ResolvinE1对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用

背景 以往防治角膜移植术后排斥反应的药物存在诱发局部或全身不良反应的风险，研究表明resolvinE1（RvE1）能够调节辅助性T细胞1（Th1）型免疫反应，但其对高危角膜移植术后的植片排斥反应有无抑制作用尚不清楚。目的观察高危角膜移植动物模型局部应用RvE1对植片免疫排斥反应的抑制作用。方法 以BALB/c小鼠为受体、C57BL/6小鼠为供体行角膜移植术。采用随机数字表法将90只BALB/c小鼠随机分成异体角膜移植组、异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组，每组各30只。BALB/c小鼠右眼先用缝线法刺激2周以建立高危角膜移植眼模型，然后行穿透角膜移植术。异体角膜移植组和异体角膜移植＋RvE1组小鼠右眼行异体角膜移植，自体角膜移植组小鼠将右眼角膜植片旋转180°后缝合于植床上。异体角膜移植组及自体角膜移植组小鼠术后每日用生理盐水10 μl结膜下注射1次，异体角膜移植＋RvE1组小鼠术后同法注射终质量浓度为0.1 μg/μl的RvE1 10 μl，连续7 d。术后裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜植片反应并对其排斥反应进行评分。术后21 d处死各组小鼠各20只，收集小鼠术眼角膜、眼球和术眼侧颈部淋巴结，采用苏木精－伊红染色法观察各组小鼠角膜植片的组织病理学变化；采用免疫组织化学法检测术眼角膜中CD4及γ干扰素（IFN-γ）的表达；采用流式细胞术检测术眼侧颈部淋巴结淋巴细胞中Th1细胞（CD3＋CD8a－IFN-γ＋）比例；采用荧光定量PCR法检测Th1细胞相关因子白细胞介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IFN-γ及T-bet mRNA的相对表达水平。结果 异体角膜移植＋RvE1组小鼠角膜植片存活时间为（28.5±1.7）d，明显长于异体角膜移植组的（14.0±1.6）d，差异有统计学意义（t＝4.14，P〈0.001），自体角膜移植组小鼠植片在术后50 d存活率为100%。苏木精－伊红染色显示，异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组小鼠角膜植片水肿及炎性细胞浸润程度均轻于异体角膜移植组。免疫组织化学法检测显示，各组角膜全层均有CD4表达，而IFN-γ主要表达于角膜上皮层，异体角膜移植组小鼠角膜组织中CD4和IFN-γ阳性细胞数均明显多于异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组。流式细胞术检测显示，异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组小鼠淋巴细胞中Th1细胞比例分别为（1.07±0.25）%和（0.85±0.12）%，明显低于异体角膜移植组的（1.56±0.20）%，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。荧光定量PCR检测显示，异体角膜移植组小鼠角膜中IL-2、TNF-α、IFN-γ及T-bet mRNA的相对表达量明显高于异体角膜移植＋RvE1组和自体角膜移植组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论 RvE1可抑制小鼠高危角膜移植排斥反应，作用机制可能与其下调角膜植片和淋巴细胞中Th1细胞及相关细胞因子的表达有关。

阻断血管内皮生长因子C促进角膜移植后新生淋巴管和血管的“分离生长”（英文）

背景:角膜淋巴管有利于角膜抗原的运输,从而加速了抗原提呈的进程,在角膜免疫中起着重要的作用。然而,由于角膜移植后角膜新生血管和淋巴管呈"平行"生长,因而很难对淋巴管在移植免疫中所起的具体作用大小作出准确的评估。目的:通过阻断血管内皮生长因子C的表达,探索角膜移植后角膜新生淋巴管和血管的生长变化。方法:建立同种异体角膜移植的大鼠模型130只,将受体大鼠随机等分为血管内皮生长因子C拮抗组和对照组。血管内皮生长因子C拮抗组大鼠在移植后第2天起腹腔注射单克隆抗体,隔天1次,连续2周,阻断角膜移植后血管内皮生长因子C的表达。对照组大鼠注射生理盐水。结果与结论:(1)血管内皮生长因子C拮抗组大鼠角膜中血管内皮生长因子C的表达水平显著下降。在对照组中,角膜新生淋巴管和血管呈"平行"生长;(2)在血管内皮生长因子C拮抗组中,血管面积轻度减少,而淋巴管面积呈显著性减少(P<0.05);(3)在对照组中大鼠角膜排斥指数与血管面积、淋巴管面积均呈显著性正相关,而在血管内皮生长因子C拮抗组大鼠角膜中虽然排斥指数与血管面积显著性相关,但排斥指数与淋巴管面积间无相关性;(4)血管内皮生长因子C拮抗组中植片平均存活时间明显大于对照组;(5)说明拮抗血管内皮生长因子C后,角膜新生淋巴管和血管间出现了"分离生长";而拮抗血管内皮生长因子C可以有效抑制角膜移植后的角膜新生淋巴管,从而提高植片的存活率。