柿属植物基因组DNA提取方法比较

针对柿属植物叶片富含单宁,常规CTAB法提取DNA质量低等问题,为了获得符合柿属植物SSR-PCR扩增要求的DNA,分别采用改良CTAB法和植物基因组DNA提取试剂盒两种方法,提取柿属植物DNA,结果显示:两种方法均可得到满足SSR-PCR扩增要求的DNA;试剂盒较改良CTAB法提取的DNA质量高、杂质少,DNA得率略低,但其操作步骤简单,耗时短,毒害小,因其费用较改良CTAB法高,各实验室可根据自身条件选择适宜方法提取柿属植物DNA。

木本植物基因组DNA提取及鉴定

采用改良后的CTAB法，对山葡萄、软枣猕猴桃、蒙古栎、核桃楸、西伯利亚红松和偃松基因组DNA进行提取。结果表明，所提基因组DNA分子量与XDNA（48kb）接近，其紫外吸收比在1．66～1．89之间。第3次和第4次上清提取的DNA质量优于第1次和第2次。从提取产量看，每克鲜重提取DNA量最小为15μg·g^-1（核桃楸第4次上清），最高的为272μg·g^-1（山葡萄第3次上清）。西伯利亚红松和偃松第1次和第2次上清基本未提出DNA，第3次和第4次上清中得到了较高质量的DNA。经酶切鉴定和PCR扩增，所提的基因组DNA可以用于进一步研究。

植物基因组DNA提取与纯化研究进展

对近年来植物基因组DNA的提取方法与纯化方法的研究进展进行综合评述,并比较了不同提取及纯化方法的优缺点,旨在为植物基因组DNA的研究提供技术参考。

改良CTAB法对山茶属植物基因组DNA提取的比较研究

山茶属植物体内酚类、多糖等次生代谢物质含量较高,获得高纯度的总DNA比较困难。为筛选出适宜山茶属植物基因组DNA的较优提取方法,并研究不同材料处理方法的差异,采用四因素三水平的正交设计,对山茶属植物基因组DNA的提取方法 CTAB法进行优化。最后确定较优提取方法为:老叶用CTAB-free去除多糖并防止酚氧化,用2%CTAB、2%PVP、24∶1抽提2次;嫩叶用2×CTAB去除多糖并防止酚氧化,用1%CTAB、2%PVP、24∶1抽提1次,并用ISSR-PCR检测。结果显示采用优化方案提取的DNA质量更好,能较好地溶于TE,可用于ISSR-PCR扩增,且扩增出清晰的条带。

植物基因组DNA提取方法学评析与验证

分子生物学实验多以提取研究对象的基因组DNA作为研究的起点,由于材料的来源、部位、形态等外在性质的不同,以及化学成分、组织结构等内在特点的差异,常会需要在提取基因组DNA时选择不同的方法,或作一些特殊的处理,如有的植物组织含有较多的多糖及酚、酯、萜等次生代谢产物,从而会影响到所提DNA的纯度及随后的实验分析。因而选择一种简单、快速而高效提取基因组DNA的方法常常成为实验中关键的一步。近几年来已有不少关于通用提取方法的报道,另外一些专属性的方法也有了较大进展。本文拟对这些方法加以总结、比较,以期对它们各自的特点作一剖析,并加以实验改进验证,以期能够在今后的实验中更好地应用。

针茅属植物基因组DNA提取方法的研究

植物体内所含的蛋白质、酚类、单宁、色素及多糖等物质影响Tag酶的聚合效率,是使PCR扩增反应失败的主要因素。本研究以针茅属植物为材料,对CTAB法、SDS法、简易提取法和高盐沉淀法提取的针茅DNA进行了比较研究,结果表明:CTAB法适合于针茅属植物基因组DNA的提取,采用这种方法提取的DNA能很好的用于PCR扩增。

一种广泛适用于植物基因组DNA提取的方法

[目的]研究植物基因组DNA提取方法,为从植物组织中快速提取基因组DNA提供指导。[方法]在已发表的植物基因组DNA提取方法基础上,对SDS提取法的操作步骤、试剂用量及作用时间进行了优化。[结果]初步建立了一种广泛适用于各类植物及植物多种组织器官的基因组DNA提取方法。所提取的基因组DNA质量较好,满足下一步操作的要求。[结论]该研究结果为植物基因组DNA的快速提取提供了指导方法。

植物基因组DNA提取方法综述

本文介绍植物基因组DNA提取原理、植物组织的取材及保存、DNA提取和纯度检测的方法,分析了根据采集条件、植物生长发育时期和试验条件等的不同,采用不同的植物组织取材和保存方法;根据研究目的、研究对象等的不同,采取不同的DNA提取方法,表明了要提取高纯度的植物基因组DNA,必须从植物组织的采集、保存、预处理和基因提取过程等环节严格加强操作,确保下一步试验顺利进行。

