表皮生长因子受体和Kirsten鼠肉瘤基因及棘皮动物微管相关类蛋白4-间变性淋巴瘤激酶融合基因突变在肺腺癌组织中的表达及其临床意义

目的评估表皮生长因子受体(EGFR)基因、Kirsten鼠肉瘤(KRAS)基因及棘皮动物微管相关类蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因3种肿瘤驱动基因在肺腺癌组织中的表达并分析其临床意义。方法收集2014年1月至2017年8月在新疆维吾尔自治区人民医院行手术确诊并术后行EGFR、KRAS基因及EML4-ALK融合基因突变检测的172例肺腺癌患者的肺腺癌组织标本。分析3种肿瘤驱动基因突变与临床相关指标的关系。结果 172例患者中共检测到EGFR基因突变者66例(38.4%),病理分型腺泡型、乳头型及贴壁性,年龄≤60岁、女性、男性未吸烟或轻度吸烟、高分化和中分化患者EGFR基因突变率较高(均P<0.05);共检测到KRAS基因突变者39例(22.7%),病理分型实体性以及微乳头型、年龄>60岁、男性、重度吸烟者、低分化患者KRAS基因突变率较高(均P<0.05);共检测到EML4-ALK融合基因突变14例(8.1%),年龄≤60岁、男性未吸烟和轻度吸烟、高分化和中分化患者EML4-ALK融合基因突变率较高(均P<0.05),EML4-ALK融合基因突变与患者病理分型和性别无关(均P>0.05)。172例肺腺癌患者中,1例患者出现EGFR基因与EML4-ALK基因共同突变,1例患者出现KRAS基因与EML4-ALK基因共同突变,未出现EGFR基因与KRAS基因共同突变。结论患者病理分型、年龄、性别、吸烟状况及肿瘤分化程度与3种肿瘤驱动基因突变有一定的关系,3种肿瘤驱动基因在肺腺癌中很少共同突变。多基因联合作用的肺腺癌患者的抗肿瘤靶向治疗需要更多的研究为临床提供理论依据。

棘皮动物微管相关类蛋白4-间变性淋巴瘤激酶与耐药性非小细胞肺癌研究进展

非小细胞肺癌（NSCLC）是肺部恶性肿瘤中最常见的病理类型，占肺癌总数的85%,由于其起病隐匿，多数NSCLC患者明确诊断时已处于中晚期，已失去手术治疗机会， 而目前以铂类为主的联合标准化疗方案因不良反应多、有效率有限，使得晚期NSCLC患者治疗较为棘手。随着近年来对恶性肿瘤分子生物学的不断深入研究，以表皮生长因子受体 （EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（TKI）为代表的分子靶向精准治疗成为中晚期NSCLC患者的最佳选择，然而部分NSCLC患者EGFR基因检测阴性或对EGFR-TKI无效或耐药，因此，尚需进一步探 寻耐药性NSCLC的有效治疗策略。

建立实时荧光定量逆转录PCR方法检测非小细胞肺癌棘皮动物微管相关蛋白4-间变淋巴瘤激酶融合基因

目的建立一种实时荧光定量逆转录PCR方法,对非小细胞肺癌间变淋巴瘤激酶(ALK)融合基因进行快速、敏感和特异检测。方法首先,应用Primer Premier 5.0软件,针对棘皮动物微管相关蛋白4(EML4)-ALK常见融合变异V1、V2、V3a和V3b设计引物和Taqman水解探针。然后,以包含EML4-ALK融合变异V1、V2、V3a和V3b的假病毒颗粒为研究对象,进一步分析所建立方法的灵敏度、敏感性和特异性。最后,用所建立的方法检测50例非小细胞肺癌临床标本,其中包含3例ALK-荧光原位杂交(FISH)(+)样本。结果在无背景RNA干扰情况下,建立的实时荧光定量逆转录PCR方法检测灵敏度高达10拷贝/!l。在500拷贝/!l的野生型背景RNA下,其敏感性达1%,在5000拷贝/!l的野生型背景RNA下,其敏感性达0.5%。对于检测特异性,以正常人白细胞及血浆RNA为研究对象,均未见非特异性扩增。对50例非小细胞肺癌临床标本进行检测,47例阴性标本检测均为阴性,3例ALK-FISH(+)标本2例检测阳性,1例未检出,未检出原因与标本RNA提取失败有关。结论本研究建立的实时荧光定量逆转录PCR方法是一种快速、简便以及具有高灵敏度和特异性的EML4-ALK融合基因检测方法,值得在临床进一步验证和推广。

