质行使去棕榈酰化修饰的功能,在调控细胞器(如溶酶体、线粒体)功能、脂质代谢和Ca2+转运等方面具有重要作用。PPT1在神经系统疾病和癌症的发生发展中发挥了重要的作用,然而其调控作用机制仍未被完全阐明。本文综述了目前PPT1在脂质代谢调控、物质转运调控、钙稳态调控过程中的作用及最新研究进展,总结并探讨了PPT1在神经系统疾病及肿瘤发生发展中作用及调控机制,为将来更深层次研究PPT1的功能及调控机制并开发相关疾病治疗的新药物提供借鉴和参考。

棕榈酰蛋白硫酯酶1在低级别胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的探讨棕榈酰蛋白硫酯酶1(PPT1)在低级别胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法比较癌症基因组图谱(TCGA)和中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)中PPT1在脑胶质瘤组织中的表达水平。根据其在肿瘤组织中表达的中位数,将患者分为高低表达组,通过Kaplan-Meier生存分析比较不同病理分级下两组总生存期是否存在差异。收集2017年11月至2020年11月于武汉大学人民医院神经外Ⅲ科行手术治疗的75例患者的胶质瘤组织标本进行免疫组织化学染色验证并分析其与胶质瘤患者预后的关系。组间比较采用方差检验和t检验,生存分析组间比较采用Log-rank检验。最后进行富集分析以探讨PPT1相关的分子信号通路。结果TCGA数据库中低级别胶质瘤PPT1表达量的平均每千碱基对百万转录(TPM)值为120.98±21.35,高级别胶质瘤平均TPM值为174.61±34.28,均高于正常组,差异有统计学意义(t=2.279,2.586,P<0.05)。CGGA数据库中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤PPT1表达量的平均TPM值分别为82.54±22.26、91.39±27.93和98.40±28.06。在Ⅲ级与Ⅳ级样本中的表达量均高于Ⅱ级样本(t=2.381、4.737,P<0.05),差异有统计学意义。生存分析提示PPT1高表达组和低表达组间总生存期差异均有统计学意义,高表达组与较差的预后明显相关(χ^(2)=34.660,P<0.01)。临床标本免疫组织化学染色显示,Ⅱ~Ⅳ级胶质瘤中均可发现PPT1蛋白的表达,平均吸光度(MOD)值分别为0.643±0.446、0.968±0.479和1.267±0.626。Ⅲ级和Ⅳ级样本中的表达量均高于Ⅱ级样本(t=2.454,3.960,P<0.05)。临床样本PPT1高表达组和低表达组间总生存期差异有统计学意义,高表达组与较差的预后明显相关(χ^(2)=10.200,P<0.01)。PPT1高表达的肿瘤样本最显著富集的通路包括蛋白质降解特征通路,尤其是溶酶体相关基因集。结论PPT1主要与溶酶体相关通路有关,其高表达与患者预后不良明显相关。

婴儿型神经元腊样质脂褐质沉积症的临床特点(附1例报告)

目的探讨婴儿型神经元腊样质脂褐质沉积症(INCL)的临床特点。方法回顾性分析1例INCL患者的临床资料。结果本例为2岁男童,婴儿期起病,以精神运动发育落后,并出现倒退为主要症状。1岁6个月头颅MRI示:脑萎缩、脑室周围白质减少、胼胝体变薄。2岁头颅MRI:脑萎缩样改变,较1岁6个月MRI进展。棕榈酰蛋白质硫酯酶1(PPT1)基因检测到致病的复合杂合突变:c. 550G> A(p. E184K)和c.362+5G> A。结论婴儿期出现认知、运动落后甚至倒退患儿可能提示INCL,头颅MRI检查若发现脑萎缩更需警惕,确诊通过基因检测。