壳斗科5属植物基因组DNA提取方法研究

植物体内所含的蛋白质、酚类、单宁、色素及多糖等物质影响Tag酶的聚合效率,是使PCR扩增反应失败的主要因素。本研究以壳斗科植物为材料,对CTAB法、SDS法提取的DNA进行了比较研究,结果表明:CTAB法适合于壳斗科植物基因组DNA的提取,采用这种方法提取的DNA能很好的用于PCR扩增。

食品中植物基因组DNA提取方法的分类及其研究进展

食品中植物基因组DNA的提取是其进行DNA指纹图谱构建、遗传多样性分析、种质资源评估等研究的基础工作,选择合适的DNA提取方法 ,分离出高纯度、足产量的DNA是进行基因检测的重要前提。该文对近些年食品中植物基因组DNA的提取方法进行初步归类总结,并对技术研发前景进行展望。

沉香属植物基因组DNA提取及SSR反应体系的优化

以白木香为材料,研究沉香属植物基因组DNA提取方法 ,并优化SSR-PCR反应体系。通过改良CTAB法提取白木香叶片基因组DNA,经电泳和吸光度检测。优化影响白木香SSR-PCR主要参数,确立适合沉香属植物的SSR-PCR反应体系和扩增条件:在20μL反应体系中,模板DNA、引物、Mg2+、dNTP和Taq DNA聚合酶等5种主要成分的最适浓度分别为2.5 ng/μL、1μmol/L、2 mmol/L、0.2 mmol/L、1.2 U;并用9份沉香属植物DNA样品对SSR-PCR反应体系验证,能扩增清晰条带。SSR优化系统的建立为进一步利用SSR分子标记技术进行白木香种群及不同地区沉香属种群遗传多样性研究提供基础。

几种药用植物基因组DNA提取方法研究

采用改良2×CTAB法和改良SDS法提取富含多糖和次生代谢物质的几种药用植物不同器官基因组DNA,并用紫外分光光度计分析,凝胶电泳和PCR扩增进行鉴定。结果表明:改良2×CTAB法和改良SDS法均能有效去除不同药用植物材料中的蛋白质、多糖、酚类及其他次生代谢物质,获得较高质量基因组DNA。但与改良SDS法相比,改良2×CTAB法提取的基因组DNA质量更好。

药用绞股蓝属植物基因组DNA提取方法比较

从叶片中提取高质量的DNA是进行绞股蓝分子生物学研究的前提。植物基因组DNA的提取方法较多,笔者以安康平利县产绞股蓝属植物幼嫩叶片为材料,通过采用改良的CTAB法、改良SDS法和高盐低pH值法三种方法提取绞股蓝基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳对所提取DNA样品进行质量检测。结果显示高盐低pH值法提取的DNA电泳主带较亮且点样孔基本无异物,为绞股蓝叶片DNA提取比较适宜的方法。

落花生属植物基因组DNA提取及鉴定

以落花生（ArachisL.）嫩叶为材料,在传统CTAB法的基础上加以改良,建立了落花生基因组DNA的CTAB提取方法。结果表明：所提取的DNA经核酸蛋白含量测定得A260/A280处于1.84~1.95,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品均具有一条明亮主带且无拖尾现象。表明改进的CTAB法提取得到的DNA完整性好,纯度高,可有效应用于后续的分子标记等研究。

植物基因组DNA提取和纯化实验的改进

通过调整离心条件、剪去移液枪头、二次离心、滤纸吸附等操作步骤后,提取的DNA纯度较好,浓度较高,提高了CTAB法提取和纯化植物基因组DNA的效率和效果。

水热法制备磁性微球及其在植物基因组DNA提取分离中的应用

[目的]建立一种适用于多种植物组织快速提取基因组DNA的方法。[方法]以水热反应制备出Fe_3O_4磁性纳米微球,并对其粒径、形貌、磁学性质等进行表征分析,并以此作为核酸提取载体,对多种新疆特色经济作物和植物的叶片、根、茎、籽粒等组织进行DNA的提取分离,并优化分离纯化过程的各环节。[结果]通过OD_(260)紫外吸收值的检测、琼脂糖凝胶电泳,结果显示,用该方法纯化得到的植物基因组DNA纯度高、完整性好,能够满足下游分子生物学操作对基因组DNA质量的要求。[结论]建立了一种简便、快速、普适的从多种植物组织中获得高产量和高纯度的基因组DNA,为全自动化、规模化提取DNA提供了理论和实践基础。