甲磺酸阿帕替尼治疗间变性淋巴瘤激酶抑制剂耐药非小细胞肺癌的疗效分析

目的:评估阿帕替尼联合化疗治疗间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)抑制剂耐药非小细胞肺癌的有效性和安全性。方法:选择我院2018年7月至2019年6月确诊的ALK抑制剂耐药的非小细胞肺癌患者,随机数字表法分组后评估阿帕替尼联合化疗治疗的疗效和毒性,并通过Kaplan-Meier方法进行生存分析。结果:本研究包括30例患者,其中15例接受阿帕替尼联合化疗治疗,另15例接受单纯化疗。所有患者进行了无进展生存期评估,其中联合组中5例患者达到部分缓解(PR),7例达到稳定疾病(SD),缓解率为33.3%,疾病控制率为80.00%,均高于化疗组;中位无进展生存期为3.23月(95%CI:1.589~4.871)。加用阿帕替尼常见不良反应为手足综合征、胃肠反应、肝损伤及高血压,药物毒性等级基本为1~2级。结论:阿帕替尼联合化疗治疗ALK耐药快速进展的非小细胞肺癌,临床效果较为确切,毒性作用和不良反应可耐受,值得在临床中进一步研究。

转化生长因子β受体Ⅱ在EML4-ALK融合基因阳性肺腺癌患者肿瘤组织中的表达及其对H3122细胞侵袭力的影响

目的探讨转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβRⅡ)在棘皮动物微管相关蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因阳性肺腺癌患者肿瘤组织中的表达及对人EML4-ALK阳性肺腺癌细胞H3122侵袭力的影响。方法纳入EML4-ALK阳性肺腺癌患者18例,其中ⅠA期11例,ⅢA期7例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测患者肺癌组织中TGFβRⅡmRNA的表达量。构建TGFβRⅡ沉默质粒(TGFβRⅡ-shRNA)及阴性对照(NC-shRNA)质粒,进行慢病毒包装后转染H3122细胞,并将转染TGFβRⅡ-shRNA、NC-shRNA质粒的细胞设为LV-shRNA-TGFβRⅡ-H3122组、LV-shRNA-GP-H3122组,测定两组细胞的侵袭能力。结果ⅠA期与ⅢA期肺腺癌组织的TGFβRⅡmRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0. 05)。LV-shRNA-TGFβRⅡ-H3122组通过Transwell的细胞数多于LV-shRNA-GP-H3122组(P <0. 05)。结论 TGFβRⅡmRNA在早期与中晚期EML4-ALK阳性肺腺癌组织中的表达无明显差异,但沉默TGFβRⅡ基因后EML4-ALK阳性肺腺癌细胞侵袭性明显增强。

EML4-ALK融合基因异形及其相关耐药性的研究进展

肺癌的发病率及病死率较高,以年轻非吸烟女性易患为特点,其中肺腺癌占非小细胞肺癌的50%以上。由棘皮动物微管相关蛋白样4(EML4)和间变淋巴瘤激酶(ALK)融合成的EML4-ALK是肺腺癌最具有特点的致癌基因。随着对分子学认识的加深,目前发现了约17种EML4-ALK融合异形,不同的融合异形具有不同的分子结构,结构的差异决定着融合异形的作用,目前关于不同融合异形是否会影响分子靶向药物疗效的研究较少,且结论尚不统一。

13例EML4-ALK融合基因阳性非小细胞肺癌的临床病理分析

目的探讨棘皮动物微管相关类蛋白4(EML4)-间变性淋巴瘤激酶(ALK)融合基因阳性非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床病理特征。方法回顾性分析13例EML4-ALK融合基因阳性的NSCLC患者的临床病理特征,采用HE染色观察组织病理学特征,免疫组化染色法检测组织胸苷酸合成酶(TS)的表达情况,DNA扩增后直接测序法检测组织表皮生长因子受体(EGFR)及K-Ras的突变情况,并分析该亚型肺癌患者培美曲塞的疗效。结果 13例EML4-ALK融合基因阳性NSCLC患者均为腺癌,男性5例,女性8例,中位年龄48岁,4例有吸烟史。10例NSCLC组织为腺泡样结构,其中6例伴有胞内或胞外黏液;所有患者均未检出EGFR和K-Ras基因突变,3例TS高表达,10例TS低表达;7例曾接受培美曲塞化疗方案,疾病控制率为85.7%,中位疾病进展时间为5.5个月。结论 EML4-ALK融合基因阳性NSCLC多见于不吸烟的年轻女性腺癌患者,多为伴有黏液产生的腺泡样结构,不同时合并EGFR和K-Ras突变,组织中TS低表达,大部分对培美曲塞化疗较敏感。