柚皮苷调节NAFLD小鼠脂代谢紊乱机制研究

目的探讨柚皮苷(nar)对高脂饮食(HFD)诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝组织脂代谢紊乱的影响。方法将24只C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=8)、高脂饮食组(HFD组,n=8)和柚皮苷干预组(HFD/Nar干预组,n=8)。采用转录组测序寻找药物干预差异基因富集通路,采用qPCR和Western Blot法检测肝组织脂代谢相关基因及其蛋白表达。结果与对照组比,模型组小鼠体质量增加了57.8%(P<0.01),而经柚皮苷干预后,小鼠体质量较模型组降低了13.5%(P<0.01);模型组小鼠肝组织TG和TC水平分别为(3.5±0.4)mmol/g protein和(3.1±0.5)mmol/g protein,均显著高于对照组[分别为(1.0±0.3)mmol/g protein和(0.8±0.1)mmol/g protein,P<0.01],而HFD/Nar干预组肝组织TG和TC较模型组显著下降[分别为(2.1±0.4)mmol/g protein和(1.11±0.3)mmol/g protein,P<0.05];转录组测序KEGG富集分析显示柚皮苷对与脂代谢通路相关的9条通路有显著影响,表现为柚皮苷干预可显著下调肝组织固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR-γ)、CD36和肝型脂肪酸结合蛋白1(FABP1)表达(P<0.05),而上调PPAR-α和重组肉毒碱棕榈酰转移酶1a(CPT-1A)表达(P<0.05)。结论柚皮苷可明显改善NAFLD小鼠肝内脂质沉积,可能影响了有关基因表达而减少了脂质摄取、合成,加快脂肪酸氧化有关。

RNA干扰PPT1基因表达对小鼠Sertoli细胞功能的影响

目的：探索PPT1基因在小鼠支持细胞（Sertoli细胞）中的功能。方法采用RNA干扰技术下调小鼠Sertoli细胞株TM4中PPT1基因的表达，并运用MTS法检测细胞活力，Annexin V染色结合流式细胞技术检测细胞凋亡，Mito Tracker Red染料染色细胞，并在激光共聚焦显微镜下观察线粒体且测得荧光强度以检测线粒体活性，透射电镜观察线粒体超微结构变化。结果抑制小鼠TM4细胞中PPT1基因的表达可降低其细胞活力和线粒体活性，导致线粒体超微结构发生改变，并增加细胞凋亡率。结论 PPT1基因对维持小鼠Sertoli细胞的功能具有重要作用。

有氧运动抑制心力衰竭大鼠心脏脂质沉积:AMPK-PPARα信号通路的作用

目的:观察8周有氧运动对心力衰竭大鼠心脏脂质沉积和心功能的影响,探讨AMP激活的蛋白激酶(AMPK)—过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)信号通路在其中的作用机制。方法:结扎大鼠冠状动脉建立心梗后心衰模型,术后4周随机分为假手术安静组(Sham组)、心梗安静组(MI-Sed组)和心梗运动组(MI-Ex组)。MI-Ex组进行为期8周的跑台运动,Sham组和MI-Sed组保持安静状态。实验结束后,左心室导管法测定血流动力学参数包括左心室收缩期压力(LVSP)、左心室舒张末期压力(LVEDP)、左心室压力最大上升速率(+dp/dtmax)和左室压力最大下降速率(-dp/dtmax);比色法测定心肌和血浆游离脂肪酸(FFA)水平;氧化酶法测定心肌甘油三酯含量;实时荧光定量PCR检测心肌PPARα和肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)mRNA水平;Western blot法检测心肌总AMPKα、磷酸化的AMPKα(p-AMPKα)、PPARα和CPT-1蛋白表达水平。结果:与Sham组比较,MI-Sed组LVSP、±dp/dtmax显著性下降(均为P<0.01),LVEDP则显著性升高(P<0.01);血浆FFA、心肌FFA和甘油三酯水平升高(均为P<0.01);心肌PPARα和CPT-1 mRNA及蛋白显著降低(均为P<0.01),p-AMPKα蛋白显著升高(P<0.05)。与MI-Sed组比较,MI-Ex组LVSP、±dp/dtmax显著性升高(均为P<0.01),LVEDP则显著性下降(P<0.01);血浆FFA、心肌FFA和甘油三酯水平显著降低(均为P<0.01);心肌PPARα和CPT-1 mRNA和蛋白以及p-AMPKα蛋白水平均显著性升高(均为P<0.01)。结论:长期有氧运动活化AMPK-PPARα信号通路,上调CPT-1表达,促进心肌对FFA的氧化利用,从而减轻HF后心脏脂质过度沉积、改善脂毒性心脏异常并提高心功能。