畲药十二时辰及其混淆品基原植物基因组DNA提取及鉴别

【目的】建立一种快速经济的提取畲药十二时辰基原植物基因组DNA的方法,实现通过分子生药学方法准确鉴别该中草药的真伪,为进一步开发应用该福建地区特色中草药奠定基础。【方法】采用CTAB法、改良CTAB法、试剂盒法、SDS法、高盐低pH法提取十二时辰基原植物叶片基因组DNA,采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量和完整性,用优选后的方法提取其基因组DNA,与其混淆品DNA分别进行双向测序,评价该分子生药学方法的鉴别效果。【结果】改良CTAB法提取得到的DNA纯度较高,SSR引物扩增与ITS2序列扩增均可得到清晰明亮的条带,是提取畲药十二时辰基原植物基因组DNA的最佳方法。用该方法提取得到的基因组DNA经PCR扩增后的产物可用于双向测序,进而鉴别它的基源,实现与常见混淆品的准确区分。【结论】本研究建立的改良CTAB法能有效地提取畲药十二时辰的基因组DNA,方法操作简单、提取得到的DNA质量较好,可用于畲药十二时辰与其混淆品的分子生药学鉴别。

3种褐黄血蜱基因组DNA提取方法的比较

目的在保持褐黄血蜱Haemaphysalis flava寄生蜱虫体形态完整的前提下,综合比较95℃水浴法、改良碱裂解法、离心柱法3种提取方法对蜱组织DNA提取质量的差异,筛选适用于蜱鉴定分型的高效稳定基因组DNA提取方法。方法取蜱标本的一只足作为实验样本,通过95℃水浴法、改良碱裂解法和离心柱法分别提取样品中基因组DNA,检测提取物浓度以及A260/A280和A260/A230比值,并通过PCR技术检测蜱分型相关基因16S rDNA(16S ribosoma DNA,16S核糖DNA)、ITS2(internal transcribed spacer 2,内转录间隔区2)的片段扩增效率,综合分析3种提取方法的优劣。多组之间使用单因素方差分析(ANOVA检验),两组之间比较采用t检验分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果3种提取方法均可获得足量的蜱基因组DNA,改良碱裂解法提取效率显著高于其他2种方法(P<0.05),A260/A280和A260/A230比值结果表明离心柱提取法获得的DNA纯度更高,进一步的PCR实验表明,在模板量一致的情况下,以离心柱法提取的DNA为模板扩增产生的16S rDNA、ITS2片段扩增效率更高,而以95℃水浴法提取的DNA为模板扩增产生的16S rDNA、ITS2片段效率较低。结论离心柱法是提取蜱基因组DNA高效且实用的方法,能够在保持虫体形态完整的情况下满足对寄生蜱进行后续基因分型实验的要求。

外周血基因组DNA提取试剂盒的改良

对现有DNA提取试剂盒进行改良,减少DNA提取成本,寻找经济、稳定的提取方法。将96份血液标本分为A、B两组,各48份,组内按外周血体积分为250μL、500μL、750μL三组。A组(试剂盒法)采用杭州倍沃医学科技公司的血液基因组小量提取试剂盒(离心柱型),B组(改良法)使用3%明胶吸附白细胞代替试剂盒法中分离白细胞的步骤,其余步骤同试剂盒法。采用紫外分光光度计、凝胶电泳、荧光定量PCR比较两种提取方法不同体积外周血DNA提取效果。与试剂盒法相比,改良法250μL DNA提取得率稍低,差异无统计学意义(P>0.05);改良法500μL、750μL DNA提取得率及500μL的OD_(260)/OD_(280)值均显著高于试剂盒法(P<0.01),差异具有统计学意义。琼脂糖凝胶电泳发现两种方法提取的DNA条带均完整,无拖尾现象,定量PCR扩增后两者产物融解曲线均为单峰,Ct值差异无统计学意义。本实验中改良全血DNA提取法在提取大量血体积DNA时具有优势,是一种经济、稳定、高效的DNA提取方法。

丹参基因组DNA提取方法比较研究

目的:为了探究最适合丹参基因组DNA的提取方法。方法:本研究以丹参叶片为材料,采用不同的方法提取其基因组DNA,通过凝胶电泳检测其完整度、微型分光光度计检测浓度及纯度、看家基因扩增等进行比较,以选择出最适宜的提取方法。结果:应用碱裂解煮沸法、尿素法不能得到完整DNA;4×CTAB法所得的DNA有RNA污染;SDS冰浴法、PVP-40法和尿素法提取的DNA有蛋白质和酚类污染;改良尿素法所得DNA的看家基因扩增效果不好;1.5×CTAB法、2×CTAB法和高盐低pH法提取的DNA能保证看家基因的扩增。结论:2×CTAB法提取的DNA浓度和纯度高,可用于后续相关分子生物学研究。