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变和EML4-ALK融合基因表达的研究

目的研究广西地区非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变和棘皮动物微管相关类蛋白4与间变性淋巴瘤激酶（EML4-ALK）融合基因表达的情况。方法分别采用扩增耐突变系统（ARMS-PCR）法和实时荧光定量PCR扩增检测119例NSCLC患者EGFR基因外显子18~21的突变和9种EML4-ALK融合突变体,同时分析其与临床病理特征的关系。结果 119例NSCLC患者共检出44例EGFR基因突变,检出率为37.0%,检出7例EML4-ALK融合基因阳性表达,检出率为5.9%。其中EGFR基因突变主要见于腺癌、女性、不吸烟患者;EML4-ALK融合基因表达可能与不吸烟有关,而在性别、年龄、肿瘤病理类型、淋巴转移方面比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;EGFR基因突变与EML4-ALK融合基因不共存。结论广西地区NSCLC患者的EGFR基因突变率与EML4-ALK融合基因阳性表达率与中国其他地区总体水平接近,均具有一定临床病理特征。

Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者EML4-ALK、EGFR基因突变状态及生存分析

目的探讨棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶(EML4-ALK)和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态与未经系统酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)治疗的Ⅳ期维吾尔族非小细胞肺癌(NSCLC)患者长期生存的关系。方法收集97例未经TKIs治疗的Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者的组织标本,分别运用FISH及ARMS方法检测EML4-ALK基因融合及EGFR基因突变状态并进行生存分析。结果 97例Ⅳ期维吾尔族NSCLC组织中,6例(6.2%)存在EML4-ALK基因融合,26例(26.8%)存在EGFR基因突变。生存分析显示,EML4-ALK基因融合患者与EML4-ALK基因未融合患者总生存期(OS)差异无统计学意义(P=0.941),EGFR基因突变患者与EGFR野生型患者OS比较差异无统计学意义(P=0.607)。EGFR/EML4-ALK综合突变对Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者长期生存发现,EGFR突变型组、EML4-ALK阳性组、EML4-ALK阴性+EGFR野生型组患者中位OS分别为17.7、17.3、16.2个月,差异无统计学意义(P=0.915)。结论在排除TKIs治疗影响的情况下,EML4-ALK融合基因与EGFR基因突变状态尚不能作为评估Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者预后的独立因素。

EGFR与EML4-ALK基因突变共存型非小细胞肺癌1例

近年来,驱动基因是非小细胞肺癌（NSCLC）研究的热点,尤其在肺腺癌,已经取得了可喜的成果。其中表皮生长因子受体（EGFR）、棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶（EML4-ALK）及K-Ras等基因的研究结果逐渐改变了人们对NSCLC发生、发展生物学本质的认识,针对上述靶点的靶向干预,可以说是NSCLC治疗史上一个重要＂里程碑＂。

非小细胞肺癌恶性胸水中癌细胞EML4-ALK重排检测及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者恶性胸水(MPE)中癌细胞EML4-ALK基因重排的可行性及与其病理特征之间的关系。方法选取138例伴有MPE的NSCLC患者,用瑞氏染色法鉴定MPE中的癌细胞,用免疫组织化学法鉴定肿瘤组织中EML4-ALK基因重排,运用微流控芯片技术检测NSCLC患者MPE中癌细胞,采用荧光染色法确定癌细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ALK基因重排状态。结果在138例NSCLC患者中,肿瘤组织免疫组织化学(IHC)染色有10例EML4-ALK基因阳性,qRT-PCR检测到10例EML4-ALK融合基因重排。IHC和qRT-PCR的一致性为100%,两者敏感性和特异性均为100%。ALK基因重排状况与患者EGFR突变等差异有统计学意义(P<0.05),而与病理分型、原发部位、临床分期及淋巴结转移等差异无统计学意义(P>0.05)。结论 qRT-PCR检测NSCLC患者MPE中癌细胞EML4-ALK融合基因是筛选ALK基因重排方法的一种补充,值得在临床中推广。