大强度间歇运动对高脂喂养大鼠代谢表征和骨骼肌脂代谢基因表达的影响

研究目的:探讨大强度间歇运动对高脂诱导大鼠肥胖症的预防作用及骨骼肌脂代谢调控机制,为肥胖症的预防提供理论和实践依据。研究方法:37只雄性SD大鼠分为对照安静组(CS组)、高脂安静组(HS组)、高脂持续运动组(HE组)和高脂间歇运动组(HI组)。HE组和HI组分别进行低强度持续运动和大强度间歇运动训练,每周5天,共10周。定期测量摄食量和体重,采用全自动生化分析技术检测血脂、血糖含量,Elisa试剂盒检测血清胰岛素含量,H&E染色法观察脂肪细胞大小,Real-time PCR技术检测骨骼肌脂代谢调控基因Rev-erbα、SCD1、CPT1和FAT/CD36mRNA相对表达量,Western blot技术检测各调控基因的蛋白表达量。结果:HS组体重、血脂和血糖、脂肪细胞大小显著增加,QUICKI指数下降。HI组体重、血脂、血糖和脂肪细胞大小明显降低,QUICKI指数升高;且效果明显优于低强度持续运动方式。HS组FAT/CD36和SCD1mRNA与蛋白表达量明显高于CS组;HI组Reverbα、FAT/CD36和CPT1mRNA表达量显著高于HS组;HE组与HS组无统计学差异。结论:高脂饮食诱导大鼠代谢表征和骨骼肌脂代谢异常。分子生物学机制分析表明,大强度间歇运动促进脂肪酸跨膜转运、胞内合成和参与β氧化,有效预防高脂饮食诱导的代谢表征异常和骨骼肌脂质代谢紊乱,其效果明显优于低强度持续运动方式。大强度间歇运动刺激Rev-erbα表达上调,增加对脂代谢调节因子的调控,可能是维持骨骼肌脂质稳态适应的新机制。

甲醛对HepG2细胞脂肪代谢的影响

目的:探讨甲醛对HepG2细胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量的影响及其可能机制。方法:以0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 mmol/L的甲醛(formaldehyde,FA)分别处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用CCK-8法检测细胞活性,GPO-POD酶法测定细胞内TG含量。另分别以0.004、0.02、0.1 mmol/L的甲醛处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用Western blot法检测肉碱棕榈酰转移酶1(carnitine palmitoyl transferase 1,CPT1)、固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-bindingprotern-1c,SREBP-1c)、腺苷酸核糖基化因子1(ADP-ribosylation factor 1,Arf1)和包被蛋白Ⅰ(coat protein comlexⅠ,COPⅠ)的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,0.5～12.5 mmol/L FA染毒24 h或0.1～12.5 mmol/L染毒48 h时可显著降低HepG2细胞活性(P均<0.05);0.1 mmol/L FA染毒24 h,或者0.1和0.02 mmol/L FA染毒48 h,均可致HepG2细胞内TG含量显著升高(P均<0.05);FA染毒48 h引起肝细胞内CPT1表达水平明显降低(P均<0.05),SREBP-1c和COPⅠ表达水平在染毒24和48 h后均增高(P均<0.05),FA染毒24 h后Arf1表达水平明显增加(P<0.05)。结论:FA接触可引起HepG2细胞内TG含量增加,其机制可能与脂肪酸β氧化受到抑制和脂肪合成增加有关。

黄芪多糖对糖尿病大鼠血游离脂肪酸水平的影响及其机制

目的 探讨黄芪多糖对糖尿病大鼠血游离脂肪酸水平的影响及其机制.方法 选取SPF级雄性Wistar大鼠40只,完全随机分成4组,每组10只：空白对照组、糖尿病组[高热量饮食＋小剂量链脲佐霉素（35 mg/kg）尾静脉注射后糖尿病造模成功继续高热量饮食]、黄芪多糖对照组[黄芪多糖400 mg/（kg·d）灌胃]和黄芪多糖干预组[糖尿病造模成功＋高热量饮食＋黄芪多糖400 mg/（kg·d）灌胃].给药5周后观察动物一般情况,检测血糖、血清游离脂肪酸和胰岛素水平.取肝脏组织,采用蛋白质印迹法测各组磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、总腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、细胞膜脂肪酸转运酶/CD36（FAT/CD36）、肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT1）蛋白表达水平.结果 糖尿病组动物血清游离脂肪酸、血糖水平及体质量明显高于空白对照组、黄芪多糖对照组与黄芪多糖干预组[分别为（0.54 ±0.13） mmol/L比（0.24±0.12）、（0.22 ±0.10）、（0.35±0.11） mmol/L,（20.5±3.2） mmol/L比（7.0±0.7）、（7.3±0.5）、（11.1±2.3）mmol/L,（223 ±3）g比（202 ±4）、（201 ±3）、（205 ±3）g,均P＜0.05].黄芪多糖干预组血清游离脂肪酸和血糖水平低于糖尿病组（P＜0.05）,而各组胰岛素水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）.糖尿病组动物肝脏p-AMPK、CPT1、细胞膜脂肪酸转运酶FAT/CD36蛋白表达明显低于其他3组（P＜0.05）.而各组总AMPK及FAT/CD36表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 黄芪多糖可以通过非胰岛素途径活化AMPK降低糖尿病大鼠游离脂肪酸水平,改善胰岛素抵抗.

不同海拔大鼠习服过程中肝脏脂肪酸代谢相关指标变化

目的观察中、高不同海拔地区不同暴露时间下大鼠肝脏组织中参与脂肪酸代谢酶表达水平及相关指标变化。方法SPF级雄性大鼠110只,分为对照组(10只)、中海拔组(50只)、高海拔组(50只);对照组、中海拔、高海拔组高度分别为400 m、2260 m、4300 m,对照组饲养30 d,中、高海拔饲养1、3、7、15、30 d。到达规定的暴露时间后,将动物称重麻醉,取血,离心后取血浆保存;取适量肝组织保存备用。结果与对照组比较,中海拔和高海拔暴露期间,各组大鼠血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、游离脂肪酸(FFA)含量无显著差异。与对照组比较,中海拔各组肝脏酮体均无显著差异(P>0.05);高海拔暴露第3天酮体含量显著高于对照组、高海拔1 d组及中海拔3 d组(P<0.05)。与对照组比较,低氧诱导因子(HIF)-1αmRNA在中、高海拔暴露的第1、3、7、15天显著升高;AMP激活的蛋白激酶(AMPK)mRNA在中海拔暴露的1、3、7、30 d及高海拔暴露的1、3、7、15、30 d显著降低,高海拔暴露第15天显著低于中海拔暴露第15天(P<0.05);乙酰辅酶A羧化酶(ACC)1 mRNA在中、高海拔暴露的1、3 d显著升高,且高海拔暴露第1、3天显著高于中海拔暴露第1、3天(P<0.05);棕榈酰基转移酶(CPT)-1 mRNA在中海拔暴露3 d显著升高,15 d显著降低,在高海拔暴露3 d显著升高,第7天开始降低,第15天显著降低,高海拔暴露第3天显著高于中海拔3 d,高海拔暴露第7、15天显著低于中海拔7、15 d(P<0.05)。与对照组比较,HIF-1α蛋白在中海拔第3天显著升高,高海拔暴露的第1、3天显著升高,且显著高于中海拔组第1、3天(P<0.05);AMPK蛋白在中海拔暴露的3、7、15、30 d及高海拔暴露的1、3、7、15、30 d显著降低,高海拔暴露各组显著低于中海拔各组(P<0.05);ACC1蛋白在中海拔暴露的3 d显著升高,在高海拔暴露的第1、3天显著升高,且显著高于中海拔暴露的第1、3天(P<0.05);CPT-1蛋白在中海拔暴露的3 d显著升高;在高海拔暴露的第3天显著升高,第7、15天显著降低;高海拔暴露第7、15天显著低于中海拔第7、15天(P<0.05)。结论中高海拔与平原地区大鼠肝脏脂肪酸代谢存在差异;中海拔地区急性暴露期的脂肪酸合成与氧化代谢增强,慢性期随着缺氧迅速改善,与平原地区水平无差异。在高海拔地区脂肪酸合成代谢随着暴露时间的延长呈现一过性增强,随后降低至对照组水平,而脂肪酸氧化代谢可能呈现先增强后减弱的趋势,随后降至对照组水平。在同一暴露时间下,在急性期,高海拔脂肪酸合成代谢较中海拔显著增强;而在慢性期无显著差异。