非小细胞肺癌EGFR基因突变与EML4-ALK融合基因的表达及其临床病理特征

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)、动物微管相关蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因表达及其临床病理特征。方法收集病理确诊的NSCLC患者213例,采用扩增阻滞突变系统(ARMS)检测EGFR基因的突变状态,RT-PCR法检测EML4-ALK融合基因表达情况,分析突变与临床病理特征的关系。结果 EGFR基因突变率为25.35%,女性、腺癌、非吸烟患者突变率显著较高(P<0.05)。EML4-ALK融合基因表达率为2.82%,女性、腺癌、60岁以下非吸烟人群突变率显著较高(P<0.05)。未发现两个基因共同突变的病例。结论 NSCLC患者存在EGFR基因、EML4-ALK融合基因突变,均以女性、腺癌、非吸烟者表达较高。

EML4-ALK在非小细胞肺癌中的表达及检测

非小细胞肺癌(NSCLC)为当今最常见的恶性肿瘤之一,近年来我国肺癌的发病率和病死率增长迅速,已居癌症相关死亡首位。分子靶向治疗已成为晚期NSCLC治疗的研究热点之一,靶向药物如何针对性地用于患者的治疗是关键。棘皮动物微管结合蛋白4(EML4)与间变淋巴瘤激酶(ALK)形成的融合基因主要表达于NSCLC中,这可能是与NSCLC表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药相关的新靶点。

慢性阻塞性肺疾病合并非小细胞肺癌与EML4-ALK融合基因的关系

目的探究慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并非小细胞肺癌(NSCLC)与棘皮动物微管相关蛋白样4-间变淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因的关系。方法选取COPD合并NSCLC患者70例为COPD合并NSCLC组,另选取同期收治的单纯COPD患者70例为单纯COPD组,分别采集手术治疗过程中肺癌组织及COPD患者正常肺组织,采用免疫组化法分析EML4-ALK蛋白的表达,采用logistic回归分析影响COPD合并NSCLC患者发生的危险因素。结果单纯COPD组、COPD合并NSCLC组患者性别、年龄、体质指数(BMI)比较,差异无统计学意义(P>0.05);与单纯COPD组比较,COPD合并NSCLC组患者吸烟人数比例、PASP水平、EML4-ALK蛋白阳性表达率较高,FEV1、FEV1/FVC水平较低(P<0.05)。肺癌组织中EML4-ALK蛋白阳性表达与COPD合并NSCLC患者年龄、性别、肿瘤最大径、分化程度无关(P>0.05),与吸烟史、组织学类型、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。FEV1/FVC指标降低、吸烟、EML4-ALK蛋白阳性表达是影响COPD合并NSCLC患者发生的危险因素(OR=1.694,95%CI:1.375~2.087;OR=2.013,95%CI:1.682~2.409;OR=3.249,95%CI:2.346~4.450;P<0.05)。结论肺癌组织中EML4-ALK蛋白阳性表达率较高与COPD合并NSCLC吸烟史、组织学类型、TNM分期及淋巴结转移有关,是影响COPD合并NSCLC发生的独立危险因素。

间变型淋巴瘤激酶融合基因与非小细胞肺癌的治疗

在非小细胞肺癌的治疗中,继表皮生长因子受体(EGFR)基因突变之后,间变型淋巴瘤激酶(ALK)融合基因作为特异性酪氨酸激酶抑制剂的靶点也成为研究热点。美国食品药品管理局(FDA)已于2011年批准克唑替尼用于ALK融合基因阳性非小细胞肺癌患者的治疗,但耐药是影响长期生存的主要问题。本文综述ALK融合基因的形成机制,ALK融合基因阳性非小细胞肺癌患者的检测和治疗现状。

非小细胞肺癌患者浅表淋巴结组织中表皮生长因子受体基因和EML4-ALK融合基因的突变状态

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者浅表淋巴结转移灶组织中表皮生长因子受体（EGFR）基因和棘皮动物微管相关蛋白样4-间变性淋巴瘤激酶（EML4-ALK）融合基因的突变状态.方法 对2013年2月至2014年11月就诊于北京军区总医院40例NSCLC患者的转移灶浅表淋巴结组织使用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）技术检测EGFR基因及EML4-ALK融合基因的表达率,并分析二者与临床特征之间的关系以及给予靶向治疗的效果.结果 淋巴结组织中EGFR基因突变率为35.0％ （14/40）,不吸烟和腺癌患者EGFR突变率分别为50.0％ （10/20）和46.7％ （14/30）;EGFR18外显子突变1例,19外显子缺失突变8例,21外显子错义突变5例.EML4-ALK融合基因的突变率为2.5％ （1/40）.NSCLC患者淋巴结中EGFR基因突变主要见于不吸烟（P＜0.05）、腺癌（P＜0.01）人群,而与患者性别、年龄、分期无明显相关性（均P ＞0.05）;靶向治疗对有基因突变者有较高的疾病控制率（93.3％）.结论 NSCLC患者浅表淋巴结中可以检测出EGFR基因和EML4-ALK融合基因,EGFR基因突变多见于腺癌和不吸烟者;EML4-ALK融合基因突变率较低.