MICT/HIIT对高脂膳食大鼠心肌和比目鱼肌超微结构的影响及机制探讨

目的:观察中等强度持续运动(MICT)与高强度间歇运动(HIIT)对高脂膳食大鼠心肌和比目鱼肌超微结构的影响并探讨其机制。方法:5周龄雄性SD大鼠随机分为普通膳食安静组(C)、高脂膳食安静组(F)、高脂膳食MICT组(M)和高脂膳食HIIT组(H),每组8只,高脂膳食饲料脂肪含量为45%。M和H组进行12周坡度为25°的跑台运动,M组进行70%VO_(2)max强度的持续运动,H组进行以5 min 40%~45%VO_(2)max和4 min 95%~99%VO_(2)max强度依次交替的间歇运动。干预结束后检测血清FFA、TG、HDL、LDL含量;透射电镜观察大鼠心肌和比目鱼肌超微结构;Western blot检测心肌和比目鱼肌AMPK、MCD及CPT-1的蛋白表达。结果:与C组比较,F组大鼠体重、Lee`s指数、血清LDL、TG和FFA含量均增加,HDL含量降低(P<0.05);心肌和比目鱼肌AMPK、CPT-1蛋白表达升高,MCD蛋白表达降低(P<0.05),超微结构损伤。与F组比较,M、H组大鼠体重、Lee`s指数降低、血清LDL、FFA含量降低(P<0.01);心肌AMPK、MCD、CPT-1蛋白表达增加,比目鱼肌AMPK、MCD蛋白表达增加(P<0.05),超微结构损伤减轻。与M组比较,H组大鼠血清HDL含量增加(P<0.01),心肌AMPK、MCD蛋白表达增加,超微结构损伤较轻;比目鱼肌AMPK蛋白表达降低,MCD蛋白表达增加(P<0.05),超微结构损伤较重。结论:MICT与HIIT可通过干预AMPK、MCD、CPT-1蛋白表达,对高脂膳食大鼠心肌和比目鱼肌超微结构产生不同影响。

中海拔地区不同暴露时间下大鼠肝脏组织脂肪酸代谢相关指标变化

目的观察中海拔地区不同暴露时间下大鼠肝脏组织脂肪酸代谢相关指标的变化。方法SPF级SD雄性大鼠60只,根据饲养环境不同分为对照组、1 d组、3 d组、7 d组、15 d组、30 d组各10只,对照组在西安交通大学医学部动物实验中心动物房(海拔400 m)饲养30 d;1 d组、3 d组、7 d组、15 d组、30 d组分别在青海大学医学院高原医学中心动物房(海拔2260 m)饲养1、3、7、15、30 d。检测各组血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、游离脂肪酸(NEFA)及肝脏组织中的酮体(KB);检测肝脏组织中的AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC-1)、肉碱棕榈酰基转移酶1(CPT-1)和低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及蛋白。结果各组血浆ALT、NEFA及肝脏组织中KB水平差异均无统计学意义。对照组肝脏组织中AMPK mRNA表达量高于1 d组、3 d组、7 d组、15 d组和30 d组(P均<0.05)。15 d组ACC-1、CPT-1 mRNA表达量最低,30 d组ACC-1、CPT-1 mRNA表达量升高至对照组水平;1 d组、3 d组、7 d组、15 d组HIF-1αmRNA表达量高于对照组,30 d组降低至对照组水平。对照组与1 d组AMPK蛋白表达高于3 d组、7 d组、15 d组、30 d组(P均<0.05);3 d组ACC-1、CPT-1、HIF-1α蛋白表达量高于对照组、1 d组、7 d组、15 d组、30 d组(P均<0.05)。结论中海拔地区与平原地区暴露的大鼠脂肪酸代谢存在差异。中海拔地区急性暴露期大鼠脂肪酸合成与氧化代谢呈现一过性增强,至暴露第7天,随着缺氧迅速改善,又恢复到平原地区水平。

桑叶调节PI3K/Akt/PPARα/CPT-1通路改善2型糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢紊乱机制

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/过氧化物酶体增殖物激活受体α/肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(PI3K/Akt/PPARα/CPT-1)信号通路探讨桑叶水提物对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏糖脂代谢紊乱的作用及其机制。方法:高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法制备T2DM模型,按血糖、体质量将造模成功大鼠随机分为模型组、二甲双胍(0.2 g·kg^(-1))组和桑叶水提物(含生药4.0 g·kg^(-1))组,连续给药8周,每周相同时间测定空腹血糖。苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色观察肝脏组织形态学和脂肪变化;生化分析法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨基酸氨基转移酶(AST)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、PPAR-α、CPT-1蛋白表达。结果:给药8周后,与正常组比较,模型组大鼠血糖显著升高(P<0.01);与模型组比较,桑叶水提物组大鼠血糖显著降低(P<0.01)。HE染色显示,正常组大鼠肝组织结构完整,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列;模型组大鼠肝细胞损伤明显;与模型组比较,桑叶水提物组大鼠空泡变性程度显著降低,未见小胆管增生等病变。油红O染色显示,正常组大鼠肝细胞无明显脂肪变性、坏死,肝细胞几乎无脂滴;模型组大鼠肝内脂滴较正常组明显增加;桑叶给药可明显减少大鼠肝脏脂滴。模型组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较正常组显著升高(P<0.01);桑叶水提物组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,桑叶水提物能明显增加p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:桑叶水提物可改善T2DM大鼠肝脏糖代谢紊乱,降糖机制可能与调控PI3K/Akt/PPAR-α/CPT-1信号通路有关。