山东地区非小细胞肺癌分子靶向治疗驱动基因表达情况及临床特征分析

背景与目的分子生物学靶向治疗已逐渐成为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的一个重要治疗手段,本研究通过分析山东地区NSCLC多种驱动基因表达情况及临床病理特征,为筛选分子靶向治疗目标人群提供理论依据。方法采用荧光探针PCR法检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、棘皮动物微管相关蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule-associated protein-like 4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)、肉瘤致癌因子-受体酪氨酸激酶(ROS proto-oncogene 1,receptor tyrosine kinase,ROS1)、鼠类肉瘤病毒癌基因(Kirsten rat sarcoma viral oncgene,KRAS)基因表达情况,回顾性分析阳性病例的临床病理特征。结果 EGFR基因突变阳性率为36.70%,主要为19、21外显子突变,突变人群主要为女性、腺癌、不吸烟患者,组间差异有统计学意义。EML4-ALK融合基因重排阳性率为9.37%。人群特征主要为60岁以下不吸烟人群,组间差异有统计学意义,基因突变与病理类型和性别间无明显差异。ROS1融合基因重排阳性率为3.67%,均为60岁以下患者,组间差异有统计学意义。23份病例标本开展KRAS基因检测,阳性标本数2例,阳性率为8.70%。2份阳性标本均为60岁以上病例,男女各占1例,病理类型均为腺癌,均无吸烟史。此外,未发现有两种基因同时突变的病例。结论 EGFR、EML4-ALK、ROS1、KARS基因在NSCLC患者中存在较高的突变率,且具有不同的人群特征,在选择靶向治疗人群中具有重要意义。

EML4-ALK融合基因阳性分子靶向药物研究进展

非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）患者中棘皮动物微管相关蛋白-间变性淋巴瘤激酶（EML4-ALK）融合基因阳性率约为2%~5%。随着精准医疗时代的到来,以EML4-ALK融合基因为靶点的抑制剂将更大程度上改善NSCLC患者的生活质量和预后。近年来,大量创新、高效的ALK抑制剂如雨后春笋般涌现,包括已上市的克唑替尼、色瑞替尼和艾乐替尼等。此外,在研的抑制剂中,ASP3026,TSR011,AP26113,PF-06463922,X376,X396以及Entrectinib也表现出较好的开发前景。本文将对EML4-ALK的生物学特征以及上述分子靶向药物进行综述。

分子靶向治疗在非小细胞肺癌中的研究进展

肺癌以发病率高、死亡率高、5年生存率低位居全球癌症死亡原因的首位，而非小细胞肺癌占肺癌的80％～90％［1］，其中腺癌约占38％［2］，已超过鳞癌成为最常见的病理类型。迄今为止非小细胞肺癌最有效的根治方式是外科手术，然而约3／4患者初诊时已处于癌症晚期，失去了外科手术的机会。因此，含铂两药化疗是标准一线治疗方案，但其仅能使晚期非小细胞肺癌患者死亡率下降26％～32％，5年生存率＜1％［3］。

ALK阳性非小细胞肺癌靶向治疗研究进展

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)微管相关蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因靶点的小分子抑制剂克唑替尼治疗的最新进展、耐药机制以及耐药后的策略,为临床应用提供参考。方法搜索Pub Med和EMBase数据库以及中文万方数据库的关于NSCLC中ALK阳性的最近3 a相关文献,了解ALK融合基因及其靶向药物的最新研究进展。结果针对ALK融合基因靶点的小分子抑制剂克唑替尼和一线标准化疗方案治疗ALK阳性晚期NSCLC患者的对比,结果显示有良好的临床疗效及耐受性,但存在克唑替尼的耐药问题。结论EML4-ALK融合基因靶向药物克唑替尼明显改善了NSCLC患者的生存质量以及生存期,但克唑替尼耐药问题有待于更好地解决,使ALK阳性NSCLC患者得到最大的临床受益。